全 文 ：第 24 卷 第 4 期 三峡大学学报 (自然科学版 )
J of h C in aT h r e e Gr o g e s Un iv
.
(N at ur al S e ien e e s)
V ol
.
2 4 N o
.
4
2 0 0 2 年 8 月 A u. g2 0 0 2
H P L C结合 AP IM S / M S法研究屏边三七的皂试成分
邹
l (
. 三峡大学 化学与 生命科 学学院 ,
一 , 富山 9 3 0一 0 1 9 4 , 日本 )
冲 ’ 朱 妹 “
湖北 宜 昌 4 4 3 0 0 3 ; 2
,
J
、松力、勺子 2
富山 医科药科大 学和 澳 菜研究所菜劲 解析七 夕 夕
摘要 : 应用 H P L C 与 A P I一 M S / M S 相结合 , 分析 了屏边 三 七 9 5 % 乙醇提取物的 三 菇皂戒成分 , 结果
表明 , 屏边三 七 除含有屏边三 七皂钱 R , , R 。 外 ,还含有少量人参皂式 R b , , R c , R b 3 和 R .d
关键词 : 屏边三 七 ; 人参皂试 ; H P L C ; A IP 一 M S
中图分类号 : 0 6 2 2 . 2 5 + 6 . 5 文献标识码 : A 文 章编号 : 1 0 0 7一 7 0 8一《2 0 0 2 ) 0 4一 0 3 5 5一 0 3
A n a l y s i s o f S a P o n i n s o f P a n a x S t i P u l e a n a t u s b y U s i n g H P L C a n d
A P IM S / M S T e c h n i q u e s
Z o u K
u n , Z h u S h u Z K a t s u k o K o m a t s u Z
( 1
.
C o l l e g e o f C h e m i s t r y 乙 L i f e S e i e n e e , C h i n a T h r e e G o r g e S U n i v . , Y i。 h a n g 4 4 3 0 0 3 , C h i n a ; 2 . R e s e a r e h e e n -
t e r f o r E t h n o m e d i e i n e s
,
T o y
a
m a M e d i e a l a n d p h a r m a e e u t i e a l U n i v e r s i t y
,
T o y a m a 9 3 0
一
0 1 9 4
,
J
a p a n )
A b s t r a e t T r i t e r p e n o id s a p o n i n s o f P a 刀 a x 、 t i P u l e a n a t u 、 w e r e e l u e i d a t e d
,
b a s e d o n H P L C a n d A P IM S / M S a n
-
a l y s e s o f i t s 9 5% e t h a n o li c e x t r a e t
.
G i n s e n o s id e S R b
l ,
R C
,
R b
。 a n d R d f o u n d t o b e p r e s e n t in r h i s d r u g a s
m i n o r e o m p o n e n t s
,
b e s id e s t w o m a z o r s a p o n i n s
: s t i p u l e a n o s i d e s R
l a n d
K e y w o r d s P a 7 , a x 、 t i p u l e a n a r u s ; g i n s e n o s i d e s ; H P L C ; A P IM S / M S
屏边 三七 是人 参属植 物 p a , ,` : 二 s t i P 。 ze 。 , , 。 t u s
T as i et F en g 的干燥地 下部分 , 又称野三七 等 , 具有
散痪定痛 ,疗伤止血 , 滋补等功效 l[, 2〕 , 在 当地民间其
作用为 “ 生打熟补 ” , 即生药直接使用时具有治疗跌打
损伤的功效 ,其 肉质煮熟后具有滋补的作用团 , 其原
植物产于云南东南部的屏边 、 马关 、 麻栗坡及越南北
方的老街沙坝等海拔 1 1 0 一 1 70 o m 的热带雨林地
区比 2〕 . 杨崇仁等 〔`〕曾从屏边三七 甲醇提取物 中分得
两个新的齐墩果烷皂贰 ,该课题组川 还从其酸水解物
中检出过微量人参二醇 、 人参三醇皂贰元 ,但对其化
学成 分 尚 缺 乏 系 统 研 究 , 本 文 利 用 H P L C 结 合
A IP M S/ M S 方法对屏边三七 95 % 乙 醇提取物进行
了较为系统的研究 .
