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薜荔中的总黄酮含量测定研究



全 文 :第 14 期
收稿日期:2015-06-30
基金项目:湖南省科技计划一般项目(2014NK3053)
作者简介:张朝辉(1980-),女,湖南涟源人,讲师,硕士,主要从事色谱与药物分析研究,(电话)0731-84637015(电子信箱)
zhangzhaohui113@126.com。
薜荔(Ficus pumila L.)是桑科榕属植物[1],主要
产自中国,其野生资源极为丰富,生长不择土壤、气
候,耐干旱,极易种植,是一种很有开发潜力的安
全、健康性新型天然植物资源。 薜荔含有丰富的黄
酮类物质,广泛分布在薜荔的叶、种子等部位[2,3]。黄
酮类化合物是一类生理活性较强的化合物,具有抗
动脉硬化、降胆固醇、抗菌、抗炎、增强免疫、抗肿瘤
等作用[4,5]。薜荔中总黄酮的提取研究对薜荔的开发
具有非常重要的意义,吴文珊等[6,7]用传统的回流提
取法对薜荔叶及花序托中的总黄酮含量进行了测
定,并对影响因素进行了探讨,取得了较好的试验
结果,但是存在耗时长、步骤繁琐等缺点。
超声波提取是利用超声波具有的机械、空化和
热效应,通过增大介质分子的运动速度与介质穿透
力以提取生物有效成分 [8,9],具有提取时间短、提高
活性成分提取率、节约能源、避免高温对成分的影
响等优点 [10]。 本研究在前人工作的基础上,探索提
取的优化工艺, 选取了超声提取技术对薜荔叶、薜
荔壳和薜荔子中的总黄酮含量进行了测定。 结果表
明,薜荔叶中总黄酮含量明显高于在薜荔壳和薜荔
子中的,为薜荔黄酮进一步开发利用提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
材料:薜荔果采集于湖南省永州市祁阳县肖家
村镇八庙村,薜荔叶采集于湖南生物机电职业技术
薜荔中的总黄酮含量测定研究
张朝辉,丁芳林
(湖南生物机电职业技术学院,长沙 410127)
摘要:采用超声提取技术对薜荔(Ficus pumila L.)叶、薜荔壳和薜荔子中的总黄酮含量进行了测定。 以亚
硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠为试剂,芦丁为对照,溶液浓度在 10~50 μg / mL 范围内与吸光度呈良好的线
性关系,线性回归方程为 y=0.519 9x+0.002 9,相关系数为 0.999 9。 在合适的提取条件下,测得薜荔叶、薜
荔壳和薜荔子中总黄酮提取率分别为 7.05%、3.94%和 2.54%。 结果表明,薜荔叶中的总黄酮含量明显高
于在薜荔壳和薜荔子中的,对薜荔黄酮的提取具有一定的借鉴作用。
关键词:薜荔(Ficus pumila L.);总黄酮;超声提取;芦丁
中图分类号:S789.2;Q946.4 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2016)14-3727-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.14.047
Research on Determination of the Total Flavonoids Content in Ficus pumila L.
ZHANG Zhao-hui, DING Fang-lin
(Hunan Biological and Electromechanical Polytechnic, Changsha 410127,China)
Abstract: Ultrasonic extraction is used to determine the total flavonoids content in leaf,shell and seeds of Ficus pumila L..
Sodium nitrite, aluminum nitrate and sodium hydroxide are used as reaction reagents, and rutin is used as standard sub-
stance. The concentration from 10 to 50 μg / mL has good linear relationship. The linear regression equation is y=0.519 9x+
0.002 9, and the correlation coefficient is 0.999 9. Under optimum conditions, the obtaining rates of the total flavonoids mea-
sured are 7.05%,3.94% and 2.54% in leaf,shell and seeds of Ficus pumila L. respectively. The results show that the content
of flavonoids in leaf is significantly higher than those in shells and seeds. This offers references for corresponding research
about the flavonoids’ extraction of Ficus pumila L.
