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中药凤尾草止血作用的实验研究



全 文 :2012年 第30卷 第5期
2012 Vol.30 No.5
新疆中医药
Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine
凤尾草系凤尾蕨科植物凤尾草,另名井栏边草
Pteris multifida Polir.的干燥全草,产于华北、中南、
华东、华南、西南地区。性寒,味淡、微苦,归大肠、
肝、心经。具有清热利湿、抗菌消炎、消肿解毒[1]等功
效,治疗痢疾、扁桃体炎、肝炎、糖尿病,抗肿瘤效果
佳[2]。目前,国内外报道对凤尾草尚缺乏系统的研究,
未见其止血作用的药理研究报道。为证实凤尾草具
有止血作用并探讨其止血机理,本文观察了凤尾草
对小鼠凝血时间、出血时间和血小板计数的影响。
1 材料
1.1 药物 凤尾草加水煎煮3次,合并煎液,过滤,
滤液浓缩至每100mL,相当于原生药50g,置于冰箱
备用,临用时稀释成所需浓度。云南白药,云南大理
制药厂,批号:2005127。强地松片,上海信谊药厂,
批号:2005079。
1.2 动物 昆明种小鼠,体重18~22g,雌雄各半,由
新疆医科大学实验动物中心提供(许可证号:
SYXK-新2003-0001)。
2 方法
2.1 对小鼠凝血时间的影响 采用毛细玻管法[3]。小
鼠50只,随机分为生理盐水对照组,凤尾草低剂量
(5g·kg-1)、中剂量(10g·kg-1)、高剂量(20g·kg-1)组,云
南白药(0.8g·kg-1)阳性对照组,每组10只。每日灌胃
给药1次,连续14d。末次给药后30min,用内径为1mm
的毛细玻管插入小鼠内眦球后静脉丛,深约4~5mm,
轻轻转动再缩回,自血液流玻管内开始计时,达5cm
血柱后取出毛细管平放于桌上。每隔30s折断毛细管
0.5cm,观察折断处有无血凝丝出现,记录从毛细玻
管采血到出现血凝丝的时间,此即为凝血时间。
2.2 采用断尾法[4] 分组及给药方法同上,末次给
药后30min,将小鼠固定,露鼠尾于外,用手术刀片
切割左侧尾静脉1/2处(严格控制切割深度),待血液自
行溢出开始计时,每隔30s用滤纸吸去血滴一次,直至
血流自然停止(滤纸吸时无血)为止,即为出血时间。
2.3 对小鼠血小板计数的影响 小鼠50只,随机分
为生理盐水对照组,凤尾草低、中、高剂量组,强的
松(0.05g.kg-1)阳性对照组,每组10只。给药方法同
上,末次给药后3min,摘除小鼠右侧眼球取血,用微
吸管吸血20μL于1%草酸铵溶液0.38mL内,充分摇
匀,吸一小滴置于计数板,静止10~15min后,于光学
显微镜高倍镜下计数。
3 结果
3.1 凤尾草各剂量组的凝血时间均明显短于生理
盐水对照组,表明凤尾草能促进小鼠的凝血功能。
结果见表1。
3.2 凤尾草各剂量组的出血时间均明显短于生理
盐水对照组,表明凤尾草能促进小鼠的血小板和毛
细血管功能。结果见表1。
组别 凝血时间(min)出血时间(min)
云南白药组 1.92±0.7**1 2.79±0.92**
剂量(g/kg)
0.8
动物数(n)
10
生理盐水组 2.95±0.96 4.26±1.22等容量 10
低剂量 5 10 2.25±0.58* 3.11±0.97*
中剂量 10 10 2.08±0.59** 2.93±0.75**
高剂量 20 10 2.01±0.72** 2.66±0.78***
表1 凤尾草对小鼠凝血和出血时间的影响(X±s)
与生理盐水组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
3.3 凤尾草各剂量组均能显著升高小鼠血小板数,
中、高剂量组升血小板作用与强地松相似,结果见表2。
组别 动物数(n) 血小板数(109/L)
强的松组 10 1 202.14±212.25**
剂量(g/kg)
0.05
生理盐水组 10 912.94±147.88等容量
低剂量 5 10 1 097.76±193.58*
中剂量 10 10 1 137.09±203.76**
高剂量 20 10 1 173.82±181.36**
表2 凤尾草对小鼠血小板计数的影响(x±s)
与生理盐水组比较,*P<0.05,**P<0.01。
中药凤尾草止血作用的实验研究
李 燕, 吴皓东
(新疆医科大学附属中医医院药学部, 新疆 乌鲁木齐 830000)
摘 要:目的:揭示凤尾草的止血作用机理。方法:用凤尾草5,10,20g生药·kg-1体重给小鼠连续灌胃14天,分别测定小鼠的
凝血时间和出血时间,并进行血小板计数。结果:凤尾草各剂量组和对照组比较,凝血时间和出血时间明显缩短(P<0.05,
P<0.01,P<0.001),血小板计数明显增高(P<0.05,P<0.01)。结论:凤尾草有明显的止血作用和升高血小板作用,提示凤尾草
升高血小板作用是其止血机理之一,也是其治疗血小板减少性出血的药理基础。
关键词:血小板;出血时间;凝血时间;凤尾草