本实验以 H P L C 分离样品中人参皂贰 , 应用离
子喷雾电离方式产生准分子离子和碎片离子 ,使用氨
气为碰撞气诱导其二次电离产生子离子 ,对屏边三七
中所含多种人参皂贰成分进行了指定 , 并据此对其人
参皂贰成分分布模型及其种类特征进行 了讨论 .
1 材料与方法
材料与试剂 屏边三七 , 白参分别购 自云南省红
河州屏边县大围 IJ 〔1 9 9 9 年 8 月〕 , 日本长野县 ( 2 0 0 0
年 4 月 ) ,样 品标 本保存于富山医科药科大学 民族 资
料馆 ( T M P W N o . Y 一 2 8 3 和 1 9 8 9 9 ) ; 人参皂贰 R b l ,
R C
,
R b
。 , R d 标 准品从 白参分 离制得 , 屏边皂贰 R l ,
R
Z 标准品从屏边三七分离制得 . H P L C 用乙睛 ,水为
H P L C 级 , 提取用 甲醇 ,水为分析纯试剂 .
仪器与测定 条件 H P L C 条件 : J a s co P U 一 1 5 8。
泵 , J a s e o D G 一 1 5 8 0一 5 3 脱气机 , J a s e o L G 一 1 5 8 0一 0 2 混
收稿 日期 : 2 0 0 2一 0 5一 10
基金项 目 : 中日合作交流计划
作者简介 :邹 坤 ( 1 9 6 2一 ) , 男 ,教授 ,博士
三 峡 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) 2 0 0 2年 8月
合器 , J a 、 。 o M E 一 1 5 1 0 二极 管阵列检测器 , J a s e o C O -
2 5 6 5 柱温箱 , J a s e o B O R W IN 1 . 5 0 版色谱工作 站 ;
色谱柱 Y M C 一 p a e k O D导 A Q , 导 5拜m , 12 n m , 2 5 Om m
只 4 . 6 m m 1. D . ; 流动相为乙睛 一水梯度 ,初始浓度为
2 6 : 7 4
,
l o n 、 i n 为 2 2 : 7 8 , 1 5 m i n 为 2 5 : 7 5 , 2 0 m i n 为
2 8 : 7 2
,
3 4 m i n 为 3 4 : 4 6 , 4 4 m i n 为 4 3 : 5 7 , 4 8 m i n 为
8 0 : 2 0
,
5 2 m i n 为 8 5 : 1 5 , 60 m i n 为 2 0 : 8 0 ; 流速为 1 . 0
n 飞 l
·
m i n
L ;柱温 4 0 ℃ ; 检测波长 2 0 3 n n l .
M S 条件 P e r k i-n E lm e r S e ie x A l〕 11 型三级 四极
杆生物分子质谱分析仪 . 离子喷雾电离 ,界面温度 4 5
℃ , P (P ; 校正 , 流动注射引入样品 , 流速 5川 · m i n 一 ` ,
正离子源 ( )R 电压 12 0 或 2 40 V ,负离子源 O R 电压 一
10 OV 或一 12 o V , M S / M S 碰撞气 C G T 2 9 8一 3 10 .
样品制备 取干燥生药粉末 10 . 5 9 , 四倍量甲醇
回流提取五次 ,减压回收至干 , 2 . 0 m l 70 % 甲醇超声
萃取 , 。 . 4 5 拼m 膜过滤 , 70 % 甲醇稀至 30 m l , H P L C
进样每次 10 浏.
2 结果与讨论
对图 1一 A 色谱图中标 出的每一组份都进行了正
离子 A PI M S 和负离子 A PI M S 测定 , 并对部分稳定
的准分子离子进行 了子离子扫描测定 . 根据各组份
在 H P L C 上的保留时间 ,及其在 A IP M S 中的准分子
离子 、 碎片离子和子离子规律 ,确定了屏边三七中所
含主要人参皂贰的结构 .
