全 文 ：[中药指纹图谱 ]
覆盆子药材 HPLC指纹图谱的研究
陈林霖 , 　潘　娟 , 　赵陆华* , 　阳凌燕
(中国药科大学分析测试中心 ,江苏 南京 210009)
收稿日期:2005-11-08
基金项目:国家 “十五 ”重大科技专项 “创新药物与中药现代化 ”(No. 2002 AA2Z3214)基金项目资助。
作者简介:陈林霖(1980～ ),男 ,中国药科大学分析测试中心硕士研究生 ,从事中药分析研究。
*通讯作者:赵陆华电话:025-83271185 E-m ai l:zhao luhu a@ hotm ai.l com
关键词:覆盆子;高效液相色谱;指纹图谱
摘要:目的:研究中药覆盆子的高效液相指纹图谱 ,为科学评价及有效控制覆盆子药材的质量提供了可行的定性方法。
方法:利用反相 HPLC法测定了浙江 、四川 、福建等多产地覆盆子药材指纹谱 , 并以浙江产地为例阐述色谱条件为:A ll-
tech C
18
柱(250 mm ×4. 6mm , 5 μm), 流动相为乙腈-水 , 采用梯度洗脱 ,以 1. 0 m L /m in的流速于 21 l nm的检测波长处进
行检测。结果:覆盆子药材色谱指纹图谱中共检出 15个分离度良好的共有峰 , 通过考察了浙江产地 10批药材的指纹
谱 , 表明方法的精密度 、稳定性 、重复性均符合国家相关规定。结论:本方法可作为控制覆盆子药材质量的定性标准 ,为
厂方选择该药材的种植基地提供一定的依据。
中图分类号:R284. 1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2006)07-0937-04
HPLC fingerpr int ofRubus chingiiHu
CHEN Lin-lin, 　PAN Juan, 　ZHAO Lu-hua, 　YANG Ling-yan
(Ana ly tica lCen ter, China Pharm aceutica lU niversi ty, Nan jing 210009 , Ch ina)
KEYWORDS:Rubus ch ingiiHu;HPLC;fingerprin t
ABSTRACT:AIM:To estab lishHPLC finge rprin t fo r con tro lling the quality o fRubus ch ing iiHu. METHODS:
Analysis w as perfo rmed onA lltech C18 co lumn(250mm ×4. 6mm , 5μm)w ith am ix tu re of acetonitrile and w ater as
mob ile phase in g radien tmode, flow rate was 1. 0mL /m in, wave leng th a t211 nm. RESULTS:The re w ere 15 com-
mon peaks in the HPLC fingerprints o fRubus ch ing iiHu. TheRSD of precision and reproducibility lay w ithin 5 .
CONCLUSION:The me thod has good sensitivity and repeatabi lity. This ch roma tographic fingerprint method can
be used to contro ll the qua lity o fRubus chingiiHu.
　　中药覆盆子为蔷薇科悬钩子属植物掌叶覆盆子(Rubus
dhingiiHu)的近成熟果实 。性微温 ,味甘酸 , 入肝肾经 , 具补
肝肾 、缩小便 、助阳固精 ,明目之功效 , 临床上主要用于治疗
阳痿 、遗精 、虚劳 、目暗 [ 1] 。 现代药理研究表明其具有抗诱
变 、延缓衰老和免疫增强等作用 [ 2] 。 本药材主产于浙江 、四
川 、福建 、陕西 、安徽 、江西 、贵州等地。该药作为国家 “ 863
计划”肾宝片处方中药味之一 ,其指纹图谱的研究极具意义 ,
可为厂方选择药材 GAP基地提供实验依据。本实验所建立
的指纹图谱方法学研究目前尚无文献报道。该方法采用梯
度洗脱所得的 15个共有峰分离良好。
1　实验材料
1. 1　仪器
　　日本岛津高效液相色谱仪 (LC-10AD VP二元泵;SPD-
10A VP紫外-可见检测器);N2000色谱工作站(浙江大学智
能信息研究所)。
1. 2　药材与试剂
覆盆子药材 (由江西汇仁集团提供), 收集自浙江 、四
川 、福建 、陕西 、安徽 、江西 、贵州 , 经中国药科大学宋学华教
授鉴定为 Rubus chingiiHu, 乙腈(色谱纯 ,美国 Tedia公司 ),
水(纯净水),其余试剂均为分析纯。
2　方法
2. 1　色谱条件
　　色谱柱:A lltech C l8柱(250 mm ×4. 6 mm, 5 μm);流动
相:乙腈 (A)-水 (B)。 梯度洗脱:B相 , 0 ～ 45 m in(94 ～
85 ), 45 ～ 70 m in(85 ～ 75 ), 70 ～ 90 m in(75 ～
60 ), 90 m in(停止);流速:1. 0 mL /m in;检测波长:211 nm;
