全 文 ：第 25卷　第 1期
2009年 1月
福建师范大学学报 (自然科学版 )
Journal of Fujian Normal Univ e rsity ( Na tural Science Edition)
Vo l. 25　 No. 1
Jan. 2009
文章编号: 1000-5277( 2009) 01-0110-05
薜荔果实乙醇提取液抗氧化活性的初步分析
王晶晶 , 李　均 , 陈炳华* , 连俊蕊 , 李　琳
(福建师范大学生命科学学院 , 福建 福州　 350108)
　　摘要: 以不同体积分数 ( 20% ～ 95% ) 乙醇为溶剂 , 室温下经超声波辅助浸提 , 获得薜荔果实乙醇提取
液 .分别采用还原力法、 DPPH法、 TEAC法和 FRAP法评估了不同提取液的抗氧化活性 ,并用 Fo lin-Ciocal-
teu法测定了提取液中总酚的质量分数 . 结果表明: 不同体积分数乙醇溶液获得的薜荔果实提取液表现出不
同的还原力 ,清除 DPPH· 、 ABTS· + 能力及总抗氧化能力 ,乙醇体积分数对提取液的抗氧化活性影响显著 ,
不同乙醇提取液的抗氧化活性从高到低依次为: 80% , 95% , 60% , 40% , 20% , 其中体积分数为 80%的乙
醇提取液的还原力、 清除自由基及总抗氧化能力最强 , 在 700 nm处吸光值为 1. 04, 清除 DPPH· 半清除率
质量浓度为 2. 20 mg· mL- 1 , TEAC值为 2. 36, FRAP值为 157. 1, 此结果与其提取液中总酚的质量分数
( 2. 50% ) 最高相一致 .
关键词: 薜荔 ; 果实 ; 抗氧化活性
中图分类号: Q946. 8; S792. 95　　　文献标识码: A
　收稿日期: 2008-06-25
　基金项目: 福建省自然科学基金资助项目 ( C0540001)
　作者简介: 王晶晶 ( 1984—　 ) , 女 , 吉林长春人 , 硕士研究生 , 研究方向为植物学与天然产物化学 .
* 通讯作者
Prilimilary Study on Antioxidant Activity of Ethanol Extracts
fromFicus pumila L. Fruit
WANG Jing-jing, LI Jun, CHEN Bing-hua
*
, LIAN Jun-rui, Li Lin
(College of Lif e Sciences , Fujian Normal University , Fuzhou 350108, China )
Abstract: Fruit of Ficus pum ila L. w as ex t racted w ith various concentration ( 20% ～
95% ) ethano l solution using ul t rasonic at ro om temperature. The antioxidant activi ties of
di fferent ex t racts w ere evalua ted by reducing power assay, DPPH assay , TEAC assay and
FRAP assay , the to tal phenolics contents of the ex t racts w ere measured by Fo lin-Ciocal teu
method. The results demonstrated tha t the antioxidant activi ties o f di fferent concentration
ethanol ex tracts show ed varying deg rees of ef ficacy in four assays ( reducing pow er, scaveng-
ing capacity on DPPH· and ABTS· + , the to tal antio xidant capaci ty ) . The concentration
o f ethanol so lution significantly af fected the antiox idant activ ities of ex t racts. Antioxidant
activi ties of dif ferent ethano l ex t racts w ere descending in th e follow ing order: 80% , 95% ,
60% , 40% , 20% ethanol, in which , 80% ethano l ex t racts had the highest antiox idant activi-
ties, the abso rbance value a t 700 nm was 1. 04 , half scavenging ef ficiency concentration fo r
DPPH· was 2. 20 mg· mL- 1 , the value of TEAC and FRAP were 2. 36, 157. 1, respectiv e-
ly. The results w ere in acco rdance wi th the highest to tal ph enolics content ( 2. 50% ) o f 80%
ethanol ex t ract.
