全 文 ： 掌叶覆盆子黄酮含量的测定研究
盛义保1 ,张存莉 1 ,马 平 2 ,童普升 1
( 1.西北农林科技大学林学院 ,陕西杨凌 712100; 2.西北农林科技大学机械与
电子工程学院 ,陕西杨凌 712100)
摘 要: 研究了用不同提取溶剂 ,不同提取时间对掌叶覆盆子黄酮进行提取。 结果表明: 黄酮提取
的最佳条件为纯甲醇提取 2 h,并测得总黄酮含量为 2. 162%。
关键词: 掌叶覆盆子 ;黄酮含量 ;测定
中图分类号 : Q946. 91+ 9 文献标识码: A 文章编号: 1001-2117( 2002) 04-0001-03
掌叶覆盆子 ( Rubus chingii Hu)又称树
莓、华东覆盆子、大号角公、牛奶母 ,蔷薇科悬
钩子属浆果植物。 近成熟干燥果实为常用中
药 ,具有补肾、固精、缩尿之功效 ,用于肾虚遗
尿、小便频数、阳痿早泄、遗精滑精等症的治
疗 [1 ] ,其含有黄酮及其甙类、生物碱、强心甙
类、内酯、香豆素及其甙类、多糖及其甙类、葸
醌及其甙类、酚性成分、水解鞣质和缩合鞣质
等多种有效成分 [2 ] ,但有关掌叶覆盆子的近
成熟干燥果实黄酮提取、含量测定的方法未
见报道。本文对其所含黄酮成分总含量进行
了测定研究。
1 材料与方法
1. 1 仪器
JA2003上皿电子天平 (上海天平仪器
厂 ) ,索氏提取器装置 , DZKW- 4型电子恒
温水浴锅 (黄骅市渤海电器厂 ) , UV - 754分
光光度计 (上海第三分析仪器厂 )。
1. 2 试剂
95%乙醇 ,亚硝酸钠 ,硝酸铝 ,氢氧化钠 ,
甲醇均为分析纯。芦丁标准品 (上海试剂二
厂 )
1. 3 材料
掌叶覆盆子 , 2000年 6月采自安徽省黄
山市黄山区 ,近成熟果实自然干燥 ,粉碎 ,过
20目筛。
1. 4 标准曲线回归方程建立 [ 3～ 5]
准确称取芦丁标准品 0. 024 g,用 30 mL
95%乙醇溶解 ,并完全转入 100 mL容量瓶
中 ,用 95%乙醇稀释定容 ,摇匀。
分别吸取 0. 0、 0. 1、 0. 2、 0. 3、 0. 4、 0. 5
mL置于 6只 10 mL容量瓶中 ,各用 95%乙
醇补充至 4 mL,加入 0. 5 mL的 NaNO2 ( 1∶
20) ,摇匀 ,放置 7 min后加入 0. 5 mL的 Al
( NO3 ) 3 ( 1∶ 10) ,摇匀 ,放置 8 min后再加入
4 mL物质的量浓度为 1 mol /L的 NaOH,混
匀 ,最后用 95%乙醇稀释至刻度 , 10 min后
用波长 510 nm测定吸光度 ,其结果见表 1。
用最小二乘法作线性回归 ,得芦丁浓度
Y 与吸光度 A关系曲线的回归方程式:
Shaanxi Fo rest Science and Technolog y
陕西林业科技 No. 4, 2002, pp. 1～ 3
收稿日期: 2002-04-10
基金项目:西北农林科技大学大学生科技创新基金资助部分项目
作者简介:盛义保 ( 1976- ) ,男 ,安徽黄山市人 ,学生 ,野生植物资源开发与利用专业。
Y
∧
= 0. 103 4A - 0. 000 4
表 1 不同芦丁浓度—— 吸光度值
序号 1 2 3 4 5 6
体积 /m L 0. 0 0. 1 0. 2 0. 3 0. 4 0. 5
浓度 y /g· L- 1 0. 000 0 0. 002 4 0. 004 8 0. 007 2 0. 009 6 0. 012 0
吸光度 /A 0. 00 0. 034 0. 052 0. 068 0. 095 0. 121
相关系数 r = 0. 994 7,查相关系数检验
表得: r > r0. 01( 4) = 0. 917,故相关性显著。
2 结果与分析
2. 1 不同提取溶剂对黄酮提取率影响
准确称取样品 5 g ,共 4份 ,分别用脱脂
滤纸包好 ,并放入索氏提取器中 ,然后分别加
入 50%甲醇、纯甲醇、 70%乙醇、 95%乙醇 80
mL,置入水浴锅中回流提取 1 h放冷 ,将提
取液转入 100 mL容量瓶中 ,再用提取溶剂
少量多次洗涤 ,洗涤液过滤置于上述容量瓶
中 ,并用提取溶剂稀释至刻度 ,摇匀。 精密吸
取上述提取液各 0. 2 mL,每种提取液 3份 ,
置 12只 10 mL容量瓶中 ,然后分别加 95%
乙醇至 4 mL,按照与芦丁标准品相同的方法
显色。空白每次取样 0. 2 mL。加入 95%乙醇
至 4 mL,然后用蒸馏水稀释至 10 mL,作空
白对照。在波长 510 nm处测定吸光度 ,测得
各吸光度值代入回归方程 ,并计算结果 (见表