进样量:20 μL;柱温:40 °C。
2. 2　供试品溶液的制备
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称取覆盆子粗粉(过三号筛 )2 g, 加 60 mL水煎煮 1 h,
滤过 , 取滤液 10 mL用 20 m L水饱和正丁醇分 4次萃取 , 合
并萃取液于 45°C水浴氮气吹干 , 残渣用流动相溶解并转移
至 5 m L量瓶中 , 定容。溶液经 0. 45 μm微孔滤膜滤过 , 取续
滤液 , 作为供试品溶液。以 10 mL水代替滤液自 “用 20 m L
水饱和正丁醇分 4次萃取”起同法操作制备空白溶液。
2. 3　测定方法
吸取供试品溶液 20μL,注入高效液相色谱仪,结果见图 1。
图 1　覆盆子样品的色谱图
F ig. 1　The typ ical HPLC Chromatogram of samp le
2. 4　方法学考察
2. 4. 1　空白试验　吸取空白溶液 20 μL注入高效液相色谱
仪 , 结果见图 2, 表明提取过程中所用溶剂对覆盆子指纹图
谱中共有峰检出无干扰。
图 2　空白溶液的色谱图
F ig. 2　HPLC Chrom atogram of b lank
2. 4. 2　精密度试验　取批号为 0004010的样品 , 按 2. 2项
下方法制备供试品 , 连续进样 6次 , 检测指纹图谱。 测得其
共有峰相对保留时间的 RSD <2 , 相对峰面积比值 RSD <
3 , 表明方法精密度良好。
2. 4. 3　重复性试验　取批号为 0004010的样品 6份 , 按 2. 2
项下方法制备供试品 , 分别进样 , 测得其共有峰相对保留时
间的 RSD <2 , 相对峰面积比值 RSD <3 , 表明方法重复
性良好。
2. 4. 4　稳定性试验　取批号为 0004010的样品 , 按 “ 2. 2”项
下方法制备供试品 , 分别在 0, 2, 4, 6, 12 h进样。测得其共
有峰相对保留时间的 RSD <2 , 相对峰面积比值 RSD <
3 , 表明样品溶液在 12 h内稳定。
2. 5　指纹图谱及各项技术参数
根据 10批供试品溶液 HPLC谱给出的相关参数 , 比较
供试品谱图 ,其中 15个峰是各批供试品所共有的 , 因此确定
这 15个峰为共有指纹峰。在共有峰中 ,以 5号峰的峰面积
为 1, 6、9号峰的峰面积大于总峰面积的 10 ,计算峰面积比
值。其余各共有峰均按其相对保留时间定性。
技术参数:
共有峰峰号(相对保留时间):1(0. 297), 2(0. 486), 3
(0. 555), 4(0. 777), 5(1), 6(1. 220), 7(1. 720), 8(1. 863),
9(1. 927), 10(2. 028), 11(2. 229), 12(2. 340), 13(2. 636),
14(2. 656), 15(2. 673)。
峰面积比值范围:6(0. 703 ～ 1. 171)9(1. 146 ～ 1. 910);
10批供试品溶液检测结果见表 1和表 2。
3　讨论
3. 1　供试品溶液的制备
覆盆子的药理研究表明其有效成分集中在水溶性部分 ,
故本实验主要考察水溶性成分指纹图谱。且处方工艺为水
提醇沉 ,按处方用 80 乙醇沉淀 ,结果沉淀时间长且指纹图
谱峰数减少。因此改用正丁醇 、氯仿 、醋酸乙酯萃取 , 结果
氯仿 、醋酸乙酯萃取后所得样品峰数很少(见图 4和图 5),
表 1　 10批覆盆子共有峰相对保留时间
Tab. 1　 R elative reten tion tim e of comm on peaks for ten batches ofRubus ch ing ii Hu
peak num ber 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Average RSD( )
1 0. 297 0. 295 0. 295 0. 298 0. 296 0. 298 0. 300 0. 294 0. 296 0. 298 0. 297 0. 62
2 0. 490 0. 482 0. 490 0. 493 0. 485 0. 490 0. 482 0. 477 0. 483 0. 489 0. 486 1. 04
3 0. 553 0. 547 0. 563 0. 564 0. 559 0. 562 0. 549 0. 543 0. 553 0. 561 0. 555 1. 34
4 0. 777 0. 776 0. 777 0. 779 0. 775 0. 774 0. 785 0. 776 0. 773 0. 775 0. 777 0. 43
5* 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 0. 00
6 1. 227 1. 219 1. 220 1. 218 1. 219 1. 218 1. 220 1. 217 1. 220 1. 219 1. 220 0. 23
7 1. 725 1. 709 1. 716 1. 714 1. 756 1. 716 1. 707 1. 702 1. 714 1. 740 1. 720 0. 96