Key words: Ficus pum ila L. ; f rui t; antiox idant activ ity
薜荔 ( Ficus pumila L. ) 为桑科榕属攀援或匍匐灌木 , 又名膨泡树、 凉粉果 , 广泛分布于我国长
江以南以及日本、印度、 越南等地 [ 1] . 研究发现 , 薜荔富含黄酮类等多种酚性物质 , Pistelli[2 ]等从薜荔
地上部分分离到 naringenin、 genistein、 hesperi tin等 10种黄酮苷元和 rutin、 i so rhamnetin-3-g lucoside
等 2种黄酮糖苷 ; Abraham[3 ]等从薜荔叶中分离到 4种黄酮类物质 , 分别为 rutin、 apigenin-6-neohes-
peridose、 kaempfero l-3-robinobioside和 kaempferol-3-rutino side, 其中 rutin具有很强的清除 DPPH·
和超氧阴离子自由基能力 ; Shukla[4 ]等发现孟加拉榕 (Ficus bengalensis L. )树皮水提取物具有显著的
抗氧化作用 , 能有效地抑制脂质体过氧化并降低血清中胆固醇质量分数 , 同时能显著增加血清中抗氧
化酶活性 . 目前 , 国内对薜荔的研究主要集中在对其地上部分 (茎、 叶 ) 化学成分的分离鉴定 [ 2- 3]、 薜
荔与榕小峰的共生关系 [5 ]以及薜荔在食品行业的应用 [ 6]等 ,而有关薜荔果 (除脂后 )实抗氧化活性的研
究尚未见报道 . 为此 , 作者在前人研究的基础上 , 以薜荔果实为材料 , 以乙醇溶液为溶剂 , 经超声波
辅助浸提法获得提取液 , 采用 4种方法对其抗氧化活性进行体外检测 , 旨在从薜荔果实中挖掘出高效、
安全的天然抗氧化物质 .
1　材料与方法
1. 1　材料和仪器
成熟果实采自福州市晋安区新店镇八一水库边 , 攀援于围墙上的薜荔雌株上 .
二苯基苦味酰基苯肼基自由基 ( 1, 1-dipheny l-2-picrylhydrazy l, DPPH· )、 VE水溶性类似物
( (± ) 6-Hydroxy-2, 5, 7, 8-tet ramethy lchromane-2-ca rboxylic acid, Trolox )、三吡啶三吖嗪 ( t ripy ridyl-
t riazine, T PT Z, 纯度 98% )均购自美国 Sigma公司 ; 2, 2′-联氮-双 ( 3-乙基苯噻唑啉-6-磺酸 ) ( 2, 2′-
azino-bis ( 3-ethy lbenzthiazo line-6-sulfpnic acid, ABTS) ) 为 Fluka公司产品 ; Folin-酚、 单宁酸、 VC
等均为国产分析纯 .
Ult ra-spec2100 pro紫外可见光光度计 ( Amersham Bio sciences)、 KQ-400DB型数控超声波清洗器
(江苏昆山市超声仪器有限公司 ) 等 .
1. 2　方法
1. 2. 1　薜荔果实提取液的制备
薜荔果实经粉碎后 ,用石油醚 (沸程 60～ 90℃ )经索氏提取法去除类脂 , 60℃烘干 .称取粉末 0. 25
g , 共 5份 , 分别加入 10 mL不同体积分数 ( 20% , 40% , 60% , 80% , 95% ) 乙醇溶液 , 于室温条件
下超声 (功率 200 W) 辅助浸提 30 min, 真空抽滤 , 重复 1次 , 合并提取液 , 用相应体积分数的乙醇
溶液定容到 25 m L, 于 4℃冰箱保存 , 备用 .
1. 2. 2　提取液中总酚的测定
参照 Fo lin-Ciocal teu试剂比色法 [ 7 ] , 略有改进 . 以d(单宁酸 ) ( 40～ 200μg· mL- 1 )作标准曲线 ,
回归方程为: A = 3. 969 3 C + 0. 018( R2 = 0. 999 1) . 以每 g干质量含有 TAE ( Tannic acid
equiv alent) 单宁酸等效物的质量 ( mg ) 来计算提取液总酚质量分数 .
1. 2. 3　提取液还原力的测定
采用 Oyaizu[ 8]的方法 , 于 700 nm处测定吸光值 .