2
.
1 液相色谱
参考文献 [ 4 ]的方法 , 通过加标准品增高色谱峰
实验 ,并结合文献「5一 7」对白参 H P L C 色谱峰的指
定 (图 1一 B ) ,将屏边三七色谱图中峰 A , B , C , O , E 和
L 分别初步指认为屏边皂贰 R : ,人参皂贰 R b l , R c ,
R b
。 ,屏边皂贰 R l 和人参皂贰 R d( 图 1一 A ) .
2
.
2 质谱
利用 A PI M S 测定了经 H P L C 分离的 12 个峰组
份的正离子 、 负离子质谱及其部分较强信号的准分子
离子的子离子谱 . 其中 H PI J C 色谱图中 ( 图 1一 A )峰
组份 F , G , H , l , J 和 K 在本实验条件下未能得 到有
效的 A IP M S 谱 ,其余峰组份的测定结果及各类离子
的归属见 T a bl e 1 .
表 1 屏边三七 的皂贰成份的 A IP M S/ M S 数据
f ) e a k s
M 5 R e 5 u 1 t s
P o s i r iv e m
o
d
e N e g a t iv e m
o d e
A S r ip Lllea n o s id e R:
公。 H , ; (飞3
1 0 8 8
1 12 7
.
5 [ M + K 」+
1 1 1 1
.
5 [ M+ Na 〕+
6 8 9
.
0
仁-M a ar 一 g l e+ H Z ( )+ K〕+
20 8 7
.
5 [-M H」
9 25
.
5
4 5 5
.
5
〔M
L阵
gl o H」-
g2 卜 gl u介 a ar 一 H。 〔) H」
B G i
n s e n o s id
e
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,
G
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H
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1 10 8
1 1 4 7
.
5 [ M+ 幻 +
1 1 3 1
.
5 「M + Na 〕+
78 9
.
5仁阵 Zg lo H Z ( )+ N a〕卜
4 2 5
.
5〔-M 4 g l-c Z H Z ( )+ H 〕+
3 6 5
.
0 [ g lo g l
e + Na 〕十
3 2 5
.
0 仁9 1二 g lo H : ( )+ H 〕`
1 10 7
.
5 仁M H」-
9 4 5
.
5 〔阵 g l-c H〕-
7 8 3
.
5 〔膝 Zg l-c H 〕
6 2 1
.
0 [M 3 g lo H 〕
4 5 9
.
5 [M 4g lo H〕
aP
r
en r = 1 0 8 7
.
5
10 8 7
.
5〔M H〕-
9 5 5
.
5 仁阵 a r二 H丁
92 5
.
5 〔-M g l -c H 〕一 7 3工. 5 〔-M g l-e a r二
(C 几一 H : ( ) 一 H ] -
P a r e n t一 110 7 . 5
11 0 7 5 仁M H〕-
9 4 5
.
8 [ -M g l-c H 〕
7 8 3
.
5 〔-M Zg l-c H ] -
6 2 2
.
5 [ -M 3 g l-c H」-
4 5 9
.
5 仁M 4 g lo H正
3 2 3
.
0 〔g l o g lo H : ( ) H」-
C G in s e n o s id e R e
G
3
H
g。
(沁名
10 7 8
川 7 . 5 〔M+ K ] -
11 0 1
.
5 [ M+ Na ]
十
1 0 7 7
.
5 〔协 H 〕-
9 4 5
.
5 [阵 a ar f H习
7 65
,
5 〔M a ar 卜g lo H 。 ( ) H」
6 2 2
.
0 〔阵 ar -f Zg lc- H」-
P a r (比I t = 10 7 7
.
5
20 7 7
.
5 〔-M H ]
5 〔胁
5 [ -M
a
ar -f H ]
-
a r a仁2 9 1。
o 〔-M a r a -f 3g l。
o 〔g l o g lo H〕 - 川
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公 : H g。 ( 沁2
1 0 7 8
1 1 1 7
.
