全 文 ： 制剂与炮制
收稿日期:2006-02-23;　修订日期:2006-06-10
基金项目:广西科技厅科技攻关资助项目(No. 0322024 - 4B)
作者简介:陈　勇(1961-),男(汉族),江西南昌人 ,现任广西中医学院药
学院教授 ,学士学位 ,主要从事中药质量分析教学与科研工作.
山绿茶不同炮制品中总黄酮的含量测定
陈　勇 , 谢　臻 , 李艳苓
(广西中医学院 ,广西 南宁　530001)
摘要:目的 建立山绿茶不同炮制品的质量研究方法。 方法 以芦丁为对照品 , 采用紫外分光光度法测定山绿茶不同炮
制品中总黄酮的含量。结果 芦丁浓度在 8. 112 ～ 48. 672(μg /m l)之间与吸光度值呈良好的线性关系 ,回归方程为 C =
85. 224 5A+0. 642 7, r=0. 999 0。平均回收率为 101. 24%, RSD =2. 73%。结论 该测定方法灵敏 , 简便 , 重现性好 , 可用
于山绿茶不同炮制品的质量控制。
关键词:山绿茶;　总黄酮;　芦丁;　紫外分光光度法
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)11-2166-02
Determ ination of Total F lavonoids in D ifferent Processed Products of Ilex
hainanensisM err
CHEN Y ong, XIE Zhen, LI Yan-ling
(Guangx i TCM College, Nanning , Guangxi 530001, China)
Abstract:Objective To estab lish the evidence fo r qua lity o f d iffe rent proce ssed produc ts o f I lex hainanensisM err. M ethods Ru-
tin as the standard and using ultravio let spec tropho tome ter to de term ine the content o f to ta l flavono ids in Ilex hainanensisMerr.
R esu lts The linear relate ionship of ru tin w as good from 8. 112 (μg /m l) to 48. 672 (μg /m l), C =85. 2245A +0. 6427, r=
0. 999 0. The ave rage recove ry w as 101. 24%(RSD =2. 73%). Conc lu sion Th is m ethod is accu ra te, sim ple and reproduc ib le,
and can be applied to the qua lity control o f the d iffe rent processed produc ts of I lex hainanensisM err.
Key words:Ilex ha inanen sisM err. ;　Tota l flavono ids;　Rutin;　UV
　　山绿茶为冬青科冬青属植物海南冬青 Ilex hainanensisM err
的干燥叶 , 含黄酮类 、三萜酸类 、绿原酸 、鞣酸及山绿茶苷等成
分 [ 1, 2] , 具有清热解毒 、平肝潜阳 、活血化瘀的功效 , 临床上用于
治疗高血压病 [ 1, 2] , 文献报道 , 山绿茶降压片治疗原发性高血压
病的总有效率明显高于复方罗布麻片 [ 3] 。山绿茶在广西中药材
标准(1990年版)中收载的炮制方法有两种 , 一种为按绿茶加工
方式进行 , 即将鲜叶尽快地用 260 ～ 280℃翻炒杀青 , 接着在揉搓
台上用手揉搓 ,然后复炒复揉 2 ～ 3次 , 至叶色呈暗绿色 , 带有银
灰绿色 , 略有光泽为度 , 取出 , 放凉;另一种方法为原药材鲜叶直
接晒干。黄酮类成分能保持毛细血管正常的抵抗力 ,减少血管的
通透性 , 可使毛细血管恢复正常弹性 ,故有软化血管 、增加血管弹
性 , 对动脉硬化有软化作用 ,对高血压病 、糖尿病 、视网膜炎有防
治作用。为了控制山绿茶不同炮制品的质量 ,对山绿茶不同炮制
品中的总黄酮进行了含量测定 ,现报道如下。
1　仪器与试药
Ag ilent8453紫外分光光度计(美国安捷伦科技有限公司 );
BP211D电子分析天平 (德国赛多利斯 );AE100S电子分析天平
(梅特勒-托利多仪器上海有限公司 );SB3200-T超声波清洗器
(上海必能信公司);101A-2型电热鼓风干燥箱(上海实验仪器厂
有限公司)。
芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供 , 批号 0080 -
9705,供含量测定用 );山绿茶不同炮制品为:上林药材 (传统工
艺炮制)、80℃干燥 2 h药材 、 80℃干燥 1. 5 h药材 、80℃干燥 1 h
药材 、 70℃干燥 2 h药材 、 70℃干燥 1. 5h药材 、70℃干燥 1 h药
材 、 60℃干燥 2 h药材 、60℃干燥 1. 5 h药材 、60℃干燥 1 h药材 、
晾干药材 、自炒药材 , 以上原药材均购于上林县 ,并经广西中医学
院陈勇教授鉴定符合广西中药材标准(1990年版)山绿茶项下药
材品种 ,确定为冬青科冬青属植物海南冬青 Ilex hainanensisMerr.
