全 文 ：[饮片炮制 ]
山绿茶不同炮制品的质量研究
陈　勇 , 　甄汉深 , 　李耀华 , 　刘宝存 , 　谢　臻 , 　刘　婧 , 　辛　华
(广西中医学院药学院 ,广西 南宁 530001)
收稿日期:2004-08-35
基金项目:广西科技厅科技攻关项目(桂科攻 0322024-4B)
作者简介:陈　勇(1961～ ),男 ,江西南昌市人 ,教授 ,硕士研究生导师 ,主要从事药物分析 、中药及其制剂质量分析及新药质量标准制定
等教学与科研工作 ,电话:0771-2219867, E-m ail:cy6381@163. com.
关键词:山绿茶;芦丁;绿原酸;TLC;HPLC
摘要:目的:建立山绿茶不同炮制品的质量研究方法。方法:采用 TLC法鉴别山绿茶不同炮制品中芦丁和绿原酸 ,并采用
高效液相色谱法测定山绿茶不同炮制品中芦丁的含量。结果:芦丁进样量在 0. 11 ～ 0. 55 μg之间与峰面积呈良好的线性
关系 , r=0. 999 5。平均回收率为 99. 47 , RSD 为0. 41 。结论:本法灵敏 ,简便 , 重现性好 ,可用于山绿茶不同炮制品的
质量控制。
中图分类号:R283　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2005)07-0786-04
Quality study of d ifferent processing products ofHainan holly
CHEN Yong, 　ZHEN Han-shen, 　LI Yao-hua, 　LIU Bao-cun, 　XIE Zhen , 　LIU Jing, 　X IN Hua
(Schoo l ofP harmacy , Guangxi Colleg e of Trad iona l Ch ineseMed icine, Nann ing 530001 , China)
KEYWORDS:Hainan ho lly;rutin;ch lo rogenic acid;TLC;HPLC
ABSTRACT:AIM:To establish theme thods for qua lity con tro l o f diffe rent processed p roduc ts o fHa inan holly.
METHODS:Rutin and ch lorgenic acid inHainan ho lly had been inden tified by TLC , and ru tin in d iffe rent pro-
cessing products o fHainan ho lly w as dete rm ined by HPLC. RESULTS:The linear range of rutin w as good from
0. 11 to 0. 55μg, r=0. 999 5. The average recove ry w as 99. 47 (RSD =0. 41 ). CONCLUSION:Theme th-
od is accurate, simp le and reproducib le and can be app lied to the qua lity contro l of the different processing products
ofH ainan ho lly.
　　山绿茶为冬青科冬青属植物海南冬青 (Ilex
hainanensisM e rr)的干燥叶 ,含黄酮类 、三萜酸类 、绿
原酸 、鞣酸及山绿茶苷等成分 ,具有清热解毒 、平肝
潜阳 、活血化瘀的功效 , 临床上用于治疗高血压
病 [ 1, 2] 。文献报道[ 3]山绿茶降压片治疗原发性高血
压的总有效率明显高于复方罗布麻片 。山绿茶在广
西中药材标准中收载的炮制方法主要有两种:一种
为按绿茶加工方式进行 ,即将鲜叶尽快地用 260 °C
翻炒杀青 ,接着在揉搓台上用手揉搓 ,然后复炒复揉
