全 文 ：菌 物 系 统 19 ( 3 ) : 396一 4 00 , 2 0 00
几扣c o sy s te m a
A N T I T U M O R M E C H A N IS M O F P O L Y S A C C H A R I D E 一P R O T E I N
C O M P L E X F R O M T H E C U L T U R E F I L T R A T E O F T RI C H O L O几工J
L O B月 y石八百百
L xu R
n g l 0 0 1 v
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.
2 x IN G 切一 Ju n l z H A o L i 3 z H A N G s h-u 下 n g Z
(
,
D印 a r漱 n t of 从 e r o b i o lo 舒 , 肠 n肋 1 vn i , e r s i今 , 万 a nj in 30 00 7 1; ’ D印a r恤 n t of 及 0 20舒 , 功。 。 in e s。 vn i v e r s i印
of 伪n g 劫 n g , 物 n g 幼n g : ’加nj in 物明 i la z, 万 a nj in 3 0 0 2 1 1)
A B S I…R A C T : hT e op ly s ac e h iar de 一 Pr o te in e o m P le x (SP 代〕 w i ht an it t u n l o r ac it v , yt w as i s of aet d fr o m het
c lu 加 r e fl l t ar et o f rT i e h o lo am ot b哪℃ n s e
.
A t e e l l lu ar le v e l
,
i t had a bili ty ot re s ot re o r e hn acn
e ht e
P hag oc y it e fu n e it o n o f pe ir t o n e al e x u da te e e ll s ( P E C ) an d T-C e l l im tog
e in e ac it
v i ty
o f t l l ll l o -r be iar gn
im
e e
.
A t m o le e ul ar le v e l
,
i t e o ul d re s t o re ht e e x Pre s s io n le v e l o f i n te rfe or -n y (I F卜卜 Y) g e n e i n
s lP e n oc y te s an d P E C o f t tun
o卜 be an n g nu e e
.
I n a d d i it o几 ht e e x Pre s s io n le v e l o f ht e an it 一 y ot ik ne
t“ 叮 sof 刚飞 g or w ht afC t o甲 ( T G-F p) w as d o w -n re g ul a te d : n s lP e n oc y te s o f t u m o r 一长 an 飞 im e e b y SP 代 .
hT
e re of re
,
ht e an it t t l l l o r m e e l l乏u五s m o f SP P〔 s e e m s t o be a t itr bu te d to h o s t- n l e id ate d in l n lun o m od ul a it o n
.
K E Y W O R D S : P o l y sac c h a ir d e
,
rT i c h o l o脚 l o b盯 e n s e , C y t o ik n e , Inu u n o m od u la it o n
rT ie h o ot m a ot bay e n s
e 15 a ne w re e o dr o f m u s ll ro o m s pe e i e s of u dn i
n H o n g
oK
n
g (C h a n g &
M a o
,
199 5 )
.
A P o ly s朗 e h iar de 一Por et in c o m P le x (P S CP ) w as is o l a et d for m ht e e ul t u er if l atr et o f
rT ie h o l o ma l
o b即 e n s e , e o n iat in n g 4 0 . 0% po ly s ac e h an d e w hi e h e o n s is et d o f g al ac ot s e , g lu e o s e ,
m
an
o s e ,
fuc
o s e , a ar b i n o s e an d ht am
n o s e , an d 30
.
1% P r o et in w hi e h w as e o m po s e d o f 1 5 洲n o
ac ids ( iL u e t al
,
199 5 )
.
I t s ig in if e an it y suP p er s s e d ht e g or w ht o f s 一 1 80 s o li d tum
o r i
n v
i
v o
.
