全 文 ：收稿日期:2010-08 -28;　修稿日期: 2010 -10-12
基金项目:国家科技部资助攻关项目(2005BA741C)
作者简介:徐春玲(1985 -),女 ,在读硕士 ,主要从事天然产物化学成分研究。
通讯作者:郑友兰(1954 -),女 ,教授 ,主要从事天然产物化学成分研究。通讯地址:130118吉林 长春 吉林农业大学中药材学院 , E-
mail:zcx 11@126.com。
栽培与野生刺五加叶中黄酮及多糖含量的比较研究
徐春玲 1 ,张崇禧 2 ,蔡恩博1 ,李小叶 1 ,李　娇1 ,韩　雪 1 ,郑友兰1
(1.吉林农业大学 中药材学院 ,长春 130118;2.山东大学威海分校 海洋学院 ,山东 威海 264209)
摘　要:目的:测定不同生长环境及不同采收期刺五加叶中总黄酮及总多糖的含量 ,对刺五加叶的
质量进行综合评价 。方法:采用比色法测定总黄酮及多糖含量 ,分别以芦丁和葡萄糖作为对照品 ,于
500nm波长下测定吸光度 ,计算黄酮的含量;在 620nm波长下测定吸光度 ,分别计算可溶性多糖和粗多
糖的含量 。结果:在 0.05mg～ 0.5mg范围内 ,芦丁质量与吸光度 A值线性关系良好 , R2 =0.9996;在
0.0208mg～ 0.104mg范围内 ,葡萄糖质量与吸光度 A值线性关系良好 , R2 =0.9996。结论:栽培与野生
刺五加叶中总黄酮与总多糖含量差异均显著 ,且栽培明显高于野生。因此 ,栽培品可以替代野生刺五加
叶资源作药用 ,并为其进一步开发应用及质量控制奠定基础。
关键词:刺五加;总黄酮;可溶性多糖;粗多糖;总多糖
中图分类号:TQ461　文献标识码:A　文章编号:1005 -1295(2010)06 -0005 -04
doi:10.3969/j.issn.1005 -1295.2010.06.002
TheComparativeStudyoftheTotalFlavonoidandPolysaccharidesinAcanthopanax
betweenWildandBiomimeticSamples
XUChun-ling1 , ZHANGChong-xi2 , CAIEn-bo1 ,
LIXiao-ye1 , LIJiao1 , HANXue1 , ZHENGYou-lan1
(1.ColegeofChineseMedicinalMaterial, JilinAgriculturalUniversity, ChangChun130118,
China;2.MarineColege, ShandongUniversityatWeihai, Weihai264209, China)
Abstract:Object:Todeterminethecontentoftotalflavonoidandpolysaccharidesintheleavesofacantho-
panaxwhichcolectedindiferenttimes.Providesthereferencedatafortheformulationofacanthopanaxs
qualitystandard.Methods:Thecontentoftotalflavonoidandpolysaccharidesinacanthopanaxweredetermined
byColorimetry, rutinandglucosewerestandardpreparation, andwavelengthwere500nmand620nm.Re-
sults:Themassofrutin(mg)andabsorbancewerelinearintherangeof0.05mg～ 0.5mg, R2 =0.9996.and
themassofglucose(mg)andabsorbancewerelinearintherangeof0.0208mg～ 0.104mg, R2 =0.9996.
Conclusions:Thediferencesofthetotalflavonoidandtotalpolysacharidesofwildandbiomimeticsamplesare
obviouswhentextedbytest.andthebiomimeticarehigher.Soitapplytoreferenceforthequalityofacantho-
panaxsenticosusofwildandbiomimetic, andlaythefoundationforfurtherdevelopmentandapplication.
