全 文 ：巨延匡回妇吸团恤哑回皿连恤匹哑娜
掌叶覆盆子黄酮提取工艺研究
刘玉艳 ` ,李志宝 2 , 高 飞 `
, 柳河县人民 医院药剂科 吉林柳河 13 5 30 ,
吉林修正药业集团通化市制药有限公 司
t中图分类号 〕R 9 17 [文献标识码」A 「文章编号」1 671
吉林通化 1 3 4 0 0 1
一
3 14 1 ( 2 0 0 4 ) 05
一 1 32 3 一 0 2
〔摘要」通过二因素三水平实验方案 , 在 钊乙醇 )为 0 . 5 , 0 . 7 , 0 . 9 时于 h3 , h6 , 外 提取掌叶覆盆子果实
中总黄酮 ,确定提取的最佳条件为 ,用索氏提取器在 8 0℃下 , 甲 (乙醇 ) = 0 . 5 ,提取 6 h 。 以芦丁为标样 ,用分光
光度法测出掌叶覆盆子果实中 。 (总黄酮 )为 1 . 53 % 。
[关键词」掌叶覆盆子 ; 总黄酮 ;定性分析 ;含量测定
O 引言
掌叶覆盆子 ( uR b us hc in sl Hul )又称树葛 、 华东覆盆
子 、 牛奶母等 ,属蔷薇科悬钩子属植物川 。 其浆果具有新
鲜的色泽 , 营养丰富 , 尤其维生素 C 含量较高 , 除供鲜食
外 ,主要用 于深加工 , 是加工成果汁的最好原料 [2 ] 。 掌叶
覆盆子果实还可人药 , 有益肾 、 固精 、 缩尿之功效 , 用于
治疗肾虚遗尿 、 小便频数 、 阳疾早泄 、 遗精滑精 〔” 。 研究
证实 , 掌叶覆盆子果实中含有黄酮及其贰类 、 强心贰类 、
内醋 、 香豆素及其贰类 、 葱醒及其贰类 、 酚性成分 、 水解
蹂质和缩合蹂质等多种有效成分 4l[ 。
黄酮类化合物是植物代谢过程中产生的一类重要天
然有机化合物 , 是药用植物中主要活性成分之一 , 具有消
除自由基 、 抗氧化 、 抗过敏 、 抗感染 、 抗突变和雌激素样作
用等生理活性 , 且毒性较低 , 因此还可用作食品 、 化妆品的
天然添加剂 ,如甜味剂 、 抗氧剂 、食用色素等 。 3a0 来 , 黄酮
类化合物一直是国外研究开发利用的热点 , 仍是寻找有开
发应用前景的先导化合物和生物活性的源泉 l5] 。
我国掌叶覆盆子种类多 , 分布广 , 适应性强 , 资源丰
富 , 具有广阔的开发利用前景 , 目前研究多集中在引种
栽培 , 资源调查 , 营养成分 , 挥发性成分 , 饮料开发等方
面 6[ 一 `“ 1 , 对掌叶覆盆子果实黄酮提取和含量测定的研究
尚未见报道 。 本文以乙醇为溶剂 , 对掌叶覆盆子果实中
总黄酮进行提取并测定其含量 , 为掌叶覆盆子综合开发
利用提供依据 。
1 材料和仪器
1
.
1 材料 掌叶覆盆子 2 0 0 年采 自安徽省黄山市黄
山区 。 果实经干燥 、 粉碎 ,过 20 目筛后装人塑料袋备用 。
1
.
2 仪器 UV 一 7 54 分光光度计 (上海第三分析仪器
厂 ) , D Z KW 一 型电子恒温水浴锅 (黄哗市渤海电器厂 ) ,
Z FG 一 8 5 A 旋转蒸发器 (上海 医械专机厂 ) , S H B 一 B95 型
循环水式多用真空泵 (郑州长城仪器厂 ) , 索氏提取装
置 ,酒精比重计 。
1
.
3 试剂 工业酒精 , 乙醇 (甲 二 0 . 95 , 化学纯 ) , 石油
醚 (化学纯 ) , 亚硝酸钠 , 硝酸铝 , 氢氧化钠 , 镁粉 , 浓盐
酸 ,三氯化铝 , 乙酸铝 (以上均为分析纯 ) 。
2 测定方法
2
.