H o w e v e r, het er h
a v e be e n afr fe w
e r er op srt o n het an it tunt
o r Po ly s ac e h a ir de s Per s e n t i n het
e u l tu er
if l加 et ht an o n ht o s e i n f ur iit n g 伙对 l e s an d m y e e lia . In s Pi et o f het id fe er n e e i n an it t u n l o r
op ly s ac e h硕 d e o ir g i n s , i t 15 g e n e alr ly s ug g e s et d ht at het an it t l l l n o r ac it o n o f P o ly s ac e h iar d e s m ay be
b, h
o s t- n l e id a et d im m u in yt ( C h
a n g
,
1996 : 玫un g e r a l . , 19 97 ) . 丁七e Per s e n t s ut dy w as de s i g n e d ot
c l硕 fy ht e er la it o n s h i P o f ht e im u ne er spo n s e s an d a
n it tu n l o r ac it v iyt 饰 as s e s s i n g ht e m ed ul a t o yr
e fe e st o f PS P C o n e e ll一m e id a et d 11l l m un i yt a n d e y ot ik ne e
x
Per s s io
n
l e
v e l
.
1 M a t e
r i a l s a n d M
e t h o d s
1
.
1 C h a r a e te r iz a t io n o f Po ly s a c e h a r id e一 P r o t e i n e o m P le x (PS CP )
T卜c c ul t l l r e if l比 et o f rT ie h o lo m a l o bay e n s e w as c o nc e n atr et d u n de r er d uc e d P er s s u er , an d
Per e i iP at et d w iht 3
v o lum
e s o f e ht an o l
.
hT
e Per c iP ita t e s w e er d is s o l v e d i n d i s it ll e d w a et r
,
d ia ly
z e d
ag ia n s t id s it l le d w a et 几 an d a PPli e d to a D E A E we c e llu lo s e c o lunt
n
.
S et Pw is e e l u it o n w as pe for mr
e d
w iht d is it l le d w a et r an d a lin e r g ar id e n t Na C I
s o l u it o n (0 一 Zm o l / )L . 刀 l e f ar e it o n o f d is it l le d w a et r
e l iut o n e
x
hi ib et d l
e s s an it t
Ll l l l o r ac it v i yt
.
A fr
a e it o n (0 4 5m o l / L ) o f Na C I g
r a d le n t e l u it o n h ed
o b v i o us an it t l l ll l o r ac it v i ty
. 卫 115 fm e it o n w as d e s i g n a et d as P S P C . P SCP 15 n o t a g luc an
,
b u t ar het
r
i t 15 a h e et or po ly m e
r
.
I st Por et in po rtj o n e o n s is st o f P er d o im n a n it y ac iid e iam
n o ac id s
, s uc h as
砒 e e iv e d: 19 9 9司 7刃9
DOI : 10. 13346 /j . mycosystema . 2000. 03. 018
3期 刘 方等 :洛巴 口蘑滤液中多糖蛋白复合物的抗肿瘤机制 39 7
a s Pa 山 cn a dgl tl ta l l li e 朗i ds.h Tem ol e eu la rm a so sf P SC P1 5ab ou t 1 0 5kD aby g el 一hr om a t oga r Phy
on Se Pha r o e sC Le sB 4 (i Lu
eta l
,
1 99 5 )
.
1
.
2 E x P e r i m e n t a l a n im a ls
M al e IC R m ie e (2 0 ot 2 5 9 ) an d i
n ber d B A L B / e m i c e ( 18 t o 2 0 9 ) w e er u s e d i
n 面 5 s tu d y .
hT
e m ie e w e er d i v ide d in ot g or u p s a
n d h o us e d un d
e r n o mr al la bo ar to 卿 c o n d iit o n s (2 1 士 2℃ , 12 / 12 h
lig h -t d a r k e y c l e ) w iht fer e ac c e s s to s ant d
a r d rod
e n t e h o w a n d w a et r
.
1
.
3 rP e P a
r a tio n o f S a r e o m a 1 80 (-5 1 80 ) e e l ls
S娥 o m a 1 80 (S一 180 ) e e l ls w e er inj e e et d in tar pe ir ot n e al ly a n d m ia n面 ne d in het pe ir ton e um o f
m al e IC R m i e e
.
nA
IC R m o us e w as s ac ir fl e e d o
n ht e s e v e n ht d a y a f te r in t r a pe ir ot ne al i n oc ul a it o n o f
S一 180 an d ht e a s e i it e fl ul d w as e o ll e e et d
. 丁h c e e ll s w e er w as h e d th er e it m e s , 阴d th e e e ll
s us 详 n s io n w as d il u et d ot e e l ls 1 x 1 0 , / m l . 仆 e n , 0 . 1 m l ( e e l ls 1 x 10 7 / m l ) s 一 1 50 e e ll s w e re
t ar l l s P lan te d s u比 u at n e o u s l y in to ht e ir g h t g or i n o f m al e B A L B / e m i e e .