2 ～ 3次 ,至叶色呈暗绿色 ,带有银灰绿色 ,略有光泽
为度 ,取出 ,放凉;另一种方法为将药材鲜叶直接晒
干 。为了控制山绿茶不同炮制品的质量 ,笔者对山
绿茶不同炮制品中的芦丁和绿原酸及其脂溶性部分
进行了 TLC定性鉴别 ,并采用高效液相色谱法对山
绿茶不同炮制品中的有效成分芦丁进行了含量测
定 ,现报道如下 。
1　仪器与试药
Ag ilent 1100高效液相色谱仪 (美国安捷伦科技
有限公司 );BP211D电子分析天平 (德国赛多利
斯);M ilpore simp lic ity-185超纯水器(美国密理博公
司);939型薄层自动铺板器 (重庆南岸贝尔德仪器
技术厂);点样定容毛细管(USA D rumm and scientific
C o. );ZF-Ⅰ型三用紫外分析仪 (上海顾村电光仪器
厂);LG16-WG高速微量离心机 (北京医用离心机
厂);SB2200-T超声波清洗器 (上海必能信公司 )。
芦丁对照品 (中国药品生物制品检定所提供 ,
批号 0080-9705,供含量测定用 )、绿原酸对照品(中
国药品生物制品检定所提供 ,批号 753-200210,供含
786
2005年 7月
第 27卷　第 7期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Ju ly 2005
Vo .l 27　No. 7
量测定用)、山绿茶对照药材 (中国药品生物制品检
定所提供 ,批号 121247-0301,供定性鉴别用 )。山
绿茶不同炮制品为:金秀药材 (广西金秀县提供 ,按
绿茶工艺炮制 )、上林药材 (广西上林县提供 ,按绿
茶工艺炮制 );80 °C烘干药材 、60°C烘干药材 、晾干
药材 、清炒药材 、药材鲜叶 (以上原药材均购于上林
县 ),并经鉴定符合广西中药材标准山绿茶项下药
材品种 ,确定为冬青科冬青属植物海南冬青 (Ilex
hainanensisM e rr)的干燥叶。水为超纯水 ,甲醇 、乙
腈 、异丙醇为色谱纯 ,硅胶 G(60型 ,青岛海洋化工
集团公司),其它试剂均为分析纯。
2　鉴别试验
2. 1　供试品溶液的制备
分别称取山绿茶不同炮制品粗粉约 2 g,置 50
mL锥形瓶中 ,加醋酸乙酯-石油醚 (30 ～ 60 °C )(3
∶1)混合溶液 20 mL,超声处理 30 m in,混合溶液弃
去 ,药渣挥干溶剂 ,加 50 甲醇 20 mL,超声处理 30
m in。滤过 ,滤液置蒸发皿中 ,水浴浓缩至约 5 mL,
加至聚酰胺柱上 (60 ～ 100目 , 3 g,湿法装柱 ,内径 1
cm ,长 30 cm),先加水 50 mL洗脱 ,洗脱液弃去;再
加 30 甲醇 50mL洗脱 ,收集洗脱液 ,水浴蒸干 ,残
渣加甲醇 2mL使溶解 ,作为鉴别绿原酸的供试品溶
液;另用 50 甲醇 50 mL洗脱 ,收集洗脱液 ,水浴蒸
干 ,残渣加甲醇 2 mL使溶解 ,作为鉴别芦丁的供试
品溶液 。
2. 2　对照品溶液的制备
分别取芦丁和绿原酸对照品适量 ,加甲醇制成
每 1 mL含 1 mg的溶液 ,作为对照品溶液 。
2. 3　芦丁的薄层色谱鉴别
分别吸取上述山绿茶不同炮制品 50 甲醇洗
脱部分制成的供试品溶液各 8 μL, 点于同一以
0. 7 羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板
上 ,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂 ,
展开 ,取出 ,挥干 ,喷以 1 三氯化铝试液 ,挥干溶
剂 ,置紫外光灯(365 nm)下检视 ,供试品色谱中 ,在
与对照品色谱图相应位置上显相同黄色荧光斑点 ,
结果见图 1。
2. 4　绿原酸的薄层色谱鉴别
分别吸取上述山绿茶不同炮制品 30 甲醇洗
脱部分制成的供试品溶液各 8 μL, 点于同一以