5 〔M + 幻 +
1 1 0 1
.
5 〔M + aN ] 十
1 0 7 9
.
5 [M + H」十
1 0 7 7
.
5 〔-M H 〕
94 5
.
5 仁M 材-I H 」
GZI
.
o 〔阵xy 卜Zg lo H习
4 5 9
.
5 〔阱 x y卜3g lo H」
P a 代n t一 1 0 7 7 . 5
20 7 7
.
5 〔M H〕
9 4 5
.
5 [ -M 勺 l一 H」
6 21
.
5 〔M 材 I一 Zg lo H」
I iG 愁 e n o s id e Rd
公、 H S。 ( )15
9 4 6
96 9
.
5 [ M十 N a二+
78 9
.
5 [ -M g lo H
Z ( ) + aN 」+
5 8 7
.
5 〔-M Zg lc- Z H Z ( ) + H」+
4 2 5
.
5 〔协 3gl c- ZH Z ( ) + H ] 十
3 6 5
.
0 [ g l-e g l
e + aN 〕十
9 4 5
.
5 〔-M H丁
7 83
.
5 〔M g lo H j
6 2 1
.
5 仁M Zg卜 H」-
4 5 9
.
5 〔M 3g lo H 〕’
p a
~
二 9 4 5 . 5 9 4 6 . 0 仁协 H〕
7 8 3
.
5 〔M gl c- H」
7 65
.
5 〔M gl o H Z (卜H〕
6 2 1
.
5 仁协 Zg lo H〕-
60 3
.
5 [阵 Zgl o H : ( ) H 〕
4 5 9
.
5 〔M 3 g lo H〕
E S r ip
u
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11
了;
(入、
9 2 6
1 0 0 3
.
5 [ M + 2玲H」`
9 6 5
.
5 仁M+ K 〕+
9 4 9
.
5 [ M十 N a」+
9 25
.
5 〔-M H了
79 3
.
5 [ -M
a
a-r H〕
7 63
.
0 [ -M g lo H」
4 5 5
,
5 仁M g l o g l u-A a r a- H : (下H〕
P a r e n t = 9 2 5
.
5
9 2 5
.
5 [阵 H口-
7 9 3
.
5 仁阱 a ra- H丁
7 6 3
.
0 〔M g l o H〕-
4 7 3
.
5 〔M gl c- g h J A ~ a ra 一 H三
第 24 卷 第 4 期 邹 坤等 H P L C 结合 A IP M S/ M S 法研究屏边三七的皂贰成分
根据样品分子在正离子 ,负离子源条件下所获得
的准分子离子及部分碎片离子 ,尤其是准分子离子的
子离子谱 , 我们将峰组份 A , B , C , D , E 和 I J 分别归属
为屏边皂贰 R : , 人参皂贰 R b , , R c , R b 3 ,屏 边皂贰
R
, 和人参皂贰 R .d
2
.
3 讨论 …
{
{
3 0 0
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2 0 U
.
( ) U卜 11 1
10 0力 O
当稳定 ,与人参二醇 、 人参三醇类三菇皂贰一样 , 这两
个齐墩果烷型皂贰在本实验条件下也很难得到稳定
的加氢准分子离子峰 [M 十 H犷 ; 在负离子 电离条件
下 ,这两个皂贰的脱氢准分子离子峰「M一 H〕一 均为基
峰 ,在 O R 为一 80 一 一 18 o V 范围内均有相似峰形 .
屏边三七的主要皂贰成分为齐墩果烷型 ,这与生
长在同一地 区的另一人参属植物药 一三七 一的皂贰类
型有较大区 别 , 后者 尚未检 测 出齐墩果烷 型三菇皂
贰 ;与生长在其相邻地区 的越南人参的成分也有较大
差别 , 越南 人 参 含 有大 量奥 可 提 罗型 四 环 三菇 皂
贰困 ,这一结果与应用 t rn K 和 1 8 S r RN A 基 因序列
分析它们的碱基序列所得到的结果基本吻合闭 .