1
.
4 rP
e P a r a t io n o f P e
r i to n e a l e x u d a t e e e l ls a n d s P le
n o c y te s
P S P C w as inj e e te d i n t r a pe ir to n
e
al ly i
n
im e e of r 10 e o n s e c u it
v e d a y s a t hte d
o s e o f 2 0 m g / kg / d
.
丁七c m i e e w e re s ac ir fl e e d o n ht e s e c o dn d a y a fte r e o m P le it o n o f sam P le a d而 in s t r a t io n . eP ir ot n e al
e x u
da te
e e lls (P EQ w e re re e o
v e re d b y la v ag e o f ht e pe ir ot
n e al e a v ity w i ht ie e e o ld 】Ia l l k l s b a lacn
e d
s al t s o l u it o n (H B S S ) an d ht e s P l e
n
oc y te s w e re o b如 n e d b y h o m o g e 面 z in g s P le e n w iht ie e e o ld 1 1B S S ,
hT
e e o n
otr l g
r o uP o f m ic e w as s im ilar l y 吮 a et d w iht 0 . 9% Na C I s o lu it o n .
1
.
5 喃 t o g e n ie r e s P o n s e o f T e e ll s (L iu e r a l o 1 9 89 )
T e e l ls w e er is o l a et d for m m un
n e s P l e n oc y et s in het fl as k
s e o a et d w iht a n it 一B e e l ls an it bo d y
.
aM
e or p h a g e s w e er er m o v e d b y a d h e er n e e o n a e 己uetr w
e ll fo : 2 h
.
T、 e n , T e e l ls (2 x 1 0 6 / 间 )
w e er c ul ut er d in het Per
s e n e e o f o
,
10
,
20 an d 4 0 协g / m l o f C o n A er s pe e it v e ly fo r 4 8 h be fo er
ht e y w e er p山 s e d w i小 0 . 5 o C i o f [ , H ] ht ym i山 n e ( s沐 e i if e ac it v i妙 5 卜e i / m m o l e , 枷 e sr ham , U K )
fo r 6 h
.
Th e e e l ls w e er ht e n h a vr e s et d o n t o a g l as s if be r if let r us i n g a e e ll h var
e s et r, an d het
r a d i o ac it v i yt w as d e et mr i n e d u s i n g a B e c km an
s e i n it l la it o n c o un et r (er fe er n e e )
.
hT
e m i t o g e in e ac it v i yt
w as e x P er s s e d as m e a n e o un st pe r 而 n u et (C P峋 .
1
.
6 hP a g o e y it e fu n e t io n o f P e r i t o n e a l e
x u d a te e e l ls (L i u e t a l
. ,
19 93 )
P e ir to n e a l e x du a te e e l ls (P E C ) w e re d ilu te d w i ht RP MI m
e d ium
e o n iat 山 n g 10% fe atl ob v i n e
s e
rum
, a n d ht e n s e e d e d i n 9 6一w e 一1 m ie or p l a et s w i山 0 . 5 x 10 5 , 1 x 10 5 an d 2 x 10 5 e e l ls / o . lm l / w e l l
er s详c it v e l y · hT e c e l ls w e er in e u ba et d a t 37℃ in a h~ d iif e d a mt o s p h e er suP li
e d w iht s% C O Z fo r
2 4 h
.
hT
e e u l t
u er s w e er er P lac e d w iht fer s h H B S S e o
n
iat 而 n g o刀0 5% n e u tI’a 1 er d fo r l 玩 a n d het
n e u喇 er d u pakt e b y het e e ll s w as m e as u er d us i n g a im e r o p la et er a d e r (35 50 B i于砌 d 诵 e or P laet
eR a d e r, U S A ) a t 5 4 0 nm
.
1
.