Key words: Ficus pumila L.; total flavonoids; ultrasonic extraction; rutin
第 55 卷第 8期
2016年 4月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 55 No.7
Apr.,2016
2
1
1
Jan
14期
7
Vol. 5 No.14
Jul
湖 北 农 业 科 学 2016 年
学院藤本研究基地,样品均经湖南生物机电职业技
术学院藤本所专家进行鉴定。
试剂:芦丁标准品(上海源叶生物科技有限公
司),亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等所有试剂均为
分析纯,所用水为蒸馏水。 标准储备液及由其稀释
而成的标准溶液均置于 4 ℃冰箱中保存。
标准储备液:准确称取芦丁 10 mg,用无水乙醇
溶解,定容至 10 mL(浓度为 1 mg / mL),置于 4 ℃冰
箱中保存。标准溶液:准确移取 2.5 mL芦丁标准储备
液,用 60%乙醇稀释至 25 mL(浓度为 100 μg / mL),
置于 4 ℃冰箱中保存。
仪器:752 型紫外可见分光光度计(上海光谱仪
器有限公司),HH-600 型数显三用恒温水浴箱 (无
锡沃信仪器有限公司),KQ-100E 型超声波(昆山市
超声仪器有限公司),回流装置(北玻实验室玻璃仪
器),FW177 型中草药粉碎机(上海隆拓仪器设备有
限公司),SHA-D(Ш)循环式真空泵、RE-52C 型旋
转蒸发仪(巩义市予华仪器有限责任公司)。
1.2 方法
以薜荔叶和薜荔子为材料,考察了回流提取法
和超声提取法对薜荔总黄酮提取效率的影响。
1.2.1 回流提取法提取薜荔中的总黄酮
1)薜荔叶的提取。将新鲜采取的薜荔叶于 70 ℃
烘箱中干燥,粉碎,过 40 目筛。 称取干粉 1.00 g,加
入 60%乙醇定容至 100 mL,浸提 1 h,在 75 ℃水浴
回流 4 h。 趁热过滤,滤液冷却至室温,减压回收乙
醇,用 60%乙醇定容至 100 mL。
2)薜荔子的提取。 将新鲜摘取的薜荔果切成小
块,将果壳和薜荔子分离,薜荔子置于 70 ℃烘箱中
烘干,粉碎,过 40目筛。称取干粉 1.00 g,加入 60%乙
醇定容至 100 mL,浸提 1 h,在 75 ℃水浴回流 4 h。
趁热过滤,滤液冷却至室温,减压回收乙醇,用 60%
乙醇定容至 100 mL。
1.2.2 超声提取法提取薜荔中的总黄酮
1)薜荔叶的提取。将新鲜采取的薜荔叶于 70 ℃
烘箱中干燥,粉碎,过 40目筛。称取干粉 1.00 g,加入
60%乙醇定容至 100 mL,浸提 1 h,在 75 ℃超声 2 h。
超声频率为 40 kHz,超声功率为 100 W。 趁热过滤,
滤液冷却至室温用 60%乙醇定容至 100 mL。
2)薜荔子的提取。 将新鲜摘取的薜荔果切成小
块,将果壳和薜荔子分离,薜荔子置于 70 ℃烘箱中
烘干,粉碎,过 40 目筛。 称取干粉 1.00 g,加入 60%
乙醇定容至 100 mL,浸提 1 h,在 75 ℃超声 2 h。 超
声频率为 40 kHz,超声功率为 100 W。 趁热过滤,滤
液冷却至室温用 60%乙醇定容至 100 mL。
1.2.3 标准曲线的绘制 取 6 个 25 mL 容量瓶,按
表 1 依次加入试剂,注意每加入一种试剂时需要充
分摇匀, 并静置 1 min。 最后在室温下放置 10 min,
于 510 nm 波长处测定吸光度。
1.2.4 样品液的测定 分别准确吸取适量样液于 3
个 25 mL 容量瓶中(具体根据吸光度确定),按上述
方法依次各加入 0.75 mL 5%NaNO2 溶液 、0.75 mL
10%Al(NO3)3溶液和 10 mL 1% NaOH 溶液,用 60%
乙醇定容,摇匀,放置 10 min,同时作试剂空白;以
试剂空白为对照,于 510 nm 波长处测定吸光度。
2 结果与分析
2.1 标准曲线的绘制
以试剂空白(无芦丁对照品)作为空白对照,在
510 nm 处测定吸光度。 以总黄酮含量为横坐标,吸
光度为纵坐标,绘制标准曲线,得到线性回归方程
y=0.519 9x+0.002 9,相关系数 r2=0.999 9,结果见图
1。 结果表明,芦丁质量浓度在 10~50 μg / mL范围内
与吸光度呈良好的线性关系。
2.2 回流提取法和超声提取法提取总黄酮含量结
果比较
采用回流提取法对薜荔叶和薜荔子中的总黄
酮进行提取和测定,结果见表 2。采用超声提取法对
薜荔叶和薜荔子中的总黄酮进行提取测定,结果见
表 3。结果表明,超声提取法提取效率明显高于回流
提取法,同时具有提取时间短、操作简单等优点,是
较优的提取技术。
表 1 标准系列溶液的配制
样品
1
2
3
4
5
6
芦丁
对照
mL
0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
10%硝
酸铝
mL
0.75
0.75
0.75
0.75
0.75
0.75
60%乙醇
定容
mL
25
25
25
25
25
25
5%亚硝
酸钠
mL
0.75
0.75
0.75
0.75
0.75
0.75
1%氢氧
化钠
mL
10
10
10
10
10
10
芦丁
含量
mg
0.000 0
0.25
0.50
0.75
1.00
1.25
图 1 标准曲线
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4
总黄酮//mg
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0



y=0.519 9x+0.002 9
r2=0.999 9
3728
第 14 期
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(上接第 3726页)
2.3 超声提取法对薜荔不同部位总黄酮含量测定
采用超声提取法对对薜荔不同部位薜荔叶、薜
荔壳和薜荔子中的总黄酮含量进行测定,结果见表
4。 结果表明,薜荔不同部位中总黄酮含量测定结果
为薜荔叶>薜荔壳>薜荔子。
3 小结与结论
本研究表明,薜荔叶中的总黄酮含量明显高于
薜荔子和薜荔壳中的总黄酮含量。 在相同料液比、
提取温度等条件下,通过对超声提取和回流提取试
验结果进行比较,发现超声提取时间短,且提取效
率要明显优于回流提取。 这是由于超声提取主要通
过空化作用使薜荔中的细胞壁加速破裂,加快了细
胞中总黄酮类物质向溶剂中溶解的速度,从而加快
了黄酮类物质的提取。
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表 2 回流提取法测定结果 (单位:%)
提取率
薜荔叶
5.41 5.334.99
薜荔子
1.672.01 1.96
表 3 超声提取法测定结果 (单位:%)
提取率
薜荔叶
7.05 6.987.11
薜荔子
2.442.62 2.56
表 4 超声提取法对薜荔不同部位总黄酮含量测定结果
(单位:%)
提取率
薜荔叶
7.05 6.987.11
薜荔子
2.442.62 2.56
薜荔壳
3.853.96 4.02
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张朝辉等:薜荔中的总黄酮含量测定研究 3729