全 文 ：黑龙江农业科学２０１６（１１）：１３１～１３５
Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
响应面法优化箬叶总黄酮的超声提取工艺
贺伟强１，陈召桂２，高　璇１，洪丽芝１
（１．嘉兴职业技术学院，浙江 嘉兴３１４００１；２．浙江五芳斋实业股份有限公司，浙江 嘉兴３１４０００）
摘要：为了优化箬叶黄酮的提取工艺，在乙醇体积分数、液料比、提取时间和超声功率４个单因素试验的基础
上，采用响应面法优化箬叶总黄酮的提取工艺，考察各因素的影响效应及其交互作用。结果表明：确定最佳
提取工艺条件为液料比５０∶１，乙醇体积分数７６％，提取时间８０ｍｉｎ，超声功率２３４Ｗ，提取２次。采用此工艺
条件，箬叶总黄酮得率预测值为２．０５２％，验证值为２．０１７％。回归方程的预测值与验证值的相对误差为
１．７１％，该回归方程与实际情况拟合良好。
关键词：箬叶；总黄酮；提取工艺；响应面法
中图分类号：Ｓ７９５．９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００２－２７６７（２０１６）１１－０１３１－０５　ＤＯＩ：１０．１１９４２／ｊ．ｉｓｓｎ１００２－２７６７．２０１６．１１．０１３１
收稿日期：２０１６－０７－１６
基金项目：２０１５年浙江省高校访问工程师资助项目（２０１５〔６６〕）
第一作者简介：贺伟强（１９７９－），男，河南省新郑市人，硕士，
副教授，从事植物活性成分的提取与开发技术研究。Ｅ－ｍａｉｌ：
ｈｗｑ２００５００３＠１６３．ｃｏｍ。
　　箬叶为箬竹的叶子，箬竹为禾本科、箬竹属植
物，主要分布于我国长江以南各省区。箬叶当前
主要作为食品包装物用于包裹粽子，被国家卫生
部确认为药食两用资源，是一种可以开发利用的
新型食用、药用资源［１］。现代药物分析研究表明，
箬叶中含有箬叶黄酮、箬叶多糖、有机硒、锌、碘、
钙、多种维生素和氨基酸等对人体有益的活性成
分。其中的黄酮类化合物与银杏黄酮类化合物具
有相似的化学组成，具有明显的清除自由基、抗脂
质过氧化和调节血脂的功效［２－４］。
响应面分析法（ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏ－
ｇｙ，ＲＳＭ）作为一种工艺条件优化的有效方法，可
以建立连续变量曲面模型，通过回归方程来拟合
多个响应变量和一系列试验变量之间的关系，考
察不同试验因素及其交互作用对目标响应值的影
响［５－７］。该方法能经济、有效、快速地确定多试验
因素的最佳组合条件［８－１０］。本研究以乙醇溶液为
溶剂，研究了不同乙醇体积分数、液料比、超声功
率和提取时间对箬叶总黄酮的影响规律，利用响
应面分析法，获得了箬叶总黄酮超声提取的优化
工艺。
１　材料与方法
１．１　材料
供试箬叶产自湖南省张家界市。５０℃烘干
后用粉碎机粉碎过筛８０目备用。芦丁标准品购
于上海金穗生物科技有限公司；乙醇、氢氧化钠、
硝酸铝、亚硝酸钠等试剂均为分析纯。紫外可见
分光光度计（型号 ＵＶ１１０２Ⅱ），高速多功能粉碎
机（型号ＪＰ－５００Ｂ－２），电子天平（型号ＡＬ１０４－ＩＣ），
超声波细胞粉碎机（型号ＪＹ９９－ＩＩＩＢＮ）。
１．２　方法
１．２．１　样品溶液制取与箬叶总黄酮含量测定方
法　准确称量箬叶粉１ｇ，放入三角瓶中，加入乙
醇溶液后超声辅助提取，提取液过滤到５０ｍＬ容
量瓶中并定容，混匀后测定吸光值。提取２次，２
次结果相加即为箬叶总黄酮得率。
采用亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠法，吸取提
取液１ｍＬ于１０ｍＬ离心管中，加入５％硝酸钠
溶液０．３ｍＬ，震荡后静置５ｍｉｎ，再加入１０％硝
酸铝溶液０．３ｍＬ，震荡后静置５ｍｉｎ，再加入
１ｍｏｌ·Ｌ－１的氢氧化钠溶液４ｍＬ，静置１０ｍｉｎ后
在５１０ｎｍ下测定吸光度。代入回归方程，计算
出样品提取液中的总黄酮浓度Ｃ，箬叶黄酮的含
量：Ｙ＝ Ｃ·５０／Ｍ×１００％。式中：Ｙ为总黄酮得
率，％；Ｍ为称量的箬叶粉的准确质量，ｇ。
１．２．２　 绘制标准曲线 　 以芦丁的标准溶
液（４００μｇ·ｍＬ－
１）为母液，依次稀释成４００、３００、
２００、１００、５０μｇ·ｍＬ－
１的标准溶液。分别取１ｍＬ置
于１０ｍＬ的具塞比色管中，按照１．２．１中的方法测
定吸光度，以ＯＤ５１０为纵坐标，质量浓度（μｇ·ｍＬ－
１）为
横坐 标，绘 制 标 准 曲 线。得 回 归 方 程：Ｙ ＝
３．０１１　Ｘ＋０．０１３　７，Ｒ２＝０．９９９　２。
１．２．３　单因素试验设计　选择液料比５０∶１，提
取时间６０ｍｉｎ，超声功率２００Ｗ，考察不同乙醇