1 检识 实验 [川
2
.
1
.
1 提取液制备 精密称取样品 10 9 , 加入 l o m L
乙醇 ,水浴加热回流 Z h ,过滤得乙醇提取液 。
2
.
1
.
2 方法和结果 包括 : ①盐酸 一镁粉试验 取试
液 l m L 加人少许镁粉 , 振荡 , 再加浓盐酸 4 一 5 滴 , 加热
3 m in
, 观察到溶液迅速显蓝色 , 说明含有黄酮醇 、 二氢黄
酮和二氢黄酮醇 ; ②三氯化铝试验 将试液滴于滤纸
上 , 吹干 , 然后喷 m (三氯化铝 ) : m (乙醇 ) 二 :1 9 溶液 ,
吹干后 ,置于紫外灯下观察显蓝色荧光 ,说明含有 4 一 经
基黄酮或 7 , 4 一 二经基黄酮醇 ; ③铅盐沉淀试验 取试
液 Zm L , 滴加乙酸铝试剂 , 观察到有红色沉淀 , 说明存在
黄酮类化合物 ; ④氢氧化钠试验 取试液 Zm L 滴加氢氧
化钠溶液 ,观察到有红色沉淀 ,说明存在黄酮醇 。
2
.
2 黄酮含量测定
2
.
2
.
1 黄酮标 准曲线的绘制 精密称取 120 ℃烘箱
干燥至恒重 的芦丁标样 Z o m g , 用 叫乙醇 ) = 0 . 6 的溶液
定容至 10 0 m L 容量瓶中备用 。 量取该液 25 m L 置 50 m L
容量瓶中 , 加水稀释至刻度 , 量取上述溶液 O , 1 . 0 , 2 . 0 ,
3
.
0
,
4
.
0
,
5
.
o m L 于 10m L 容量瓶中。 精密加人 。 (亚硝酸
钠 ) = 5% 的溶液 0 . 3m L 摇匀 ,放置 6m in ,再加人 。 (硝酸
铝 ) = 10% 的溶液 0 . 3 m L , 放置 6m i n , 加入 l m o l / L 氢氧
化钠溶液 4 . o m L ,用水稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 巧而 n ,用
7 54 型紫外可见分光光度计在 5 10 n m 波长处测定吸光
度在浓度为 0 , 0 . 0 1 , 0 . 0 2 , 0 . 0 3 , 0 . 0 4 , 0 . 0 5 9 · L 一 ` 时 ,吸
光度为 0 , 0 . 1 1 8 , 0 . 2 3 1 , 0 . 3 18 , 0 . 4 2 6 和 0 . 5 3 9 , 回归方
程 : A = 10 . 5 8 8 6 C + 0 . 0 0 7 3 ( A : 吸光度 C : 浓度 m g ·
m L
一 ’
)
,绘制标准曲线并计算回归方程 。
2
.
2
.
2 黄酮含量测定 将测得的样液吸光度值带人
标准曲线方程得浓度 C ,将 C 带人下式得总黄酮含量 。
掌叶覆盆子果实总黄酮含量 % = C x V / M x l o %
( e
: 浓度 m g / m L , V = 10 m L , M : 树幕果实质量数 m g /
s m L
,试样液 ) 。
2
.
3 提取工艺的优选 l2[ 】 精密称取 5 9 试样 , 用脱脂
滤纸分成 2 小包 ,装人索氏提取器中 ,加入 160 m L 乙醇 ,
按预定时间提取 ( 表 ) l温度控制在 8 0℃ 「” 〕 。 将所得提取
液抽滤二次 , 再用旋转薄膜蒸发仪浓缩至一定体积 , 移
入分液漏斗中 ,并将洗液移人 。 用石油醚 160 m L , 分二次
萃取 , 振荡数次之后 , 静置当分层明显后 , 上层石油 醚层
为浅绿色 , 下液层为杏黄色 , 将下层液体放出 ,上层液体
从上 口倒人回收瓶 。 将残留石油醚在水浴锅上蒸去 , 经
二次过滤 , 用相应浓度的乙醇溶液定容至 10 0 m L , 移取
Zm L 置于 ZOm L 容量瓶中 ,定容备用 。
表 1 因素水平表
水 平 甲乙醇 提取时间 (h)
八j`UQr0
.