0. 7 羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板
上 ,以醋酸丁酯-甲酸-水 (7∶2. 5∶2. 5)为展开剂 ,展
开 ,取出 ,挥干 ,置紫外光灯 (365 nm)下检视 ,供试
品色谱中 ,在与对照品色谱图相应位置上显相同亮
蓝色荧光斑点 ,结果见图 2。
图 1　山绿茶中芦丁 TLC图
1. 芦丁对照品　2. 金秀县药材　 3. 上林县药材
4. 80°C烘干药材　 5. 60°C烘干药材　6. 晾干药材
7. 清炒药材　 8. 药材鲜叶
a为对照品斑点
图 2　山绿茶中绿原酸 TLC图
1. 绿原酸对照品　2. 金秀县药材　 3. 上林县药材
4. 80°C烘干药材　 5. 60°C烘干药材　6. 晾干药材
7. 清炒药材　 8. 药材鲜叶
2. 5　脂溶性部分薄层色谱鉴别
分别取山绿茶不同炮制品粉末约 5 g,置锥形瓶
中 ,加 70 乙醇 50mL,超声处理 30m in,滤过 ,滤液
置蒸发皿中 ,水浴挥干溶剂 ,残渣加水 20 mL使溶
解 ,置分液漏斗中 ,加乙醚 20 mL萃取 ,取乙醚提取
液 ,加活性炭 0. 5 g,振摇数分钟 ,滤过 ,滤液水浴挥
干 ,残渣加甲醇 2mL使溶解 ,作为供试品溶液。另
取山绿茶对照药材约 5 g,同法制成对照药材溶液。
分别取以上供试品溶液和对照药材溶液各 8 μL,点
于同一以 0. 7 羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G
薄层板上 ,以苯-丙酮-甲醇-甲酸 (8. 5∶1. 5∶1∶0. 2)
为展开剂 ,展开 ,取出 ,挥干 ,喷以 5 磷钼酸乙醇溶
液 , 105°C加热至斑点显色清晰 ,供试品色谱中 ,在
与对照药材色谱相应位置上显相同蓝色斑点 ,结果
见图 3。
3　芦丁含量测定
3. 1　色谱条件
色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C8 柱 (4. 6 mm
787
2005年 7月
第 27卷　第 7期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Ju ly 2005
Vo .l 27　No. 7
×150 mm , 5 μm),流动相:甲醇-乙腈-0. 4 磷酸溶
液 (含 0. 1 三乙胺)(10∶10∶80),柱温:29 °C ,检测
波长:358 nm[ 4] 。
图 3　山绿茶脂溶性部分 TLC图
1. 山绿茶对照药材　 2. 上林县药材　 3. 60°C烘干药材
4. 晾干药材　5. 清炒药材
3. 2　供试品溶液的制备
精密称取山绿茶不同炮制品粉末 2 g,用滤纸包
好 ,置 50 mL锥形瓶中 ,加醋酸乙酯-石油醚(30 ～ 60
°C)(3∶1)混合溶液 20mL,超声处理 30 m in,滤过 ,
混合溶液弃去 ,药渣挥干溶剂 ,加 50 甲醇 20 mL,
超声处理 30m in,滤过 ,滤液置 25 mL量瓶中 ,药渣
用适量 50 甲醇洗涤 3次 ,加 50 甲醇稀释至刻
度 。取约 2mL离心 10m in(10 000 r m in- 1),取上
清液作为供试品溶液 。
3. 3　对照品溶液制备
取芦丁对照品约 5 mg,精密称定 ,置 50 mL量
瓶中 ,加甲醇适量使溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得
(浓度为 0. 11mg mL -1)。
3. 4　系统适用性试验
采用辛烷基硅烷化硅胶为填充剂;甲醇-乙腈-
0. 4 磷酸溶液(含 0. 1 三乙胺 )(10∶10∶80)为流
动相;检测波长为 358 nm。理论塔板数按芦丁色谱
峰计算应不低于 3 000。
3. 5　标准曲线制备
分别量取上述对照品溶液 1, 2, 3, 4, 5mL,置 10
mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀备用 。在上述