的干燥叶 ,所用试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　对照品溶液的制备 精密称取 120℃干燥至恒重的芦丁对
照品约 25 m g,置 25 m l量瓶中 ,加 70%乙醇适量 , 置水浴上微热
使溶解 ,放冷 ,加 70%乙醇至刻度 , 摇匀。精密量取 10 m l, 置 50
m l量瓶中 ,加 70%乙醇至刻度 , 摇匀 , 即得(每毫升含无水芦丁
0. 2028 m g)。
2. 2　检测波长的测定 精密量取上述对照品溶液 2 m l于 25 m l
量瓶中 , 加水至 6 m l, 分别加 5%亚硝酸钠溶液 1 m l,摇匀 ,静置 6
m in,加 10%硝酸铝溶液 1 m l, 摇匀 , 静置 6 m in, 加氢氧化钠试液
10 m l,再加水至刻度 ,摇匀 , 放置 15 m in。以相应试剂作空白 , 照
分光光度法 [ 3] , 在 400 ～ 800 nm测定吸收光谱图 ,其最大吸收波
长为 502 nm [ 3] 。光谱图见图 1。
图 1　芦丁对照品吸收光谱图
2166
时珍国医国药 2006年第 17卷第 11期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M EDICA RESEARCH 2006 VOL. 17NO. 11　
2. 3　标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0,
5. 0, 6. 0 m l,分别置于 25 m l量瓶中 ,各加水至 6m l,分别加 5%亚
硝酸钠溶液 1 m l,摇匀 , 静置 6 m in, 加 10%硝酸铝溶液 1 m l, 摇
匀 , 静置 6 m in,加氢氧化钠试液 10 m l,再加水至刻度 , 摇匀 ,放置
15 m in, 照分光光度法 [ 3] ,在 502 nm波长处测定吸收度。以浓度
(C, μg /m l)为纵坐标 , 吸收度 (A)为横坐标绘制标准曲线 , 得回
归方程为 C=85. 224 5A+0. 642 7, r=0. 999 0。结果表明芦丁浓
度 8. 112 ～ 48. 672 μg /m l之间与吸光度值呈良好的线性关系。
标准曲线见图 2。
图 2　芦丁对照品标准曲线
2. 4　供试品溶液的制备 取本品粗粉约 0. 1 g,精密称定 , 置具塞
锥形瓶中 , 精密加入 70%乙醇 25 m l,称定重量 , 超声处理 1 h,放
冷 , 再称定重量 , 用 70%乙醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 精密
量取续滤液 2 m l,置 25 m l量瓶中 ,照标准曲线制备项下方法 ,自
“加水至 6 m l”起依法测定吸收度 , 用回归方程求出供试品溶液
中总黄酮的含量(m g),计算 , 即得。
2. 5　精密度实验 取同一供试品溶液重复测定 6次 , 平均吸收
度为 0. 344, RSD为 0. 27%(n =6), 表明精密度良好。
2. 6　稳定性实验 对同一份供试品每间隔 6 m in测定吸光度 ,在
30 m in内平均吸收度为 0. 302, RSD =1. 63%(n =6), 说明在 30
m in内显色基本稳定。
2. 7　重复性实验 取同一批药材 , 平行测定 6次 , 平均含量为
77. 35 mg /g, RSD 为 1. 87%, 表明重复性良好。结果见表 1。
表 1　重复性实验结果
编号 总黄酮含量 C /mg g-1 -C /mg g-1 RSD(%)
1 76. 07
2 77. 20
3 79. 50 77. 35 1. 87
4 76. 03
5 76. 50
6 78. 77
2. 8　加样回收率实验 取已测知含量的样品约 0. 05 g, 精密称