8 1. 868 1. 847 1. 861 1. 857 1. 897 1. 853 1. 865 1. 836 1. 857 1. 890 1. 863 0. 99
9 1. 960 1. 941 1. 955 1. 951 1. 996 1. 947 1. 968 1. 929 1. 951 1. 975 1. 957 0. 96
10 2. 028 2. 009 2. 024 2. 020 2. 064 2. 014 2. 042 1. 996 2. 018 2. 060 2. 028 1. 07
11 2. 219 2. 211 2. 220 2. 218 2. 277 2. 208 2. 265 2. 194 2. 213 2. 267 2. 229 1. 30
12 2. 330 2. 321 2. 331 2. 328 2. 388 2. 322 2. 381 2. 303 2. 321 2. 377 2. 340 1. 28
13 2. 628 2. 618 2. 632 2. 628 2. 696 2. 603 2. 698 2. 581 2. 604 2. 671 2. 636 1. 51
14 2. 643 2. 640 2. 651 2. 650 2. 726 2. 625 2. 715 2. 598 2. 623 2. 693 2. 656 1. 57
15 2. 665 2. 655 2. 670 2. 666 2. 735 2. 640 2. 736 2. 617 2. 641 2. 709 2. 673 1. 52
* S tandard
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表 2　 10批覆盆子共有峰相对峰面积
Tab. 2　 R elative areas of comm on peaks for ten batche s ofRubus ch ingii Hu
Batch No.
Peak 6 Peak 9
Percentage of
the total p eak area
Relative
peak area
Percen tage of
th e total peak area
Relat ive
peak area
Uncommon tota lp eak area
percen tage of the total peak area
1 13. 078 1. 829 11. 346 1. 587 3. 746
2 14. 267 1. 720 14. 442 1. 741 3. 558
3 15. 781 1. 835 14. 004 1. 628 4. 895
4 14. 999 1. 145 12. 782 0. 976 5. 418
5 12. 782 1. 703 13. 758 1. 833 2. 659
6 14. 769 1. 919 14. 129 1. 836 5. 151
7 14. 098 1. 767 13. 908 1. 340 3. 287
8 16. 461 1. 853 13. 837 1. 558 2. 824
9 15. 220 1. 201 13. 097 1. 034 3. 489
10 13. 583 1. 695 13. 992 1. 746 3. 307
图 3　不同产地覆盆子的指纹图谱
F ig. 3　The over lapp ing p lot ofHPLC fingerpr in ts ofRubus
chingii Hu from d ifferen t hab itats
A. Zh ejiang　B. S ichuan　C. Fu jian　D. Shanx i　E. Anhu i
F. Jiangxi　G. Guizhou
而正丁醇萃取后所得样品峰数多 , 15个共有峰分离良好 , 基
本达到基线分离 , 所以供试液选取正丁醇萃取。
图 4　氯仿萃取部分色谱图
F ig. 4　HPLC chrom atogram ofCHC l3 extraction
图 5　醋酸乙酯萃取部分色谱图
F ig. 5　HPLC chromatogram of E tOA c ex trac tion
3. 2　测定方法
3. 2. 1　检测波长的选择
覆盆子的化学成分复杂 [ 3、4] , 研究水溶性成分的报道甚
少。 供试品于 190 ～ 400 nm处扫描 , 结果表明在 211 nm波长
得到的峰数最多 ,响应较高 , 故检测波长定为 21 l nm。
3. 2. 2　流动相及洗脱方式的考察优化
由于检测波长较短 , 选择乙腈为有机相。 但等度洗脱
时 , 有效成分出峰时间较长且分离效果不够理想 , 梯度洗脱
在 90 m in内可使色谱峰全部洗出 , 且多数峰达到基线分离。
3. 2. 3　色谱柱考察
考察了大连依利特色谱柱(250 mm ×4. 6mm , 5 μm)、
Dikm a色谱柱(250 mm ×4. 6 mm, 5 μm)和 A llte ch色谱柱
(250 mm ×4. 6 mm , 5 μm), 结果表明大连依利特和 D ikm a色
谱柱得到峰数少且分离差 , 而 A llte ch色谱柱虽然柱压高 , 但
分离度和重现性好 ,基线平稳。
3. 2. 4　产地影响
覆盆子指纹图谱中能检测到较多的色谱峰 ,通过对不同