体积分数（２０％、４０％、６０％、８０％、１００％）超声提
取２次对总黄酮得率的影响；选择上述试验确定
１３１
　　　　　黑　龙　江　农　业　科　学 １１期
的最佳乙醇体积分数，提取时间６０ｍｉｎ，提取功
率２００Ｗ，考察不同液料比（２０∶１，３０∶１，４０∶１，
５０∶１，６０∶１）超声提取２次对总黄酮得率的影响；
选择上述试验确定的最佳乙醇体积分数和最佳液
料比，超声功率２００Ｗ，考察不同提取时间（２０、
４０、６０、８０、１００ｍｉｎ）对总黄酮得率的影响；选择上
述试验确定的最佳单因素条件，考察不同超声功
率（１００、１５０、２００、２５０、３００Ｗ）提取２次对总黄酮
得率的影响。
１．２．４　Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ中心组合设计　根据Ｂｏｘ－
Ｂｅｈｎｋｅｎ中心组合设计原理，选提取时间、提取功
率和乙醇体积分数作为对箬叶总黄酮得率影响较
显著的３个因素进行三因素三水平的中心组合实
验见表１。
表１　Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ中心组合因素水平设计
Ｔａｂｌｅ　１　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ
ｃｅｎｔｒａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｄｅｓｉｇｎ
水平
Ｌｅｖｅｌｓ
提取时间
（Ｘ１）／ｍｉｎ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ
ｔｉｍｅ
提取功率
（Ｘ２）／Ｗ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ
ｐｏｗｅｒ
乙醇体积分
数（Ｘ３）／％
Ｖｏｌｕｍｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ
ｏｆ　ｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ
－１　 ４０　 １５０　 ６０
０　 ６０　 ２００　 ８０
１　 ８０　 ２５０　 １００
２　结果与分析
２．１　超声辅助提取过程中的单因素试验
２．１．１　乙醇体积分数对总黄酮得率的影响　从
图１可以看出，乙醇体积分数在２０％～８０％时，
总黄酮得率逐步增大，乙醇体积分数大于８０％后
总黄酮得率逐渐减小。因此在其它因素确定条件
下乙醇较佳体积分数选择８０％。
图１　乙醇体积分数对总黄酮得率的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．１．２　液料比对总黄酮得率的影响　从图２可
以看出，选择乙醇体积分数为８０％总黄酮得率随
着液料比的增大而增加，当液料比为５０∶１时，总
黄酮得率达到较高水平，继续提高液料比总黄酮
得率曲线坡度增长不明显。因此从节约提取溶剂
和提取效率的角度来看，其它条件为确定条件下
液料比选择５０∶１。
图２　液料比对总黄酮得率的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｌｉｑｕｉｄ－ｍａｔｅｒｉａｌ　ｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．１．３　提取时间对总黄酮得率的影响　选择乙
醇体积分数８０％、液料比５０∶１，提取功率２００Ｗ，
考察不同提取时间（２０、４０、６０、８０、１００ｍｉｎ）对总
黄酮得率的影响。从图３可以看出，总黄酮得率
随着提取时间的增加而升高，超声提取６０ｍｉｎ时
达到最大值，之后总黄酮得率呈现下降趋势。因
此从节能和提高效率的角度来看，其它条件确定
条件下超声时间选择６０ｍｉｎ。
图３　提取时间对总黄酮得率的影响
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ
ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．１．４超声功率对总黄酮得率的影响　选择乙醇
体积分数８０％、液料比５０∶１、超声提取６０ｍｉｎ，考
察不同超声功率（１００、１５０、２００、２５０、３００Ｗ）提取
两次对总黄酮得率的影响。由图４可知随着功率
升高总黄酮得率逐渐升高，２００Ｗ 时总黄酮得率
２３１
１１期 　　贺伟强等：响应面法优化箬叶总黄酮的超声提取工艺
达到最高，之后随着功率的升高得率降低，因此当
其它条件确定时，总黄酮较佳超声功率为２００Ｗ。
图４　提取功率对总黄酮得率的影响
Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ
ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．２　响应面结果与分析
２．２．１　回归模型的建立与分析　设定提取功率
为２００Ｗ，利用响应面分析法对提取时间、液料比
和乙醇体积分数３个因素分析得到的试验设计方
案及结果见表２。
以箬叶总黄酮得率为响应值，表２数据经回
归拟合后，得到回归方程：Ｙ＝１．９９＋０．０８８　Ｘ１＋
０．２２　Ｘ２－０．０４６　Ｘ３＋０．０４０　Ｘ１Ｘ２－０．０２１　Ｘ１Ｘ３
－０．０５４　Ｘ２Ｘ３－０．１２　Ｘ２１－０．１９　Ｘ２２－０．２５　Ｘ２３。通过
Ｄｅｓｉｇｎ－Ｅｘｐｅｒｔ８．０．７对表２的数据分析，由表３
看出，箬叶总黄酮得率二次多项式模型Ｐ＜０．０１，
表２　Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ中心组合设计及试验结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ
Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ　ｃｅｎｔｒａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ
序号
提取时
间／ｍｉｎ
（Ｘ１）
液料比／
（ｇ·ｍＬ－１）
（Ｘ２）
乙醇体积
分数／％
（Ｘ３）
得率（Ｙ）／％
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｒａｔｅ
１ －１ －１　 ０　 １．３９０
２　 １ －１　 ０　 １．５１０
３ －１　 １　 ０　 １．７６７
４　 １　 １　 ０　 ２．０４７
５ －１　 ０ －１　 １．４９２
６　 １　 ０ －１　 １．６８４
７ －１　 ０　 １　 １．５８２
８　 １　 ０　 １　 １．６９２
９　 ０ －１ －１　 １．４０２
１０　 ０　 １ －１　 １．９１８
１１　 ０ －１　 １　 １．２７８
１２　 ０　 １　 １　 １．５７７
１３　 ０　 ０　 ０　 １．９８８
１４　 ０　 ０　 ０　 ２．０２８
１５　 ０　 ０　 ０　 １．９４４
表３　回归模型方差分析
Ｔａｂｌｅ　３　ＡＮＯＶＡ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ
方差来源
Ｖａｒｉａｎｃｅ　ｓｏｕｒｃｅ
平方和
Ｓｕｍ　ｏｆ　ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ　ｓｑｕａｒｅ
Ｆ　 Ｐ
显著性
Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
模型 Ｍｏｄｅｌ　 ０．８５　 ９　 ０．０９４　 １０．３１　 ０．００９７ ＊＊（Ｐ＜０．０１）
Ｘ１ ０．０６２　 １　 ０．０６２　 ６．７６　 ０．０４８３
Ｘ２ ０．３７　 １　 ０．３７　 ４０．９９　 ０．００１４ ＊＊（Ｐ＜０．０１）
Ｘ３ ０．０１７　 １　 ０．０１７　 １．８５　 ０．２３２２
Ｘ１Ｘ２ ６．４００×１０－３　 １　 ６．４００×１０－３　 ０．７０　 ０．４４０３
Ｘ１Ｘ３ １．６８１×１０－３　 １　 １．６８１×１０－３　 ０．１８　 ０．６８５５
Ｘ２Ｘ３ ０．０１２　 １　 ０．０１２　 １．２９　 ０．３０７３
Ｘ２１ ０．０５３　 １　 ０．０５３　 ５．８０　 ０．０６０９
Ｘ２２ ０．１３　 １　 ０．１３　 １４．３９　 ０．０１２７
Ｘ２３ ０．２４　 １　 ０．２４　 ２６．２３　 ０．００３７ ＊＊（Ｐ＜０．０１）
残差 Ｒｅｓｉｄｕａｌ　 ０．０４６　 ５　 ９．１１５×１０－３
失拟项Ｌａｃｋ　ｏｆ　ｆｉｔ　 ０．０４２　 ３　 ０．０１４　 ７．９４　 ０．１１３９
纯误差Ｐｕｒｅ　ｅｒｒｏｒ　 ３．５３１×１０－３　 ２　 １．７６５×１０－３
总和 Ｔｏｔａｌ　ｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　 ０．８９　 １４
复相关系数 Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　Ｒ２＝０．９４８９
调整确定系数 Ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　Ｒ２＝０．８５６９
３３１
　　　　　黑　龙　江　农　业　科　学 １１期
达到极显著水平；模型的失拟项不显著（Ｐ＝