定 , 分别加入一定量的芦丁对照品 , 照供试品溶液制备方法处理
并测定含量。结果见表 2。
表 2　总黄酮回收率测定结果
编号 原有量 m /mg加入量 m /mg测出量 m /mg回收率(%) –x(%) RSD(%)
1 5. 08 3. 90 9. 12 103. 59
2 4. 66 4. 78 9. 35 98. 12
3 4. 65 4. 19 8. 81 99. 28 101. 24 2. 73
4 4. 30 4. 52 8. 85 100. 66
5 4. 18 4. 16 8. 53 104. 57
6 4. 51 4. 19 8. 95 105. 97
2. 9　样品测定 取药材粉末 0. 1 g,精密称定 , 照供试品溶液的制
备方法处理并测定。结果见表 3。
3　讨论
3. 1　 在提取过程中 , 曾用醋酸乙酯 -石油醚 30 ～ 60℃(3∶1)
混合溶液进行超声脱脂处理 , 发现总黄酮的含量较低 , 可能在脱
脂过程中会提取去部分黄酮类成分 ,后改用直接进行超声处理总
黄酮的提取较完全。
表 3　样品中总黄酮测定结果
编号 山绿茶不同炮制品 平均含量 C /m g g-1
1 　传统工艺炮制 79. 88
2 　80℃干燥 2 h 49. 33
3 　80℃干燥 1. 5 h 49. 43
4 　80℃干燥 1 h 53. 77
5 　70℃干燥 2 h 48. 44
6 　70℃干燥 1. 5 h 47. 33
7 　70℃干燥 1 h 48. 46
8 　60℃干燥 2 h 48. 96
9 　60℃干燥 1. 5 h 47. 71
10 　60℃干燥 1 h 53. 89
11 　晾干药材 94. 09
12 　自炒药材 118. 64
　　n=2
3. 2　 通过对山绿茶总黄酮的提取溶剂 、提取时间等因素考察 ,
确定合适的提取条件为用 70%乙醇超声提取 1 h。
3. 3　 初步实验表明:不同炮制方法 ,常导致总黄酮含量有较大
变化。山绿茶不同炮制品中总黄酮含量结果有不同变化 ,以自炒
药材含量最高;其次是晾干药材 、上林药材(传统工艺炮制 )、
80℃干燥 2 h药材 、80℃干燥 1. 5 h药材 、80℃干燥 1 h药材 、 70℃
干燥 2 h药材 、70℃干燥 1. 5 h药材 、70℃干燥 1 h药材 、 60℃干燥
2 h药材 、60℃干燥 1. 5 h药材 、 60℃干燥 1 h药材。自炒药材可
能因为炒制时间比较短 ,另外较高的温度还可以破坏药材中大部
分酶 , 故药材中黄酮类成分含量最高。而晾干药材因未受热黄酮
类成分基本不受破坏 ,但药材中酶未被破坏 ,仍有部分黄酮类成
分被分解 ,故含量次高 , 而采用 60 ～ 80℃干燥 , 因受热温度不高
但时间较长 , 使酶活性增强加速黄酮类成分的分解破坏 , 因此认
为山绿茶的炮制方法以自炒(清炒 )为佳。山绿茶不同炮制方法
与总黄酮含量的变化关系还有待进一步考察研究。
3. 4　 根据含量较多的 3, 5位羟基黄酮类化合物可与硝酸铝试
液显色后 ,在一定波长下有最大吸收峰的特点 [ 4] , 在供试品溶液
中加入亚硝酸钠试液显色后 ,采用紫外分光光度法对其进行含量
测定 , 对照品选用芦丁 , 但该方法必须在显色后 30 m in内测定 ,
因在 30 m in后 , 其吸光度会随时间急剧下降 , 影响样品测定的
准确。
3. 5　 山绿茶不同炮制品中的黄酮类成分含量都比较高 ,将其作
为降压 、降血脂 、减肥类药品或保健品值得进一步研究开发。
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LISH IZH EN MEDIC INE AND MATERIA MED ICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 11 时珍国医国药 2006年第 17卷第 11期