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新疆中医药
Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine
2012年 第30卷 第5期
2012 Vol.30 No.5
祛寒除湿散处方来源于新疆一老中医多年临
床经验方,由桂枝、苍术、白芥子、木香、甘草、乳香、
制川乌和制草乌八味药材组成,具有祛风除湿散
寒、活血化瘀、消肿散结止痛。主治风湿性关节炎和
类风湿性关节炎,症见关节疼痛等症。方中药味较
多,前人已经对桂枝、木香、甘草、制川乌和制草乌
进行了含量测定,未对白芥子进行定量研究。白芥子
作为方中佐药,具有消肿散结、通络止痛之功效,临床
也可用于治疗关节炎[1],为了使制剂的质量标准更为严
谨,也更加符合中药新药注册管理办法中的相关要
求,对白芥子中的主要有效成分芥子碱硫氰酸盐进行
了含量测定,使该制剂的质量标准更加全面、可控。
1 仪器与试剂
仪器:Shimadzu-LC 2010C全自动液相色谱仪;
ShimadzuCLASS -VPV6.14SP1 数 据 工 作 站 ;
AS10200BDT超声提取仪(天津奥特赛恩斯仪器有
限公司);BS110S型电子天平(北京赛多利斯天平有
限公司);Millipore simplicity-185超纯水器(美国密
理博公司)。
试药:芥子碱硫氰酸盐(批号:111702-200501)
购自中国药品生物制品检验检定所;祛寒除湿散由
乌鲁木齐市金钱花工贸有限公司提供(国药证字
Z20120005);乙腈为美国Fisher公司产色谱纯;水为
超纯水;其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 [2-3] 色谱柱:Hepersil ODSC18(250×
4 .6mm,5μm);检测波长:326nm;流动相:乙
睛-0.08mol·mL-1磷酸二氢钾(15∶85);流速:1.00mL/
min;柱温:40℃。进样量为10uL。
2.2 色谱适用性试验 理论塔板数n=5.54(tR/Wh/2)2=
5628.24,说明在选定的条件下,色谱柱的某些条件
如柱长、载体性能及色谱柱填充均符合要求,测定
效果良好。
分离度R=2(tR2-tR1)/(W1+W2)=2.68,《中国药典》
规定[4],分离度应大于1.5,本项测定和计算结果,分
离度符合要求。
4 讨论
凝血时间 [5]是血液离体至凝固所需的时间,其
长短主要与各种凝血因子的含量和功能有关;而出
血时间是穿破毛细血管,自出血到自然止血所需的
时间,其长短与毛细血管功能、组织收缩力、组织因
子、血小板的数量和功能、纤溶等因素有关。凤尾草
水煎液能明显缩短小鼠的凝血时间和出血时间,证
实本品确有止血作用。而凤尾草使小鼠血小板数明
显增高无疑是其止血作用的机理之一,也是临床上
治疗血小板减少性出血的药理基础。实验结果还提
示,凤尾草可能通过影响某些凝血因子促进凝血功
能,要证实这一机理尚待进一步实验研究。
参考文献:
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].第二册.上
海:上海科学技术出版社,1999:122.
[2] 刘清飞,秦明珠. 凤尾草根茎的化学成分研究 [J]. 中草药,
2002,33(2):113-114.
[3] 陈奇.中药药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,1994:
484-485.
[4] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海.上海科技出版社,1991:496.
[5] 廖福龙,李文,温瑞兴,等.外伤血瘀与化瘀的凝血流变学实验研
究[J].中国中医药信息杂志,2008,2(3)28-29.
(收稿日期:2012-04-23)
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HPLC法测定祛寒除湿散中芥子碱硫氰酸盐的含量
张训缨1, 何承辉2, 于 宁2
(1.新疆维吾尔自治区食品药品监督管理局食品药品审评中心, 新疆 乌鲁木齐 830002; 2.新疆维吾尔
自治区药物研究所, 新疆 乌鲁木齐 830004)
摘 要:目的:建立祛寒除湿散中芥子碱硫氰酸盐的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定,以Hepersil ODS C18
(250×4.6mm,5μm)为色谱柱;以乙睛-0.08mol·L-1磷酸二氢钾(15∶85)为流动相;检测波长为326nm。结果:芥子碱硫氰酸盐
在0.000 75~0.25mg·mL-1范围内,峰面积与进样浓度具有良好线性关系,r=1;平均回收率为98.14%(n=6),RSD=2.87%。结
论:该方法准确、可行,可用于祛寒除湿散的质量控制。
关键词:祛寒除湿散;芥子碱硫氰酸盐;高效液相色谱法
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