Keywords:acanthopanaxsenticosus;totalflavonoid;solubilitypolysaccharides;crudepolysaccharides;
totalpolysaccharides
　　刺五加为五加科植物刺五加 [ Acanthopanax senticosus(Rupr.etMaxim.Harms)]的干燥根及根
5
栽培与野生刺五加叶中黄酮及多糖含量的比较研究———徐春玲 , 张崇禧 ,蔡恩博 ,李小叶 , 李娇 ,韩雪 , 郑友兰
茎[ 1] ,茎 、叶可作药用 [ 2] 。刺五加见于 《神农本草
经》,被列为上品。自古即被视为具有添精补髓
及抗衰老作用的良药 。 《名医别录 》中记载刺五
加具有补中 ,益精 ,坚筋骨 ,强意志等功效 。刺五
加的黄酮类物质具有广泛的药理活性 ,对人体肿
瘤 、衰老 、心血管等退行性疾病的治疗和预防具有
重要意义 [ 3] 。刺五加中的多糖能够提高海马神
经细胞的抗凋亡能力并下调 P53的基因表达 [ 4] ,且
可以减少受损海马神经元细胞中 Fas和 Fasl蛋白
的表达 ,抑制细胞的凋亡 ,并对受损的海马神经元
有明显的保护作用 [ 5] 。
本实验测定了不同生长环境和不同采收期的刺
五加叶中总黄酮和多糖的含量 ,并对其进行比较 ,为
刺五加叶的质量进行综合评价提供参考依据。
1　材料与方法
1.1　材料
样品均于 2009年采自吉林临江 ,经吉林农业
大学园艺学院胡全德教授鉴定为五加科 (Arali-
aceae)五加属(Acanthopanax)植物刺五加 Acan-
thopanaxsenticosus(Rupr.etMaxim.)Harms的叶。
1.2　仪器
T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通
用仪器有限责任公司 );LA114 型电子天平
(0.0001 g常熟市百灵天平仪器有限公司);电子
恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司);101 -2
型数显电热鼓风干燥箱(上海锦屏仪器仪表有限
公司)。
1.3　试剂
芦丁对照品(中国药品生物制品检定所 ,批
号:086 -9303);葡萄糖 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、氢氧
化钠 、蒽酮 -浓硫酸 、乙醇等均为分析纯 。
2　试验方法
2.1　对照品溶液的制备
2.1.1　芦丁对照品溶液的制备
将芦丁对照品置 105℃烘箱中恒重 6h,精密
称取 10.00mg,用 80%乙醇溶解并定容于 100mL
容量瓶中 ,摇匀 ,备用。
2.1.2　葡萄糖对照品溶液的制备
将葡萄糖置 60℃烘箱中 1h, 再逐渐升温至
105℃干燥至恒重。精密称取 10.40mg,置 100mL容
量瓶中 ,用蒸馏水溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,备用。
2.2　标准曲线的绘制
2.2.1　黄酮标准曲线的绘制
分别精密量取芦丁对照品溶液 0.0、 0.5、
1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,均移入 25mL容量瓶
中 ,分别加入 80%乙醇至 5mL,加入质量分数为
5%的 NaNO2溶液 1.0mL,摇匀 ,静置 6min;加入
质量分数为 10%的 Al(NO3)3溶液 1.0mL,摇匀 ,
静置 6min, 加入质量分数为 4%的 NaOH溶液
10mL, 再加 80%的乙醇至刻度 , 摇匀 , 放置
15min。以 80%乙醇为空白对照液 ,均于 500nm
波长处测定吸光度 。以吸光度值 A为纵坐标 ,浓
度(mg/ml)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程
y=0.0468x-0.0128(R2 =0.9996),如图 1。结
果表明 ,芦丁检测质量在 0.05 ～ 0.5mg范围内线
性关系良好。
图 1　黄酮标准曲线
2.2.2　多糖标准曲线的制备
取 16支试管 ,分 5组做三次平行实验 ,另取
一组空白试液 ,均按表 1加试剂 ,于 620nm处测