参考文献 :
图 l 屏边三七 (I 一 A )和人参 (I 一 B )的高效液相色谱 图
\ / 久丫 /
}
P r
o t o p a n a x a 〔110 1
R
,
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s e n o s i d
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杯 二 。
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R .
S t i P u l
e a n o s i d
e R I g l
u
A一 (4一
a r a P)一 3 一 g l
C
旦2
H
巨〕 杨崇仁 , 姜志东 , 周 俊 . 屏边 三七 根茎 中的两 个新 的
齐墩果酸皂贰 [ J ] . 云南植物研究 , 1 9 8 5 ( 3 ) : 1 0 3 一 1 0 8 .
[ 2〕 云南省植物研究 所 . 人 参属 植物 的 三菇成分和分类系
统 、 地理分布的关系 [ j 〕. 植物分类 学 报 , 19 75 ( 1 ) 30 一
4 5
.
[ 3 ] 朱 妹 . 人参属植物的分 子系统学解析 及其在 生药 鉴
定 中的应用 [ D ] . 富 山医科药科大学 天 然药物研 究所 ,
2 0 0 1
.
〔4〕 P a r k M K , P a r k j H , H a n S B , e t a l . H i g h 一 p e r f o r m -
a n e e
li q
u id
e h r o m
a r o g r a p h i e a n a l y s is o f g i
n s c n g s a p o n in s
u s i n g e v a p o r a t in g l ig h t
S e a t r e r in g d
e t e e t io n [ J〕. J C h r o -
m
a r o g r
,
1 9 9 6 ( 1 )
:
7 7一 8 1 .
[ s〕 e h u a n g W C , W u H K , S h e u 5 J . A e o m p a r a t iv e s t u d y
o n e o m m e r e i a l S a m p le S o f g i n s e n g R a d i x [ J〕. P la n t a
M e d
,
1 9 9 5 ( 5 )
,
4 5 9~ 4 6 5
.
[ 6〕 C o u r t W A , H e n d e l J G , E lm i J . R e v e r s e d一 p h a s e h ig h -
p e r f
o r m a n e e liq u i d e h r o m a t o g r a p h ie d e t e r m i n a t io n o f
9 in s e n o s i d
e s o
f P
a n a x q u iq u e f
o
l i
u
m [ J〕. J C h r o m a t o g r ,
1 9 9 6 ( l )
:
1 1~ 1 7
.
S t i P u l
e a n o s id
e
l t Z g l
u A一 (4 一
a r a P )一 3 一 g l
e g l
e
〔7 ]
图 2 屏边三七 中人参皂贰的结构
屏边三七 R l 与 R : 在正负离子 电离条件下均可
得到相当稳定的准分子离子 ,在正离子 电离条件下 , 〔8:
还能得到多个具有重要鉴别意义 的准分子离子 , 如
仁M + N a 〕+ , 仁M + K 〕+ , 「M + N a + K 一 H〕+ 和巨M +
Z K一 H 〕+ 等 ,这些离子在 O R 为 12 0一 2 4 o V 间均相
S
a m u k a w a K
,
Y
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H
,
M a t s u d a H
,
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u
l
-
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s is o f
s a P o n i n s i n g in s e n g R a d i
x b y h ig h
p e r f
o r m a n e e l iq u id C h r o m a t o g r a p h y 〔J〕. C h e m P h a r m
B u l l
,
1 9 9 5 ( 1 )
:
1 3 7一 1 4 1 .
N g u y e n M D
,
N g u y e n T N
,
R y oj i K
, e z a l
.
S
a p o n in s
f o r m V i e t n a m e s e G in s e n g
,
P a n a x v ie t n a m e n s is H a e t
G
r u s
h
v
C
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l l
e e t e d i
n
C
e n t r a l V i
e t n a m
.
I [ J〕 . C h e m .
P h a r m
.
B u ll
,
1 9 9 3 ( 1 1 )
:
20 1 0 ~ 2 0 1 4
.
「责任编辑 杨元启〕