1. 2. 4　提取液清除 DPPH· 能力的测定
参照 Kim[9 ]等的方法 , 略有改进 . 分别吸取 0. 1 mL不同质量浓度的提取液 , 各加入 1. 9 mL 100
μmo l· L- 1的 DPPH· 溶液 , 混合均匀 ,室温静置 30 min后 , 于 517 nm波长处分别测定各反应液的吸
光值 . 样液对 DPPH· 的清除率 /% = [1 - ( A - A1 ) /A0 ]× 100,式中 A0代表 0. 1 mL甲醇加入
DPPH· 溶液后的吸光值 , A代表 0. 1 mL样液加入 DPPH·溶液后的吸光值 , A1代表 0. 1 mL样液加
入 1. 9 mL甲醇的吸光值 .
1. 2. 5　提取液清除 ABTS· + 活性的测定
T EAC ( Trolo x equiv alent antioxidant capaci ty) 法测定 ABTS· + 清除活性: 参照 Re等 [10 ]的方
法 , 略有改进 .将 5 mL 7 mmol· L- 1的 ABT S和 88μL 140 mmol· L- 1的 K2 S2O8混合 , 30℃水浴、避
光条件下静置过夜 ,获得 ABTS· +储备液 . 使用前将储备液用 20 mmol· L- 1 pH 4. 5的醋酸钠缓冲液
稀释成工作液 ,要求稀释后工作液在 734 nm波长下的吸光值为 0. 70± 0. 02.吸取 30μL的提取液 ,加
111　第 1期　　　　　　　　　　王晶晶等: 薜荔果实乙醇提取液抗氧化活性的初步分析
入 3 mL ABTS· +工作液 , 混合 10 s, 以 pH 4. 5醋酸钠缓冲液为空白 , 30℃静置 6 min, 在 734 nm
波长下读取吸光值 . 以系列浓度 ( 0. 25～ 2. 5 mmol· L- 1 )的 Trolox为标物计算提取液的抗氧化活性 ,
其一元线性回归方程为: A = 33. 098C + 1. 764 7( R2 = 0. 999 4) .
1. 2. 6　提取液的总抗氧化能力测定
铁还原 /总抗氧化能力的测定 ( FRAP法 ) 采用 Ozgen[11 ]等的方法 . 吸取 2. 5 m L 20 mmol· L- 1
FeCl3· 6 H2O溶液 , 与 2. 5 mL 10 mmol· L- 1 T PT Z溶液和 25 m L 300 mmol· L- 1 pH 3. 6的醋酸盐
缓冲液混合 , 再吸取该混合液 1. 8 mL (于 37℃水浴中 ) ,依次加入蒸馏水 180μL和 60μL提取液 , 反
应 30 min后 ,于 593 nm下读取吸光值 . 空白用 60μL的甲醇代替样液即可 . 以系列浓度 ( 100～ 1 000
μmo l· L- 1 ) 的 FeSO4作标准曲线 , 得回归方程为: A = 0. 001 6C+ 0. 053(R2 = 0. 998 3) . 提取液
抗氧化活性结果以每 g果实粉末相当于 FeSO4物质的量为该提取物的 FRAP值 .
2　结果与分析
2. 1　薜荔果实总酚质量分数
薜荔果实总酚质量分数见表 1.
由表 1可知 , 薜荔果实的不同体积分数乙醇提取液中总酚质量分数不同 , 乙醇提取液中总酚质量
分数由高到低依次为: 80% , 95% , 60% , 40% , 20% , 其中体积分数为 80%乙醇提取液中总酚质量
分数最高 , 达 2. 50% , 而 20%乙醇提取液总酚质量分数最低 , 仅为 0. 96% , 表明乙醇体积分数对薜荔
果实中总酚的提取影响显著 .
2. 2　薜荔果实提取液的还原力
还原力可用来评价天然抗氧化物的供电子能力 , 研究显示植物提取物的还原力与其抗氧化活性有
着直接的关系 . 不同质量浓度 ( 1. 0～ 5. 0 mg· mL- 1 ) 的薜荔果实提取液的还原力结果见图 1.