定吸光度 ,记录数据 ,见表 1。以吸光度 A为纵坐
标 ,质量 mg为横坐标 ,绘制标准曲线 ,其回归方
程为 y=5.0817x+0.0327﹙ R2 =0.9996﹚ ,结
果表明 ,葡萄糖检测质量在 0.0208 ～ 0.104mg范
围内线性关系良好 。
表 1　标准曲线试液的制备 (mL)　
试剂 0 1 2 3 4 5
葡萄糖标液 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0
蒽酮 -浓硫酸 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
吸光度(A) 0.000 0.138 0.242 0.358 0.449 0.563
2.3　样品待测液的制备
2.3.1　总黄酮待测液的制备
精密称取刺五加叶样品 0.5 g(恒重),每个
样品都称取 3份(3次平行),分别置于 50 mL具
塞锥形瓶中 ,分别精密加入 80%乙醇 30 mL,浸泡
一夜 ,密塞超声提取 30 min,重复 3次 ,合并提取
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包装与食品机械　2010年第 28卷第 6期
液 ,摇匀 ,过滤 ,转移至 100 mL容量瓶中定容 ,再
移取供试品溶液 1.0 mL于 25 mL容量瓶中 ,分别
加入 80%乙醇至 5 mL,并按 “2.2.1”项下的方法
依次加入显色剂 ,以 80%乙醇为空白 ,同法配制
空白对照液 ,待测。
2.3.2　可溶性多糖待测液的制备
精密称取刺五加叶样品 0.5 g(恒重),每个
样品都称取 3份(3次平行),分别置于 50 mL具
塞三角瓶中 ,加 80%乙醇 30 mL,浸泡一夜 ,密塞
超声提取 30 min,重复 3次 ,过滤(保存滤渣), 3
次滤液置 100 mL容量瓶中 ,以 80%乙醇定容至
刻度 。再取可溶性多糖提取液 5.0 mL,分别置于
25 mL容量瓶中 ,用 80%的乙醇定容至刻度 ,混
匀。分别取 1.0 mL可溶性多糖提取液加入具塞
试管中 ,加入蒽酮 -浓硫酸试剂 5.0 mL,混匀 ,同
时另取一支具塞试管加 80%乙醇 1.0 mL,加入蒽
酮 -浓硫酸试剂 5.0 mL,作为空白实验 。置沸水
浴中加热 10 min,冷却至室温 ,待测 。
2.3.3　粗多糖待测液的制备
将取过可溶性多糖后的滤渣蒸干 ,加 2%的
盐酸 30 mL,置沸水浴中提取 lh,充分放冷 ,于
100 mL容量瓶中滤过 ,重复提取 2次 ,过滤 ,洗涤
滤纸 ,以 2%HC1定容至刻度 ,各取粗多糖提取液
2.5 mL,分别置于 25 mL容量瓶中 ,用 2%的盐酸
定容至刻度 ,混匀 ,分别取 1.0 mL粗多糖提取液
加入具塞试管中 ,再加入蒽酮 -浓硫酸试剂 5.0
mL,混匀 ,同时另取一支具塞试管加入 2%的盐酸
1.0 mL,再加入蒽酮 -浓硫酸试剂 5.0 mL,混匀 ,
作空白实验。置沸水浴中加热 10 min,冷却至室
温 ,备用。
3　结果与分析
3.1　方法学考察
3.1.1　精密度实验
分别精密称取已知总黄酮和总多糖含量的刺
五加叶粉末各约 0.5 g,按样品测定操作连续测 5
次 ,测得吸光度并计算含量 , RSD分别为 0.34%
和 0.29%(n=5)。
3.1.2　稳定性实验
取已知总黄酮和总多糖含量的刺五加叶供试
品溶液 ,分别于 0, 2, 4, 6, 8 h测吸光度 , RSD分
别为 1.14%和 1.43%,结果表明供试品溶液在
8h内吸光度均基本稳定(n=5)。
3.1.3　重复性实验
平行 5次称取已知总黄酮和总多糖含量的刺
五加叶样品 ,制备供试品溶液 ,进样测定 , RSD分
别为 1.72%和 1.46%(n=5)。
3.1.4　回收率实验
分别精密称取已知总黄酮和总多糖含量的刺
五加叶样品粉末各 0.5g, 5份 ,置于磨口锥形瓶
中 ,分别加入芦丁标准品溶液 2mL和葡萄糖标准
品溶液 0.5mL,按前述样品处理法提取 ,并按样品
测定项操作 ,计算黄酮与多糖的含量和回收率 ,平
均回收率分别为 100.32%和 100.28%, RSD分别
为 0.223%和 0.230%(n=5)。
3.2　实验结果