色谱条件下 ,分别进样 10 μL,记录色谱图 ,以峰面
积对进样量进行回归 ,求得回归方程为:Y =159. 66
X +8. 77, r=0. 999 5,结果表明芦丁对照品进样量
在 0. 11 ～ 0. 55 μg之间与峰面积值呈良好的线性关
系 。
3. 6　精密度试验
取芦丁对照品溶液 10 μL,连续进样 5次 ,分别
测定其峰面积 ,结果表明仪器精密度符合要求 ,结果
见表 1。
表 1　 精密度试验结果
编号 1 2 3 4 5 X RSD( )
峰面积 879. 4 895. 8 898. 1 909. 4 898. 6 896. 2 1. 20
3. 7　稳定性试验
取供试品溶液 (金秀县药材)每隔 1 h分别进样
10 μL,测定峰面积值 ,表明供试品溶液在 4 h内保
持稳定 ,结果见表 2。
表 2　 稳定性试验结果
编号 1 2 3 4 5 X RSD( )
峰面积 164. 0 159. 6 159. 5 160. 4 160. 6 160. 8 1. 15
3. 8　重复性实验
取同一批供试品 (60 °C烘干药材 ),精密称取
约 1 g,共 5份 ,按供试品溶液制备方法制备 ,测定峰
面积 ,结果表明重复性良好。结果见表 3。
表 3　 重复性试验结果
编号 1 2 3 4 5 X RSD( )
峰面积 578. 9 578. 2 582. 5 581. 5 579. 9 580. 2 0. 31
3. 9　回收率实验
精密称取已知含量的同一供试品 (金秀县药
材)约 1 g, 分别精密加入一定量的芦丁对照品
(0. 11mg mL - 1)溶液 ,按供试品溶液的制备方法
制备 ,进样 10μL,记录色谱图 ,计算回收率 ,结果见
表 4。
表 4　 芦丁回收率测定结果
编号 原有量(mg)
加入量
(m g)
测出量
(m g)
回收率
( )
X
( )
RSD
( )
1 0. 237 7 0. 254 4 0. 489 3 99. 47
2 0. 229 6 0. 212 0 0. 441 1 99. 76
3 0. 231 5 0. 212 0 0. 443 4 99. 95 99. 47 0. 41
4 0. 225 2 0. 233 2 0. 457 0 99. 40
5 0. 233 8 0. 318 0 0. 549 7 99. 37
3. 10　样品含量测定
分别精密吸取不同炮制品供试品溶液及对照品
溶液各 10 μL,进样 ,记录色谱图 。以外标法计算各
样品中芦丁的百分含量 ,结果见表 5。
表 5　 样品中芦丁测定结果(n=6)
山绿茶不同炮制品 平均含量( ) RSD( )
金秀县药材 0. 022 98 1. 44
60°C烘干药材 0. 052 41 1. 17
清炒药材 0. 222 10 1. 12
上林县药材 0. 073 61 1. 00
晾干药材 0. 540 90 1. 19
4　讨论
4. 1　在芦丁和绿原酸的 TLC鉴别试验中 ,以醋酸
乙酯-石油醚 30 ～ 60 °C(3∶1)混合溶液脱脂效果最
好 ,以 50 甲醇为提取溶剂较好 ,且 TLC鉴别时斑
点拖尾较少。还比较了 50 甲醇提取液过聚酰胺
788
2005年 7月
第 27卷　第 7期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Ju ly 2005
Vo .l 27　No. 7
小柱和未过柱的区别:过聚酰胺小柱并以 30 甲醇
50 mL洗脱部分绿原酸含量最高 , 50 甲醇 50 mL
洗脱部分芦丁含量最高 ,且 TLC鉴别时斑点拖尾均
较少。未过聚酰胺小柱的 50 甲醇提取溶液 TLC
鉴别时斑点均严重拖尾。
4. 2　芦丁的薄层鉴别以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水
(5∶3∶1∶1)为展开剂 [ 7, 8] ,芦丁斑点 R f值约为 0. 5,