０．１１３　９）；该模型的复相关系数Ｒ２＝０．９４８　９，表
明该模型的回归方程的拟合度良好，该方程为箬
叶总黄酮得率与提取工艺参数的数学模型［１１－１３］。
２．２．２响应面分析　根据建立的拟合函数，定性
分析提取时间、液料比和乙醇体积分数对箬叶总
黄酮得率的关系，每２个因素对总黄酮得率的等
高线和响应面见图５，从等高线可以看出总黄酮
得率最大值的条件应该在圆心处。比较３组图可
知，对箬叶总黄酮得率影响显著的因素，表现曲线
和响应曲面较为陡峭，对总黄酮得率影响不显著
的因素，表现曲线和响应曲面较为平缓［１４］，其中
超声功率对总黄酮得率影响显著（Ｐ＜０．０１）。单
因素 对 总 黄 酮 得 率 的 影 响 顺 序 为：超 声 功
率（Ｘ２）＞提取时间（Ｘ１）＞乙醇体积分数（Ｘ２）。
Ｘ１Ｘ２、Ｘ１Ｘ３、Ｘ２Ｘ３的交互作用均不显著（Ｐ＞
０．０５），说明超声功率、提取时间和乙醇体积分数
之间的交互作用对总黄酮得率的影响较小。
图５　各两因素对总黄酮得率的交互作用
Ｆｉｇ．５　Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｔｗｏ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．２．３　提取工艺的优化与验证　由Ｄｅｓｉｇｎ　ｅｘ－
ｐｅｒｔ８．０．７优化后的提取工艺为：液料比５０∶１，提
取时间８０ｍｉｎ，超声功率２３４Ｗ，乙醇体积分数
７６％，提取２次。在此工艺条件下进行３次重复
４３１
１１期 　　贺伟强等：响应面法优化箬叶总黄酮的超声提取工艺
验证试验，得到箬叶总黄酮得率的平均值为
２．０１７％，达到模型预测值（２．０５２％）的９８．２９％，
证明应用响应面法建立的箬叶总黄酮得率预测模
型可靠。
３　结论
本试验以张家界的箬叶为材料，采用超声波
辅助法提取箬叶总黄酮得到的优化模拟方程为：
Ｙ＝１．９９＋０．０８８　Ｘ１＋０．２２　Ｘ２－０．０４６　Ｘ３＋０．０４０
Ｘ１Ｘ２－０．０２１　Ｘ１Ｘ３－０．０５４　Ｘ２Ｘ３－０．１２　Ｘ２１－
０．１９　Ｘ２２－０．２５　Ｘ２３。根据响应面分析得到的优化
提取工艺条件为液料比５０，提取时间８０ｍｉｎ，超
声功率２３４Ｗ，乙醇体积分数７６％，提取２次，在
此工艺条件下，箬叶总黄酮得率达到２．０１７％，与
模型预测值２．０５２％非常接近。与传统的浸提法
相比较，不仅大大缩短了提取时间，而且提高了总
黄酮得率，是一种经济、快捷而且高效的提取
工艺。
参考文献：
［１］　苏春花，王福升，丁雨龙．长节箬竹叶总黄酮提取工艺［Ｊ］．
林业科技开发，２０１０，２４（５）：８７－９０．
［２］　高梦祥，张佳烂，王江明．微波浸提竹叶黄酮的工艺研
究［Ｊ］．西北农林科技大学学报：自然科学版，２００５，３３（７）：
１４７－１５０．
［３］　黄京华．丛生竹黄酮类化合物的分析研究及其在分类上的
应用［Ｊ］．竹子研究汇刊，１９９３，１２（１）：１８－２７．
［４］　魏凤玉，方菊，陈玮，等．竹叶黄酮在豆浆保鲜中的应用［Ｊ］．
食品科学，２０１２，３３（１８）：３１２－３１５．
［５］　崔大明，张益波，付璐，等．响应面法优化超声法提取枸杞中
总黄酮工艺［Ｊ］．食品研究与开发，２０１１，３２（３）：５５－５９．
［６］　Ｍｙｅｒｓ　Ｗ　Ｒ．Ｅｎｃｙｃｌｏｅｄｉａ　ｏｆ　ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ［Ｍ］．Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ，２００３：８５８－８６９．
［７］　陈魁．试验设计与分析［Ｍ］．北京：清华大学出版社，１９９６：
９４－１８０．
［８］　吴华勇，黄赣辉，顾振宇，等．响应曲面法优化竹叶总黄酮的
提取工艺研究［Ｊ］．食品科学，２００８，２９（１１）：１９６－２００．
［９］　余清，许慧星，肖小蓉，等．基于响应面分析法优化的乌饭树
叶总黄酮提取条件［Ｊ］．食品科学，２００８，２４（１）：９３－９８．
［１０］　肖卫华，韩鲁佳，杨增玲，等．响应面法优化黄芪黄酮提取
工艺的研究［Ｊ］．中国农业大学学报，２００７，１２（５）：５２－５６．
［１１］　邹建国，刘飞，刘燕燕，等．响应面法优化微波辅助提取枳
壳中总黄酮工艺［Ｊ］．食品科学，２０１２，３３（２）：２４－２８．
［１２］　候学敏，李林霞，张直峰，等．响应面法优化薄荷叶总黄酮
提取工艺及抗氧化活性［Ｊ］．食品科学，２０１３，３４（６）：
１２４－１２８．
［１３］　贺伟强，周奇迹，沈永根．微波辅助水浸提桑叶总黄酮的工
艺条件优化试验［Ｊ］．蚕业科学，２０１４，４０（２）：２９５－３００．
［１４］　王丰俊，王运强，顾欣，等．响应面法优化超声波提取构树
