全 文 ：2 0 0 3 年第 2 4卷第 3 期 水 产 养 殖 2 0 0 3 , 24 ( 3 )
不同植物激素对条斑紫菜体细胞生长发育的影响
徐建荣 姚文想
(常熟高等专科学校生物系 , 21 55 00)
陆勤勤 许 璞
(江苏省海洋水产研究所 ,南通 226 0 7)
摘要 用添加不 同浓度植物激素 ( BI A 和 6一 B )A 的 PE S 培养液对条斑紫菜体细胞进行培养 , 观察其对条斑紫菜体细胞生
长发育的影响。 结果表明 : 晦解的条斑紫菜近墓部体细胞离体培养可发育成细胞团和叶状体 ,低浓度的 BI A 有利于体细胞 向叶
状体方向发育 , 而低浓度的 6一 B A 有利于体细胞发育成细胞团 。
关键词 条斑紫菜 体细胞 P E S BI A 6一 B A 细胞培养
T h e I n n u e cn
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D u ir n g th e e u lt u r e o f i s o la t e d e e ll s Of OP 印入厂。 少。 。 e o is in d ife er n t e o n e e n t ar t io n I B A a n d 6 一 B A m e d i a o f P E S , t h e i r e fe e t s w e 。
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紫菜离体细胞的培养在我国始于上世纪 80 年
代川 。 只有在海螺酶的发现和使用后才开始大规模
的培养研究 〔 2’ ` 3 ’ , 应用酶法分离的紫菜体细胞进行
紫菜育苗在生产中已获得初步成功 `4 ’ `5 ’ 。 但到目前
为止仍有不少技术问题尚未完全解决 , 影响了酶法
体细胞育苗的推广应用 。 关于条斑紫菜体细胞培养
条件的研究 , 仅限于温度 、 光照强度等方面 , 至于植
物激素作用方面的研究 ,报道很少 `9 ’ 。本试验用一种
植物生长素引噪丁酸 ( BI A ) 和一种植物细胞分裂素
6一节基腺嚓吟 ( 6一 B )A 作为基本培养基 P E S 的补
充成分 , 并用基本培养基 P E S 作对照 , 目的是探索
植物激素对条斑紫菜体细胞生长发育的影响 , 以期
为条斑紫菜体细胞育苗提供一定的技术支持 。
1 材料与方法
1
.
1 试验材料 试验用 的条斑紫菜 ( oP , 妙 a
笋叮。 e sn is) 叶状体采自江苏省南通市如东海面人工养
殖网帘。 挑选成熟的紫菜用干净海水冲洗 , 去除附
着的泥沙 , 放至弱光处阴凉吹干 (水份控制在 10 -
20 % )
, 再放到 一 4 ℃的电冰箱冷冻室保存 。 试验前
取出用过滤海水恢复培养 ,备用 。
1
.
2 实验方法
1
.
2
.
1 酶液和 P E S 培养液的制备 酶液 : 试验用
对紫菜细胞酶解有特效的海螺酶进行紫菜体细胞
的制备 , 本试验所用 的海螺酶由苏州大学沈颂东提
供 。 P E S 培养液是海藻组织 、 细胞离体培养中最常用
的培养液之一 , 在紫菜组织 、 细胞离体培养中效果
很好 , P E S 培养液的配方见表 1 。
1
.
2
.
