全 文 ：绍 工 3卷 第 6 期 中国食用菌 E D IB L E F U NG I O F C HI N A
松 口 蘑 菌 种 的分 离与扩 一大 培养
廖树云 朱继熹
(四 川农业大学 雅安 )
张永泉
(四川省小金县科委》
摘要 松 口 蘑是我省 、 我国 出口 创汇平很 高的珍责野
生食 用菌。 属专性较强 的共生性菌根菌 , 菌种分离培 养较
难 。 为 了保护 这一资源 , 我们经 多年试验研 究 , 摸 索出了
分离和扩大培养松 口 蘑茵种的方法 及其适宜的培 养基 。 在
我省贡次分 离和扩 大涪养松 口 蘑菌丝体 成功 , 为 辛人工挂
种栽培打下 了基础 。
松 口蘑 T r `c h o l o o Z a ,、 ; a 才: u 扩a 介e 又名松
茸 , 是我省甘孜 、 阿坝 、 凉山三个少数民族
自治州出口创汇率很高的珍贵野生食用菌 。
1 9 8 5年开始开发 , 1 9 8 8年产量达到最高峰 ,
以后逐年下降。 松 口蘑属专性较 强 的 共 生
菌 , 菌种分离培养较难 , 目前尚不能人工栽
培 。 为了保护这一野生资源 , 为日后的半人
工栽培 , 人工接种作准备 , 我们从 1 9 8 6年开
始经过多年试验研究 , 摸索出 了分离和扩大
培养松 口蘑菌种的方法和适宜的培养基 , 在
我省首次分离和扩大培养松口蘑 菌 丝 体 成
功 。 现将研究结果报导如下 。
(一 ) 菌种分 离
分离材料 : 分离材料采自我省阿坝 、 甘
孜 、 凉山三州不同植被下的松口蘑子实体 ,
即巴郎栋矮灌丛下的松 口蘑 (以 I 表示 ) ,
高山标乔木林下的松口蘑 (以 亚表示 ) , 元
江拷 、 杜鹃矮灌丛下的松口蘑 (以 l 表 ) 。 均
系朵形正常 、 完整 、 生长健壮 、 无病虫 、 内
菌幕将破而又未破的子实体。
培养基 1号一葡萄糖20 克 , 酵母粉 5
克 , 琼脂 2 0克 , 水 1 0 0 0毫升 , i N 盐酸 1 . 6毫
升 , p H 6 灭菌后 p H S . 5 。
2 号一 A 试液 1 0 0 0毫升 , 酵母粉 5 克 ,
葡萄糖 20 克 , 蜂糖 20 克 , 盐酸 0 . 13 克 , 琼脂
2 0克 。 ( A 试被 : 盐酸 0 . 2克 , 硝酸钙 10 0克 ,
硫酸镁 0 . 25 克 , 磷酸二氢钾。 . 25 克 , 三氯化
铁少许 , 水 1 0 0 0毫升 , 灭菌后 p H .4 5 。
3 号一葡萄橄 2 0克 , 二 氯 化 钙 5 5 . 5 毫
克 , 酒石酸钱 1 克 , 烟酸 0 . 5毫克 , 叶酸 0 . 5
毫克 , 磷酸氢二钾 1 克 , 硫酸镁0 . 乒克 , 柠檬
酸铁 5 毫支 , 硫酸锌嫂。 巡毫克 : 硫酸锰 5 毫
克 , 水 1 0 0 0毫升 , 琼脂 2 0克 。
4 号一松 口蘑山土浸液 20 0毫升 (松口蘑
山土 2 0 0克 , 加水 1 0 0 0毫升 , 调 p H 4一 5 , 煮
沸 , 过滤 ) , 青刚叶煮汁 (3 四克青刚叶 , 加
水 1 0 0 0毫升 , 调 p H S , 煮沸 , 过滤 ) 2 0 0 毫
升 , 水 6 0 毫升 , 葡萄糖 5 克 , 酵母粉 10 克 ,
琼脂 2 0克 , pH S . 5。
上述培养基经高压蒸汽灭菌后 , 摆成斜
面备用 。
分离方法 我们采用了多抱子分离 、 菌
根分离 、 菌盖和菌柄的组织分离及菌褶分离
等几种方法 。 因产菇地条件差 , 所以分离方
法从简 。
1
。 种菇消毒处理 : 将种菇表面的泥土杂
物刷净 , 再用75 %的酒精棉球擦洗种菇表面
两次即可 。
2
. 菌根的消毒处理 : 将带松 口蘑菌根的
树根洗净 , 用漂 白晶片水浸泡 3 分钟 , 再用
无菌水冲洗后 , 剪成 0 . 5厘米长的小段备用。
3
. 分离 : 第一 , 用无菌摄子先将内菌幕
撕去 , 再用解剖刀切下黄豆大一块约 3 一 4
片菌褶 , 置于斜面培养基 中 , 再用接种铲移
植于斜面中央 , 紧贴培养基表面 。 第二 , 将
已灭菌的接种环插入菌褶间的缝隙中 , 用环
涂 .抹菌褶两侧 , 采集多个抱子 , 在斜面培养
基表面划线 。 第三 , 撕去菌柄表皮 , 切取菌
柄组织一小块 (约 1 粒米大 ) , 移植于斜面
培养基表面 、 贴紧。 第四 , 用手 从 菌 盖 边
缘 , 将子实体撕成两瓣 , 再用解剖刀切取菌
盖与菌柄交界处的菌肉一小块 , 移植于斜面
培养基中央 、 贴紧 。 第五 , 用无菌镊子将消
毒处理后的菌根移入斜面培养基试管中央 、
贴紧培养基表面 。
以上每种分离方法 , 至少要分离 20 支斜
面培养基试管 , 并要在酒精灯火 焰 上 方 进
行 。
4
. 培养 : 将分离的斜面试管置于 21 ℃下
恒温培养 , 从第四夫起 , 每隔两 天 检 查 一
中同食用菌 I E DBL F U E N G飞 O F C HI N A Vo l. 1 , , N o .