叶中叶绿素的工艺研究［Ｊ］．北京林业大学学报，２０１０，
３２（６）：１３５－１４０．
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｉｎｄｏｃａｌｍｕｓ　Ｌｅａｖｅｓ
ＨＥ　Ｗｅｉ－ｑｉａｎｇ１，ＣＨＥＮ　Ｚｈａｏ－ｇｕｉ　２，ＧＡＯ　Ｘｕａｎ１，ＨＯＮＧ　Ｌｉ－ｚｈｉ　１
（１．Ｊｉａｘｉｎｇ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｊｉａｘｉｎｇ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　３１４００１；２．Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｗｕｆａｎｇ－
ｚｈａｉ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｌｉｍｉｔｅｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｊｉａｘｉｎｇ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　３１４０００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｒｏｍ　ｉｎｄｏｃａｌｍｕｓ　ｌｅａｖｅｓ，ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ，
ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｌｉｑｕｉｄ－ｍａｔｅｒｉａｌ　ｒａｔｉｏ，ｅｘ－
ｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　ａｓ　ｗｅｌ　ａｓ　ｔｈｅｉｒ　ｃｒｏｓｓ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．Ｂａｓｅｄ　ｏｎ
ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗａｓ　ａｓｃｅｒｔａｉｎｅｄ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｌｉｑ－
ｕｉｄ－ｍａｔｅｒｉａｌ　ｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　５０∶１，ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　７６％，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　８０ｍｉｎ　ａｎｄ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ
ｗａｓ　２３４ Ｗ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｗｉｃｅ．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｆｌａ－
ｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　２．０５２％ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｃｔｕａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　２．０１７％．Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｖａｌｕｅｓ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ
ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈｉｎ　ａ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｒｒｏｒ　ｏｆ　１．７１％，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ａｇｏｏｄ　ｆｉｔｎｅｓｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｉｎｄｏｃａｌｍｕｓ　ｌｅａｖｅｓ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ
５３１