斑点清晰且不拖尾。绿原酸的鉴别则以醋酸丁酯-
甲酸-水(7∶2. 5∶2. 5)上层溶液为展开剂效果最好 。
在山绿茶的脂溶性部分鉴别中 ,采用苯-丙酮-甲醇-
甲酸(8. 5∶1. 5∶1∶0. 2)为展开剂 ,能分出 6组斑点 ,
且较清晰 ,拖尾较少。
4. 3　曾试用过 C18柱测定芦丁含量 [ 10 ～ 13] ,不断更改
流动相比例或加一定量的有机改性剂或扫尾剂 ,但
分离度达不到要求 ,或峰形对称性较差;改用 ZOR-
BAX Eclipse XDB-C8柱 (4. 6.i d×150 mm , 5 μm),
流动相为甲醇-乙腈-0. 4 磷酸含 0. 1 三乙胺 (10
∶10∶80)分离效果最好 ,峰形也较好 。采用本法可
灵敏 、快速 、简便地测定山绿茶不同炮制品中芦丁的
含量 ,可作为山绿茶不同炮制品的质量控制方法。
4. 4　山绿茶不同炮制品中芦丁含量测定结果初步
表明:以晾干药材含量最高 ,其次分别为清炒药材 、
上林药材 、60°C烘干药材 ,含量最低的为金秀药材 。
金秀药材芦丁含量偏低可能与其放置时间较久 ,部
分芦丁成分分解损失有关;清炒药材芦丁含量较高
可能与炒时温度不高 ,芦丁受破坏较少有关;而晾干
药材中芦丁基本不受破坏 ,故含量最高 ,因此山绿茶
的炮制方法以晾干为佳。
图 4　芦丁对照品(0. 11m g /mL)HPLC色谱图　a为芦丁
图 5　晾干药材 HPLC色谱图　 a为芦丁
图 6　60°C烘干药材 HPLC色谱图　a为芦丁
图 7　金秀药材 HPLC色谱图　a为芦丁
图 8　清炒药材 HPLC色谱图　a为芦丁
图 9　上林药材 HPLC色谱图　a为芦丁
参考文献:
[ 1 ] 　全国中草药汇编编写组. 全国中草药汇编 [M ] . 北京:人民
卫生出版社. 1973:194-195.
[ 2 ] 　方　鼎 ,沙文兰 ,陈秀香 ,等. 广西药用植物名录 [M ] . 广西:
广西人民出版社. 1984:281-283.
[ 3 ] 　藏　吾 ,马明彦. 中族山绿茶降压片治疗原发性高血压 80例
疗效观察 [ J] . 中成药. 1997, (12):58.
[ 4 ] 　钱彦丛 ,刘景东 ,黄　凡 ,等. 龙爪槐花中芦丁的薄层及紫外
光谱鉴别. 时珍国医国药 [ J] . 2003, 14(2):86.
[ 5 ] 　钱彦丛 ,刘景东 ,戎文慧 ,等. 薄层扫描法测定龙爪槐叶中的
芦丁含量. 基层中药杂志 [ J] . 2002, 16(1):26.
[ 6 ] 　梅　丹 ,张翠莲 ,李大魁 ,等. 11种市售曲克芦丁制剂的产品
质量评价 [ J] . 中国药学杂志 1998, 10, 33(10):605.
[ 7 ] 　王慧敏 ,孙凯云 ,吴安祥 ,等. 脉乐冲剂中蓬子菜成分绿原酸
及芸香甙薄层色谱鉴别 [ J] . 时珍国医国药 2000, 11(1):50.
789
2005年 7月
第 27卷　第 7期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Ju ly 2005
Vo .l 27　No. 7
[ 8 ] 　中华人民共和国药典 2000年版一部 [ S] . 北京:化学工业出
版社. 248, 177.
[ 9 ] 　赵登飞. HPLC测定山绿茶胶囊中芦丁的含量 [ J] . 中成药.
2002, 24(9):24.
[ 10] 　曾鸽鸣 ,余丹辉 ,邱细敏 ,等. 高效液相色谱法 (HPLC)测定
芦丁纯度和含量 [ J] . 分析科学学报. 1996, 12(1):23.
[ 11] 　朱丽华 ,蒋国强 ,杨水新. 高效液相色谱法测定菟丝子中芦
丁 、槲皮素及山柰酚的含量 [ J] . 浙江中医学院学报. 2001,
8, 25(4):65.
[ 12] 　钱秋霞 ,丛晓东. H PLC法测定不同干燥方法的贯叶连翘中
黄酮类化合物的含量 [ J] . 中草药. 2001, 32(5):407.