7 A s a y o f I F-N Y
a n d T G F一 p g e n e e却 r e s s io n le v e l
1
.
7
.
1 R N A e
x t r a c it o n : P E C a dn s P l e n co y et s o f het m i
e e w e er e e n itr fu g e d a t 50 00 r /而 n fo r s 而 n
er s pe e it
v e l y
,
an d ht e s
u
pe nr a ant t w as id
s e
adr
e d
. 丁如c e e ll s w e er ly s e d in 4 m o l / L g ua in id 正 um
面oc y an a et (G刀 s o lu it o n c o n atj n in g 0 . 7% m e 代叩oct ht an o l . 仆e e e l l ly s aet w as i nc u b a et d a t 65 ℃
fo r 5 m i n
, a ll d p
u t o n ic e a t o
n e e of r 5 m i n
.
2
.
5 m l o f e e l l l y s a te w as o v e ir ia d ot 1 ml o f
5
.
7m o l / L C sQ an d s ubj
e e te d to u l tar c
e n tn gfu
a it o n a t 1 8℃ , 32 0 00 r/ m i n w iht SW 60 iT or ot r o f
X -L 80 ul it 习 c e n itr fug
e fo r 18 h
. 丁b e s u pe m a ant t w as d is e adr e d
,
an d ht e R N A pe l le t w as id s s o l v e d
i n 400 “ 1 d d 坟o , an d ht e n 4 5 协1 o f 3m o l / L N叭 c an d 1 m l e ht an o l w e re a d d e d . 丁七c R N A 详l le t
w as o b面 n e d a f te r e e n itr fu g a it o n a t 15 00 0 r/ im n of r 30 m i n a n d w as he d w iht e ht an o l . R N A
3 98 菌 物 系 统1 9卷
n n o c c et I ’ ai t n ow s ad et em ri n eb dym es aui rn gh t o ePi t el d aen si t y at 20 6m n.
1
.
7
.
2R ev ers et I ’ an s ei rpi t on - 加l ym e哪 e eh i an r ec ai t on :R N Asm apl ew s ah e at edt 5 6 ao Co fr 5mi n
n adr ev ers e一t n r a
s ei r b ed at 3 7℃o frh 1i n a20协1 r ec ai t onmi x( o frl 协 9ot o ft al R N A) eon 如i n n g
4 0ui nt sR Ns a
ei nh ii t o br
,
0
·
l 协9 o lig o dT , 2一 , 8
,
o
·
s m m o l / L o f e ac h d刊陌p s , s o ln
o l / L T ir s 一 HC I
p H S
·
3
,
7 5m m o l / L KC I
,
3m m o l / L M g C 1
2 ,
l o ln
o l / L D l丁 an d 20 0 lU st M o l o g e y mun n e l e uk e im a
v iusr er
v e sr e t r a n s e ir p ast e
.
S a m p le s w e er s ot er d a t 一 70 oC u n it l s u bj e e et d ot P C R am P liif
e a it on
.
hT
e RT sam
P le e q说 v a le n t t o 0 . 1 协9 t o alt R N A w as bo ile d fo r 5 im n a n d q u ie k ly e 拓 l le d o n
i e e
.
CP
R c oc k iat l w a s a d de d t o ht e RT
s
am P l
e ot m ak e u P 5 0 协1 er ac it o n m ix e o n iat 而 n g l . s m m o l /L
M g a
:
20m m o l / L (NH
4
)
Z
S q
,
75 m m 0 1 / L irT
s一 H C I p H g
·
o
,
o
·
0 1% wT
e e n 20
,
o
·
2
nmI
o l / L o f e ac h
d N T P s
,
1 Pm o l / m l o f e ac h P ir m e sr an d 0
.
25 阴 st T h e mr o P ir m e P lus D N A po ly m e asr e
(hT
e
mr
o P ir m e Plus 20 7 )G
.