分别于 500nm、620nm、620nm处测定待测样
品中总黄酮 、可溶性多糖 、粗多糖的吸光度 ,并计
算其含量 ,结果见表 2。
表 2　刺五加叶样品中黄酮及多糖含量(%)测定结果
时间 来源 黄酮 可溶性多糖 粗多糖 总多糖
2009.5.19 栽培 9.037 14.883 9.602 24.485
2009.5.19 野生 2.641 2.105 20.884 22.989
2009.5.29 栽培 4.692 1.941 17.959 19.900
2009.5.28 野生 2.541 5.358 9.825 15.183
2009.6.8 栽培 2.684 1.075 19.166 20.241
2009.6.8 野生 1.715 3.036 9.995 13.031
2009.6.19 栽培 1.886 0.996 18.247 19.243
2009.6.18 野生 1.615 3.738 7.896 11.634
2009.7.24 栽培 3.880 5.739 12.396 18.135
2009.7.23 野生 1.259 0.052 12.055 12.107
2009.8.3 栽培 4.792 2.052 22.708 24.760
2009.8.2 野生 1.117 1.265 16.109 17.374
2009.8.13 栽培 4.108 6.736 13.459 20.195
2009.8.12 野生 1.402 1.147 17.329 18.476
3.3　结果与分析
表 3　栽培与野生刺五加叶化学成分统计分析
化学成
分测定
生长
环境
平
均
值
方差齐性检验 T检验
F Sig. t Sig.(2-tailed)
总黄酮 栽培 4.440 2.591 0.11 3.003 0.011
野生 1.756
可溶性多糖 栽培 4.775 3.804 0.258 1.188 0.258
野生 2.386
粗多糖 栽培 16.220 0.045 0.258 1.118 0.285
野生 13.441
总多糖 栽培 20.994 1.575 0.015 2.826 0.015
野生 15.827
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栽培与野生刺五加叶中黄酮及多糖含量的比较研究———徐春玲 , 张崇禧 ,蔡恩博 ,李小叶 , 李娇 ,韩雪 , 郑友兰
　　由表 3可以看出 , T检验的双尾渐进显著性概
率 [ AsymP.sig.(2 -tailed)]的总黄酮和总多糖均
小于 0.05,可以认为不同生长环境中刺五加叶中
总黄酮和总多糖含量差异显著 ,且栽培品含量显
著高于野生品 。
4　小结与讨论
　　由于栽培品含量明显高于野生 ,因此 ,栽培刺
五加叶可以替代野生资源应用 ,这对野生刺五加
叶资源具有生态保护作用。
　　由表 2可知 ,栽培与野生刺五加叶中总黄酮
与总多糖含量均在 5月中下旬达到较高值 ,此时
为植物生长的成熟期 ,因此活性成分含量最高 ,而
在 6月中旬出现较低值 ,此后直至 6月中旬 ,总黄
酮含量逐渐降低 ,至 8月中旬又呈上升趋势 。而
总多糖含量从 5月至 6月中旬呈逐渐下降的趋
势 ,直至 8月中旬又呈上升趋势。因此 ,综合总黄
酮和总多糖指标 ,确定刺五加叶最佳采收期为 5
月中下旬 。这不仅为刺五加叶的综合质量评价奠
定了基础 ,且为其进一步开发利用提供参考依据 。
参考文献:
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马神经元凋亡及凋亡基因的影响 [ J] .广东医学 ,
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海马神经元表达 Fas和 Fasl的影响 [ J] .中国临床神
经外科杂志 , 2010, 15(7):416-418.
易格斯推出新型耐扭转光缆
　　易格斯推出新型耐扭转光缆适用于三维运动
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(吴伟)
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包装与食品机械　2010年第 28卷第 6期