2 体细胞酶解和单细胞 的收集 从恢复培
养的紫菜中选取健康完整 、 色泽鲜亮的藻株 , 切去
边缘成熟果抱子区域 , 选取没有成熟的藻体近基部
收稿 日期 200 3 一 0 1 一 2 0
20 0 3年第 2 4卷第 3期 水 产 养 殖0 0 2 3, 2 4 ( 3 )
细胞 ,在消毒海水中用毛笔反复刷洗数遍 ,再放入加
有 1% K l 的消毒海水中消毒 1 5 一 20 分钟 ,取 出后在
消毒海水中略作漂洗 , 用刀片切碎 。 再用消毒海水
冲洗并滤去胶质 , 用吸水纸吸干水份 ,然后加人到已
经预热的酶液 ( s ml 海螺酶 + 2 9 葡萄糖 )中酶解 。 酶
解时温度控制在 25 ℃ 一 28 ℃ , 酶解时间为 2 一 3 小
时 。 酶解结束后用 30 0 目筛绢过滤 、并以 10 0 0 r / m i n
离心收集单细胞 , 然后用高渗海水清洗 2 一 3 次 , 最
后用 P E S 培养液悬浮细胞 , 并调整紫菜单细胞密度
至 10 4 一 10 5 细胞 / m l 备用 。
表 1 PE S 培养液配方
消毒海水 ( 1 . 0 2 0 ) 1 00 0m z
N
a
N
o o 5 6 m g
p
一 甘油磷酸钠 s m g
维生素 B , 80 u g
维生素 B : 2 l . 6 u g
生物素 0 . s ug
rT i
s
o
,
s m g
N a Z E D T A
C
o
SO
; ·
7 H 20
Z
n
C 1
2
M n S0 4
·
4 H ZO
eF SO
;
·
7 H
2
0
F e C I ,
·
6 H
2
0
N
a Z
B
;
0 7
·
10 H
Z
O
5
.
s gm
0
.
o l 9 2 m g
0
.
0 4 2m g
0
.
4 9 7 m g
Z m g
0
.
19 6m g
2 8
.
0 4m g
1
.
2
.
3 细胞 的培养 在已消毒的培养皿中放人一
载玻片 , 用一吸管吸取已调整好密度的紫菜悬浮细
胞液 , 在每个载玻片上滴 3 一 4 滴紫菜悬浮细胞液 ,
为防止紫菜悬浮细胞液干掉 , 可在载玻片四周滴加
少量 P E S 培养液 (不能淹没载玻片 ) , 盖上培养皿
盖 , 让紫菜悬浮细胞固着 12 小时后 , 然后再加人不
同激素种类和浓度的各种培养液 , 直至培养液淹没
载玻片 。 培养液的浓度为 IB A ( m g / l ) : 10 0 、 5 0 、 10 ;
6一B A (m g/ l ) : 50 、 10 、 l , 每种浓度进行了两个平行
培养 。 另设一组直接加 P E S 培养液作为对照 。 3 天后
观察其成活情况 , 以后每隔 3 一 5 天观察紫菜体细胞
的生长发育情况 。 培养条件 : 温度为 19 一 21 ℃ ,光照
强度 1 2 0 0 一 1 s o o l x ,每隔 7 天换一次培养液 。
2 结果与分析
2
.
1 条斑紫菜体细胞的生长与发育分化 刚酶解
的条斑紫菜体细胞为墨绿色 , 由于酶解条斑紫菜未
加其它商品酶 ,所以酶解结果不是很理想 ,单细胞和
原生质体比例较少 , 大部分为 2 细胞或几个细胞聚
在一起 , 给早期计数带来很大麻烦 ;培养第三天成活
的细胞转成橙红色或红色 , 有的细胞已分裂为 2 细
胞 ,死细胞为绿色 ;影响紫菜体细胞成活率的因素很
多 , 主要与酶的质量 、酶解时间和紫菜质量等条件有
关 。 培养 巧 天可看到有的紫菜体细胞已发育成多细
胞叶状体小紫菜 , 有的紫菜体细胞发育成细胞团或
没有假根的畸形紫菜细胞团 。 结果见表 2 。 由表 2 可
见 , 由成熟条斑紫菜近基部细胞酶解得到的体细胞
离体培养发育成正常叶状体小紫菜的比例只有 13/
左右 , 而大部分体细胞发育成细胞团或没有假根的
畸形紫菜体细胞团 ; 不同种类和浓度的植物激素对
紫菜体细胞发育有明显的影响 。
2
.
2 不同浓度植物生长素 (BI A ) 对紫菜体细胞生
长发育的影响 不同浓度植物生长素 (BI A ) 对紫菜
体细胞生长发育的影响见图 1。 由图 1可见高浓度
BI A 不利于紫菜体细胞发育成叶状体 , 10 (m g l/ ) 浓
表 2 紫菜体细胞的生长发育情况
培养液 浓度
( m g / l )
细胞团总数 叶状体总数 叶状体比例 (% ) 细胞团比例 (% )
1 0 0 1 1 8 2 6 1 8
.
1 8 1
.
9
2 0
.
9
5 6
.
7
7 9
.
1
4 3
.
3
39
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0 6 1
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32
1 6
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