P C R w as pe for mr
e d fo r 30 e y e l e s o r as iind
e a et d
, e ac h e y e l e e o n s is it n g
o f 1 m i n o f d e n a ut ar it o n a t 94℃ , 1 m in o f a n n e a li n g at 5 6 oC ( o r a t l o oC be lo w ht e m e lit n g
te m pe ar tu re o f P ir m e r) a
n d 1 m in o f e x te n s io n a t 7 2℃ . hT e re ac it o n P r od cu ts w e re v i s aul iz e d b y
e l e e otr hP
o re s is o f 1 0件1 re ac it o n m i x t u re a t 100 V of r 1 h in 1. 5% s y ne gr e l a n d 0 . 7% a gaor s e g e l
e o n如 ih n g 0 . 5卜g / m l e面 d ium bor m ide . 1 k b D N A l ad de r (B RL ) w as run i n P aal le l as a m o l e e ul ar
w e ig h t m a r k e r (Por
v id i
n g m ia n b a n d s a t 1 0 1 8
,
5 06
,
39 6
,
34 4
,
2 9 8
,
2 2 0 a
n d 2 0 1 b P )
.
hT
e
g ly e e alr d e hy d e一 3一 Ph o s Ph a et 一d e hy d or g e n as e (G A P D H
,
4 52 bP ) w as us e d as i
n et nr al sant d
a rd in 面 s
s t u dy
.
S e q u e n e e s o f ht e PC R P ir m e sr w e er s h o w n in T a b le 1
.
T a b l e l 反q u e n e e s o f th e P r i m e r s u s e d in R T一 P ( : R
S I Z e
C y t o k in e s S e q u e nc e ( 5
’ 一 3 ’ )
( b P)
l
upe
r
I U 、 、 匕 r
P n m e r
P n m e r
A C C A C A G T C C A T G〔 !C A T C A C
T C C A C C A C C C了 C汗T C〔丁 G T A 4 5 2
,、沙ǐ、n,, ,4吧 rI U 叭 e l P fl m e rP fl m e f A G〔 iA A C丁C〔汇! A A A A G G A T G G T G〔玉丁(义汗 (汇汇A G A A T T A T I…C l l A I T G
竖 r
I U 、 、 C f
P fl m e r
P fl m e T
C A T G G A (汇 T G G T G A A A C G G A A (汇 {(汇 {A TC
(汗C C A G I 、 ( iA C G I , C A A A A G A C A G 〔 :C A 〔了〔 !
2 R e s u l t S
T h e m i to g e n ie ac it v iyt o f het tum
o -r be an
n g m ie e w as l o w e r ht a n ht a t o f het
n o mr al m ic e
w he n T e e l ls w e er e u l tu er d i n ht e P er s e n e e o f 1 0
,
20 an d 40 件g / m l C o n A er s pe e it v e l y ( R g
.
l )
.
P S P C e o u ld s ig in if e a n t ly ( P < 0乃 l ) er s ot er a n d i nc er as e ht e T e e l l m i to g e n ie ac it v i yt o f het
t t l n l o 卜be a ir n g im e e i n ht e s am e C o n A c o nc e n atr it o n s
.
P h a g oc y it e f u n c it o
n o f pe ir ot
n e a l e x ud a et
e e ll s ( P E C ) w as er la et d t o ht e i而 ib ot yr ar it o s o f t Ll ln o r . hT e P E C Ph ag oc y it c f u n c it o n o f ht e
t l l l l l o 卜be an n g m ic e w as lo w e r ht an ht a t i n n o mr al m ie e i n a n y e e ll e o n e e n ialtr
o n (R g
.
2 )
.
p s p C h ad
s i g hi if e an t (P < 0刀 l ) a b il ity t o er s ot er an d i n e er as e het d e Per s s e d p h ag oc y it e f u l l e it o n o f het t u n l o r
be a ir
n g m ie e
.
P S P C had a ib l
, yt t o er s to er th e I F N es Y e x Per s si o n l e v e l in s lP
e n co y et s a
l ld PCE
o f t L
ll l l o 二be an n g
im e e ht o u g h I F卜卜 Y P r do cu it o n w as ihnj ib et d i n tutn o卜 be an n g m ie e ( R g
.