[ 13] 　胡君萍 ,杨建华 ,张　恒 ,等. 反相高效液相色谱法同时测定
新疆贯叶连翘中芦丁和金丝桃苷的含量 [ J] . 药物分析杂
志. 2003, 23(5):363.
不同三七饮片的重金属含量分析
张文斌 , 　崔秀明* , 　周家明
(云南省文山州三七科学技术研究所 ,云南 文山 663000)
关键词:生三七粉;超细三七粉;三七颗粒剂;饮片;重金属
摘要:目的:通过对生三七粉 、超细三七粉和三七颗粒剂三种不同三七饮片进行重金属含量分析 ,对三七饮片质量和炮制
工艺进行质量控制及评价。方法:分别用原子吸收分光光度计和原子荧光光度计按食品检验标准方法对不同三七饮片
进行微量重金属元素铅 、镉 、砷 、汞的检测。结果:生三七粉和超细三七粉重金属含量均低于国家标准《文山三七》规定
重金属限量 , 表明其炮制工艺可行 , 质量可靠。而三七颗粒剂中砷含量较高 ,有待对其炮制工艺进行改良。
中图分类号:R283　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2005)07-0790-02
　　三七 Panax nontg inseng(Bu rkill)F. H. Chen系我
国名贵中药材 ,其药用价值可与人参相媲美 。随着
人类健康意识的不断提高 ,人们对三七的开发利用
日益凸现 ,三七饮片经常被直接用于中医处方治病 ,
其质量好坏不仅直接关系到患者的用药安全有效 ,
还会对三七品牌声誉造成影响 ,开展三七饮片中的
重金属残留量分析研究 ,可为三七饮片炮制工艺的
优选 ,控制三七饮片质量提供依据。
1　材料及方法
1. 1　样品来源　分别取 3个批次的中试生三七粉 、
超细三七粉 、三七颗粒剂各 500 g于 50 ～ 60 °C烘箱
中烘烤 24 h以上备用 。
1. 2　仪器及试剂
1. 2. 1　WFX-120型原子吸收分光光度计和 AFS-
820型原子荧光光度计 ,铅 、镉空心阴极灯 ,砷 、汞编
码空心阴极灯 。
1. 2. 2　砷 、铅 、镉 、汞标准品 (购自中国药品检定
所), HNO3 (GR)、HC l(GR)、HC lO4(AR),硫脲 、抗
坏血酸 、KBH 4、KOH为分析纯 ,水为去离子水。
1. 3　测定方法
铅 、镉用原子吸收分光光度法 ,砷 、汞用原子荧
光分光光度法进行测定 。测定条件如表 1所示。
表 1　 测定条件的确定
测定方法 元素 波长(nm)
光谱通带
(nm)
灯电流
(mA)
原子化高度
(nm)
载气流量
(mL m in- 1)
燃气流量
(mL m in - 1)
空气流量
(mL m in - 1)
原子吸收法
铅 283. 3 0. 4 6 2. 0 3 10
镉 228. 8 0. 4 4 2. 0 3 10
原子荧光法
砷 193. 70 0. 4 60 8. 0 300 800
汞 253. 70 0. 4 60 8. 0 300 800
收稿日期:2004-06-14
基金项目:中药现代化专项资助:2002ZY-8
作者简介:张文斌(1974～ ),男 ,云南文山人,实习研究员 ,主要从事三七药材及其系列产品分析及质量控制. 电话:0876-8881535 E-mai l:
zw b37@yahoo. com*通讯作者。
1. 4　标准曲线的绘制
1. 4. 1　配制铅 、镉标准系列 ,取铅 、镉标准液适量 ,
用 0. 5 mo l L- 1的硝酸稀释铅浓度为 0. 05, 0. 1,
0. 4, 0. 8, 1. 0 μg mL- 1 ,镉浓度为 0. 05, 0. 1, 0. 2,
790
2005年 7月
第 27卷　第 7期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Ju ly 2005
Vo .l 27　No. 7