图 1　薜荔果实不同质量浓度乙醇提取液的还原力
表 1　薜荔果实不同体积分数乙醇提取液的总酚质量分数
h(乙醇 ) /% w (总酚 ) /%
20 0. 96± 0. 03 A
40 1. 49± 0. 00 B
60 1. 82± 0. 03 C
80 2. 50± 0. 01 D
95 1. 88± 0. 01 C
　　　　注: 同列相同的字母表示在 p = 0. 01水平上邓肯氏新复
极差检验差异不显著 (n = 3)
从图 1可看出 , 不同体积分数的乙醇提取液的还原
能力均随质量浓度的增加而增大 , 当提取液质量浓度为 5 mg· m L- 1时 , 不同提取液还原力从 0. 50增
加到 1. 04, 其中 80%乙醇提取液的还原力最强 , 700 nm处吸光值达 1. 04, 与质量浓度为 0. 12 mg·
m L
- 1的 VC还原力相当 ( A700nm = 1. 05) . 各乙醇提取液还原力从大到小依次为: 80% , 95% , 60% ,
40% , 20% , 这与各提取液总酚质量分数的结果基本一致 . 可见 , 总酚质量分数与还原力具有正相关
性 , 这与 Arabshahi-Delouee[ 12]的结果一致 .
2. 3　薜荔果实提取液对 DPPH· 的清除能力
DPPH法是目前使用最为广泛的检测自由基清除能力的方法之一 . 供试液中酚类化合物的浓度以
及羟基化的程度与其抗氧化能力、对 DPPH·的清除能力呈现正相关性 [13 ] . DPPH·空白溶液体系 (不
加提取液 ) 及加入 80%乙醇提取液后体系的紫外可见光谱的变化见图 2.
由图 2可看出 , DPPH·溶液在 517 nm处有最大吸收峰 , 当加入 80%乙醇提取液后 517 nm处吸
光值显著降低 , 可见选择在该波长处测定样液对 DPPH· 的清除能力是合适的 .
在 ( 0. 5～ 4. 0 mg· mL- 1 )质量浓度范围内的薜荔果实不同体积分数乙醇提取液对 DPPH· 清除率
的比较结果见图 3. 由图 3可知 , 不同体积分数乙醇提取液清除 DPPH·能力差别较大 ,当提取液质量
浓度为 4. 0 mg· mL- 1时 , 80%乙醇提取液的清除能力最强 ,清除率达 85. 92% (略低于 0. 14 mg· mL- 1
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Vc的清除率 , 87. 96% ) , 20%乙醇提取液清除率最低 , 仅为 38. 78% ; 且在一定质量浓度 ( 0. 5～ 4. 0
mg· m L- 1 ) 范围内 , 不同体积分数 ( 20% , 40% , 60% , 80% , 95% ) 的乙醇提取液对 DPPH·的清
除率呈现良好的量效关系 , 其相关系数 R2分别为 0. 999 3, 0. 976 8, 0. 995 3, 0. 994 0, 0. 992 8.
图 2　薜荔果实乙醇提取液
清除 DPPH· 的紫外可见光谱图
图 3　薜荔果实乙醇提取液清除 DPPH· 的能力
为了更好地说明提取液对 DPPH· 清除能力的强弱 , 引入半清除率质量浓度即自由基清除率在
50%时提取液的质量浓度 (以dEC50表示 )来比较清除 DPPH· 能力的大小 ,dEC50值越小 ,表明清除自由
基的能力越强 ,被测物质的抗氧化能力越强 .根据回归方程计算不同体积分数 ( 20% , 40% , 60% , 80% ,
95% ) 的乙醇提取液的dEC50分别为 5. 18, 3. 85, 2. 68, 2. 20, 2. 45 mg· mL- 1 . 可见 , 乙醇提取液清
除自由基能力从高到低依次为: 80% , 95% , 60% , 40% , 20% , 不同体积分数乙醇提取液之间清除
DPPH· 能力的差异 , 可能与溶剂的极性有关 .