3 )
.
hT
e e x Per s s io n le v e l

0 40菌 物 系 统 9 1卷
Pr o dc ui t
on in sPl
en o c y to s ef t
u
m o 卜 b ear in gm i e e.
h T
er P en s ets tud yd em o
n s tr a t ed h ta th ta en i t tum r om e eh a 面 sm o C f P P Sm 一 gh tb ea tr i tb u t edo t
ho sm - t edi a t edm imn o um o d ula i tn o
.
h T
er eo fr e
,
PS CP has po et
n it a l fo r d e v e l o P m e n t as a n e w adj vu an t
an it tum
o r d ur g
.
IR E F E R E N C E S I
A b b a s A .K L l e h tm a n A H
,
P o be r J S
,
19 9 1
.
eC l l
: `l a r a n d oM le
e u al r mI m
u n o l o舒 . P ih la d e lP ih a : W . B . S a un d e rs
B e r g D J
,
L y n e h R G
,
19 9 1
.
I m m u n e d y s fu
n e it o n 一n m 一e e w 一t h P las m a e y t o m as , I
,
E v id e n e e th a t tr a ll s fo urn
n g
g r o w ht fac t
o卜 p e o : 、 t n b u te s t o ht e ai t e er d e x P er s s l o n o f a c it v a it o n er e e P ot sr o n h o s t B ly m P h oc y et s . 几 e
oJ u r n a l of mI
r尹了u r之0 10 尺、、 14 6 : 2 8 6 5一 2 8 7 2 .
C al la dr R E
,
l 9 9 0
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c’l 丫o k办, e s ` 2 , , d B 匀 、n 少 l , o 〔3 et s . oL n d o n : A e ad e m ie P er s s
C h a n g 民 19 9 6 . uF n e it o n a l P r o pe rt le s o f e d l b le m u s h r o o m . 加 tr i it o 刀 掩 v i e 、、 s , 54 : 9 1一 9 3
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比 u n g M Y , uF n g p 长 C h o y Y M , 1 99 7 . hT e i s o la it o n a n d e h a ar e te ir z a it o n o f an inu u n o m o d u l a t o卿 a n d
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C h a n g S T
,
19 9 5
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,
19 9 3
.
A e it v a it o n o f ep ir t o n e a l m ac r o Ph a g e s by Po ly s ac e h a r o ep Pit d e fr o m ht e
m u s h r o o m
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肠 z u n o T , S ia t o 杖 N i s hj t o b a T , e t a l , 19 9 5 . A n it turn o 卜ac it v e s u bs at n c e s for m m u s 】l r o o m s . oF o d 及 v le w
nJ et r n a l i o n a l
,
1 1: 2 3一 6 1 .
Sih b a扭 Y , Tam u r a 长 Is ih d a N , 19 83
.
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I n e o n n e e u o n w i ht i ts hi g h le v e l in tu m o 卜be iar ng im c e . aC n c e r
凡 s e a r c h , 4 3 : 2 8 89 ~ 2 8 9 6 .
洛巴口蘑滤液中多糖蛋白复合物的抗肿瘤机制
刘 方 ` 黄容春 2 邢来君 ` 赵 力3 张树庭 2
(`天津南 开大学微生物系 天津 3 0 0 0 71 ; 2香港中文大学生物系 香港 ; ’ 天津医院 天津 3 0 0 2 1 1)
摘 要 : 从洛 巴 口蘑培养滤液中分离出一 种具有抗肿瘤活性的多糖蛋 白复合物 (P S P )C 。
P S P C 在细胞水平有能力恢复和增强带瘤鼠腹腔浸出细胞的吞噬功能和 T 细胞的促分裂活
性 。 在分子水平 , P SCP 能恢复带瘤鼠脾细胞和腹腔浸出细胞内 I F卜卜Y基因的表达水平 。 另
外 , P s cP 能够下调带瘤鼠脾细胞内 “ 抗细胞因子 ” T G -F p的表达水平。 因此 , P s P c 的抗肿瘤机
制可 归咎于寄主介导的免疫调节作用 。
关键词 : 多糖 , 蘑菇 , 细胞 因子 , 免疫调节
中图分类号 : Q 9 39 . 9 3 文献标识码 : A 文章编号 : 1 00 7一 3 51 5一 62 00 0 )0 3一39 6一4 00