产地覆盆子指纹图谱的比较(见图 3),可以看出不同产地基
本上都有相应的色谱峰 , 但是峰面积比值有所差异 , 见图 3
及表 3, 4。
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表 3　 不同产地覆盆子共有峰相对保留时间
Tab. 3　 Re lat ive reten tion t ime of comm on peaks for d iffrent hab itats ofRubus ch ingiiHu
peak num ber Zh ejiang S ichuan Fu jian Shanx i Anhu i Jiangxi Gu izhou A verage RSD( )
1 0. 297 0. 295 0. 295 0. 294 0. 297 0. 304 0. 298 0. 297 1. 12
2 0. 490 0. 487 0. 481 0. 481 0. 483 0. 502 0. 499 0. 489 1. 75
3 0. 553 0. 551 0. 547 0. 547 0. 550 0. 552 0. 545 0. 549 0. 54
4 0. 777 0. 780 0. 770 0. 797 0. 801 0. 765 0. 771 0. 780 1. 77
5* 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 0. 00
6 1. 227 1. 232 1. 238 1. 248 1. 248 1. 210 1. 234 1. 234 1. 07
7 1. 725 1. 776 1. 785 1. 779 1. 777 1. 744 1. 760 1. 764 1. 25
8 1. 868 1. 898 1. 897 1. 858 1. 873 1. 851 1. 856 1. 872 1. 03
9 1. 960 1. 936 1. 915 1. 934 1. 933 1. 929 1. 969 1. 939 0. 96
10 2. 028 2. 021 2. 058 2. 065 2. 050 2. 024 2. 071 2. 045 1. 01
11 2. 219 2. 265 2. 250 2. 259 2. 260 2. 248 2. 244 2. 249 0. 68
12 2. 330 2. 368 2. 347 2. 360 2. 374 2. 359 2. 322 2. 351 0. 83
13 2. 628 2. 649 2. 632 2. 627 2. 629 2. 612 2. 607 2. 626 0. 52
14 2. 643 2. 702 2. 687 2. 662 2. 685 2. 661 2. 637 2. 668 0. 90
15 2. 665 2. 720 2. 698 2. 674 2. 702 2. 677 2. 649 2. 684 0. 91
表 4　 不同产地覆盆子共有峰相对峰面积
Tab. 4　 Re lat ive areas of comm on peaks for d ifferent hab itats ofRubus ch ingiiHu
H ab itat
Peak 6 Peak 9
Percentage of
the total p eak area
Relative
peak area
Percen tage of
th e total peak area
Relat ive
peak area
Uncommon tota lp eak area
percen tage of the total peak area
Zhejiang 13. 078 1. 829 11. 346 1. 587 3. 746
S ichuan 17. 608 1. 933 12. 701 1. 394 4. 112
Fu jian 12. 994 1. 866 15. 119 2. 171 6. 698
Shanxi 11. 665 1. 632 17. 113 2. 394 5. 315
Anhu i 15. 064 1. 799 12. 561 1. 500 4. 441
J iangxi 11. 883 1. 696 12. 455 1. 778 3. 709
Gu izhou 10. 896 1. 433 10. 102 1. 328 6. 457
参考文献:
[ 1] 　江苏新医学院.中药大辞典 [M ] .上海:上海科学技术出版社 ,
1977, 2161.
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中医药学刊 , 2003, 2 l(12):2169.
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[ 4] 　谢一辉 ,苗菊茹 ,刘文琴.覆盆子化学成分的研究 [ J] .中药材 ,
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　　　　　　　　　　　　　　特此敬告
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