2. 4　薜荔果实提取液清除 ABTS· + 的能力
T EAC法亦是一种广泛采用的检测抗氧化活性的方法 .图 4为 ABTS· + 及加入不同体积分数乙醇
提取液后体系的可见光谱图的变化情况 . 由图 4可知 ,不同乙醇提取液清除 ABTS· + 的能力从高到低
依次为: 80% , 95% , 60% , 40% , 20% , 80%乙醇提取液清除率最高 , 达 80. 1% , TEAC值为 2. 36;
20%乙醇提取液清除率最低 , 仅为 68. 4% , T EAC值为 1. 17.
不同质量浓度 ( 1. 0～ 15. 0 mg· mL- 1 )薜荔果实的 80%乙醇提取液清除 ABTS· + 的 TEAC值见
图 5. 图 5表明 , 提取液清除 ABT S· +的 T EAC值随质量浓度的增加而增大 , 在检测的质量浓度范围
内 , TEAC值与提取液体积分数量效关系良好 ,相关系数 R2为 0. 994 6,当质量浓度为 15. 0 mg· mL- 1
时 , T EAC值为 2. 36, 略高于质量浓度为 0. 44 mg· mL- 1Vc的清除率 ( TEAC值为 2. 33) .
图 4　薜荔果实乙醇提取液清除 ABTS· +可见光谱图
图 5　不同质量浓度下薜荔果实 80%
乙醇提取液清除 ABTS· +的能力
2. 5　薜荔果实提取液的总抗氧化能力
FRAP法是利用反应体系中产生的 Fe2+ -T PTZ在 593 nm处吸光值的变化来测定 (见图 6) , 此法
目前已被广泛用于检测水果、 蔬菜等总抗氧化能力 , 以 FRAP值为评价指标的不同体积分数乙醇提取
液的总抗氧化能力 , 结果见图 7.
由图 7可知 , 薜荔果实体积分数为 80%乙醇提取液 FRAP值最高 , 达 157. 1, 体积分数为 20%乙
醇提取液 FRAP值最低 ,仅为 59. 3, 相差近 3倍 . 不同乙醇提取液 FRAP值大小依次为: 80% , 95% ,
60% , 40% , 20% . 不同体积分数乙醇提取液的总抗氧化能力显著不同 , 主要是由于不同体积分数乙
醇溶液对薜荔果实中抗氧化物质的溶解能力不同 , 所提取的抗氧化物质的总量和种类也有所不同 , 从
而导致了提取液总抗氧化能力的不同 .
113　第 1期　　　　　　　　　　王晶晶等: 薜荔果实乙醇提取液抗氧化活性的初步分析
图 6　 Fe2+ -TPTZ复合物的紫外可见光谱图 图 7　薜荔果实提取液的 FRAP值
3　小结和讨论
综上所述 , 薜荔果实以体积分数为 80%的乙醇溶液作为提取剂效果最好 , 其获得的提取液中总酚
质量分数最高 , 达 2. 50% , 说明 80%乙醇提取薜荔果实总酚的效果最好 , 因此 , 以体积分数为 80%乙
醇作为提取溶剂最为合适 . 本文采用了 4种国内外常用的体外抗氧化活性检测方法 (还原力法、 DPPH
法、 T EAC法、 FRAP法 ) 评价了薜荔果实提取液的抗氧化活性 , 结果表明: 不同体积分数乙醇提取
液中总酚质量分数高低与其抗氧化活性强弱顺序基本一致 , 依次为: 80% , 95% , 60% , 40% , 20% ,
提取液的总酚质量分数与其抗氧化活性具有正相关性 , 这与前人研究结果相符合 [13 ] . 不同体积分数乙
醇提取液的抗氧化活性显著不同 , 这主要是与提取溶剂的极性及其所溶解抗氧化物质 (酚性成分 ) 的
总量和种类有关 . 为更深入了解薜荔果实的抗氧化效果及其化学本质 , 探讨将其作为一种潜在的天然
抗氧化剂资源而加以开发利用的可行性 , 有必要对提取液进行分离、 纯化 , 并对其中的抗氧化作用成
分进行深入分析 , 这些工作有待进一步研究 .
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(责任编辑: 余　望 )
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