50
0
.
7 0
0
.
90
2
.
4 各提取物总黄酮含量测定 精密吸取 s m L样品
溶液置于 10 m L 具塞试管中 , 加人 。 (亚硝酸钠 ) = 5% 的
溶液 0 . 3 m L , 摇匀 , 放置 6 m i n 后加人 。 (硝酸铝 ) = 10%
溶液 0 . 3m L , 6m in 后再加人 lm ol · L 一 ’ 的氢氧化钠溶液
4
.
Om L
, 稀释至刻度 , 摇匀 , 静置 巧m in , 于波长 5 1On m 处
进行比色测定 , 以不加样的空 白参比 (平行测定三次 ) 。 将
测得的各吸光度值带人回归方程 ,计算测定结果 (表 3 ) 。
3
.
2 索氏提取法是循环提取 , 滤纸筒内外浓度差较大 ,
提取充分 , 且其样品用量少 , 易于过滤 , 故本实验采用索
氏提取法 。
3
.
3 提取液中含有叶绿素等杂质影响 , 将提取液浓缩
后趁热用石油 醚脱脂 , 除去叶绿素等溶于石油醚的成
分 , 此处理可以提高树毒总黄酮含量测定的准确性 , 保
证实验的重复性 。
3
.
4 本试验采用络合分光光度法 , 其操作简单 ,测试设备
价廉 ,应用普遍 ,不失为一种好的测定总黄酮的方法 l川 。
3
.
5 本实验采用乙醇提取法 ,提取率和黄酮含量较高 ,
提取物较易浓缩过滤 , 且工业酒精价格低廉 , 适宜大规
模生产是一种好的提取溶剂 。
3
.
6 由于本实验所选方案中 ,实验因素选择较少 ,故其结
果在放大实验中不一定完全适用 ,有待于进一步研究 。
3
.
7 随着提取时间 的增加 , 提取液中的总黄酮含量增
加 , 但 中(乙醇 ) = 0 . 9 0 溶液提取时 , 提取 g h 比 喇乙 醇 )
= 0
.
5 0 溶液提取 6 h 的总黄酮含量低 , 由于提取时间过
长 , 部分黄酮分解 ,且浪费溶剂 , 虽然 叫乙醇 ) 二 0 . 90 溶
液提取含量较高 ,但不宜采用 。
参 考 文 献
表 2 实验安排及结果
吸光度
序号 抓乙醇 ) B 时间
( h )
1 2 3
总黄酮
含量
( % )
0
、
170
0
. 如8
0
.
3 17
0
.
203
0
.
27 8
0
.
17 1
0
.
4 10
0 315
0
.
198
0 277
0 3以
0 2 32
0
.
29 1
0
.
362
0
.
6 1
5317024
飞曰6Q气」
1
.
12
0
.
86
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成U, .且qé
67
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25023600
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.
38 1
507卯900,1,产工内,ú4ù勺`U0
2
.
5 试液的制备和总黄酮含量的测定 精密称取 5 9
样品 ,按照 2 . 3 项方法 ,用 甲 (乙醇 ) = 0 . 5 0 溶液热提 6 h ,
将制备的试液吸取 s m L , 按照 2 . 4 项方法测定总黄酮含
量 (平行测定三次 ) , 所得吸光度值为 0 . 4 07 , 0 . 4 09 和
0
.
40 9
, 将其带入 回归方程 , 得出掌叶覆盆子干燥果实中
。 (总黄酮 )含量为 1 . 53 % 。
3 讨论
3
.
1 检识实验表明掌叶覆盆子成熟干燥果实含有黄酮
醇 、 二氢黄酮 、 二氢黄酮醇等多种黄酮类成分 。 通过二因
素三水平实验 , 选出最佳提取工艺为索氏提取器 , 侧 乙
醇 ) = 0 . 50 溶液在 80 ℃恒温下热提 h6 ,经重复实验该工
艺较合理 。 实验得出掌叶覆盆子干燥果实中 。 (总黄酮 )
含量为 1 . 5 3% 。