2)。
表 2 不同提取溶剂的提取效果
溶 剂 50%甲醇 纯甲醇 70%乙醇 95%乙醇
平行 1吸光度 / A 0. 143 0. 145 0. 101 0. 123
平行 2吸光度 / A 0. 147 0. 146 0. 100 0. 125
平行 3吸光度 / A 0. 145 0. 148 0. 099 0. 122
总黄酮含量 /% 1. 459 1. 473 0. 994 1. 235
由表 2可知: 用纯甲醇索氏提取总黄酮
提取率较高 ,故本次实验采用纯甲醇作为提
取总黄酮的溶剂。
2. 2 不同提取时间对黄酮提取率影响
准确称量样品 5 g ,共 4份 ,分别用脱脂
滤纸包好 ,并置入索氏提取器中 ,然后各加入
纯甲醇 80 m L,放入水浴锅中 ,回流提取 2,
4, 6, 8 h放冷 ,洗涤 ,过滤 ,定容 100 mL。按上
述方法测定总黄酮含量 ,其结果见表 3。
表 3 不同提取时间的提取效果
溶剂 提取时间 /h
2 4 6 8
平行 1吸光度 / A 0. 215 0. 203 0. 165 0. 195
平行 2吸光度 / A 0. 213 0. 202 0. 167 0. 196
平行 3吸光度 / A 0. 211 0. 204 0. 166 0. 194
总黄酮含量 /% 2. 162 2. 059 1. 676 1. 976
2 陕西林业科技 2002年第 4期
由表 3可知:提取时间 2 h最好 ,故本次
实验测定黄酮含量提取时间为 2 h。
2. 3 样品试液的制备和总黄酮含量的测定
准确称取样品 5 g ,用脱脂滤纸包好 ,并
置入索氏提取器中 ,加入纯甲醇 80 m L,然后
放入水浴锅中 ,回流提取 2 h,放冷 ,将提取
液转入 100 mL容量瓶中 ,再用纯甲醇少量
多次洗涤烧瓶 ,洗涤液过滤并合并倒入容量
瓶中 ,最后用纯甲醇溶剂稀释至 100 m L,摇
匀。
精密吸取样品试液 0. 2 m L 4份 ,分别放
入 10 mL容量瓶中 ,然后各加 3. 8 mL 95%
乙醇 , 3份用与芦丁标准品相同的方法显色 ,
作平行试验 ,第 4份用蒸馏水稀释至 10 mL,
作空白对照。 在波长 510 nm处进行比色测
定 ,其吸光度值: 平行 1为 0. 212 A;平行 2
为 0. 214 A,平行 3为 0. 213 A,将其代入回
归方程 ,得出掌叶覆盆子的近成熟干燥果实
中总黄酮含量为 2. 162% 。
3 结论与讨论
( 1)用 0. 24 g /L芦丁标准溶液 ,按一定
比例稀释配制成的系列标准溶液 ,在波长
510 nm处进行比色测定 ,得到芦丁浓度 y和
吸光度 A的工作曲线回归方程为:
y∧ = 0. 1034A - 0. 0004
相关系数 r = 0. 9947
( 2)用不同提取溶剂 ,不同提取时间进行
提取比较 ,结果表明:掌叶覆盆子的近成熟干
燥果实黄酮提取的最佳条件为纯甲醇索氏提
取 2 h,并测得总黄酮含量为 2. 162%。
( 3)为了消除其它有色成分对黄酮吸光
度的影响 ,本实验采用了相应供试样品不经
过显色的溶液 ,作为空白对照。 另外 ,为了消
除随机误差 ,做了平行试验。因而 ,测定出来
的黄酮含量结果稳定可靠。
( 4)掌叶覆盆子的成熟果实中含有各种
丰富的营养物质 [6 ] ,同时其近成熟干燥果实
作为常用中药 ,也含有黄酮及其甙类等多种
有效成份 ,对其总黄酮含量进行测定研究 ,这
为今后对掌叶覆盆子的进一步研究和开发利
用奠定了基础。
参考文献:
[ 1] 中华人民共和国药典委员会 .中华人民共和国
药典 (第一部 ) [M ].北京: 人民卫生出版社 ,
1985. 343.
[ 2 ] 张存莉 ,盛义保 ,童普升 ,等 .掌叶覆盆子与其
伪品山莓果实有效成分的比较研究 [ J].西安
联合大学学报 , 2001, 4( 4): 13- 15.
[ 3 ] 陈运中 .苦荞麦黄酮含量的测定 [ J].食品科
学 , 1998, 19( 3): 54- 55.
[ 4 ] 苏美琼 ,许春霞 ,李向民 ,等 .不同提取时间银
杏黄酮含量测定的影响 [ J].陕西林业科技 ,
1998( 4): 4- 5.
[ 5 ] 张存莉 ,马柏林 ,傅健熙 ,等 .黑刺菝葜根茎中
黄酮成分的分析鉴定 [ J ].西北林学院学报 ,
2000, 15( 1): 57- 59.
[ 6 ] 盛义保 ,张存莉 ,童普升 ,等 .掌叶覆盆子的开
发利用研究概况 [ J].陕西林业科技 , 2000,
( 4): 69- 72.
32002年第 4期 陕西林业科技