次 , 污染严重的除去 , 污染不严重的立即用
0
.
1%的升汞水浸泡过的滤纸块复盖污 染 处
或将接种块移到另一斜面培养基上 。 约 20 多
天开始长出白色浅绒毛状菌丝 , 50 一 60 天长
成直径约 2 厘米的菌落 , 具松茸香味 。
结果与讨论 : 上述结果表 明 , 分离松口
蘑菌种用抱子分离 、 菌盖和菌栖的组织分离
及菌根分离法均不易分离成功 , 只有用菌褶
分离法成功率较高 ; 作分离用的 培 ,养 基 以
1
、
3 号较好。 但 3 号培养基的配方复杂 ,
用药种类较多 , 而 1 号培养基需 药 品 种 不
多 , 制作简便 , 效果又好 , 所 以甘孜 、 凉山
松 口蘑菌种分离我们全采用 1 号培养基 , 并
用菌褶分离法 , 均分离获得了纯种 。
(二 ) 松 口 蘑 菌丝 的扩大培养
分离获得的松 口蘑原母种 , ’ 菌丝数量太
少 , 不能满足试验和生产的需要 , 为了获得
大量的菌丝体 , 我们研究了松 口蘑菌丝体扩
大培养的方法及适合的培养基 。
1
. 原母种转接扩展为再 生 母 种 培养
基 : ( 1 ) 1 号培养基 , ( 2 ) R培养基 :
马铃薯汁 5 0 毫升 (马铃薯 2 0 克 , 水 1 0 0 0毫
升 , 煮 20 分钟 , 过滤 , 取汁 ) , 苹 果 煮 汁
1 0 0毫升 (苹果 2 0克 , 水 10 0 毫 升 , 煮 1 0分
钟 , 过滤 , 取汁 ) , 梨子煮矛沁 0 0毫升 ( 梨
2 0克 , 水 1 0Q毫升 , 煮 1 0分钟 , 过滤 , 取汁 ) ,
松茸山土浸液 1 0 毫升 (松茸山土 50 克 , 水
2 0 0毫升 , 煮沸 20 分钟 ) , 栋树根 浸 液 5 。毫
升 (栋树根 20 克 , 水 1 0 毫 升 , 煮 2 0分钟 、
过滤 ) , 牛皮胶水 10 毫升 (生牛皮煮水 ) ,
多维葡萄糖 10 克 , 酵母粉 1克 , 自来水 5。毫
升 , p H 6 , 琼脂 20 克 。 上述两种培养基配方 ,
分别按常规希暗 、 灭菌后倾成斜面 。作法 : 采用无菌操作法 , 取分离获得的
松 口蘑纯菌丝块米粒大一块 , 分别接种在上
述两种培养基斜面上 , 各接 30 支 , 置于 21 ℃
温箱中避光培养。 从第四天起 , 每隔 2天观
察一次 , 约 56 一 58 天菌落直径长至 2厘米 。
, 结果 : 在上述两种培养基上 , 松 口蘑都
生长 , 且生长速度相差无几 。 菌落形态都为
高突起 , 成草帽形 , 菌落表面的菌丝粗短 、
刚直 , 长 3 一 4 毫米 , 有松茸香味。 但在 1
号培养基上的菌落为纯白色 , 而在 R 培养基
上的菌落为污白色 。
2
. 原种培养 再生母种扩大 培 养 成 原
种 。 原种培养基采用了两种 : A . 松口蘑山土
壤 10 0% (土壤去石和杂物 、 捣碎 、 风干 ) +
1 号培养液 (即 1号培养基不加琼脂 ) 至湿度
达到 5 一 60 % p H 6 ; B . 松口蘑山土 7 % 十栋
树木屑 1 5 . 3% + 麦鼓 7 。 7% 十 1 号培养液 (与
A 用量相同 ) + 水至湿 度 达 到 5 一 6 0 % ,
P H 6
。
作法 : 分别将上述两种培养基混匀后 ,
分别装入蘑菇瓶或三角瓶的 1 / 2处 , 加棉塞 ,
高压蒸汽灭菌 , 1 . 1公斤 /厘米 “压力下 灭 菌
1
.
5小时 , 冷却后接种 。 每一支母种接 一 瓶
原种 , 采用五点接种方式即瓶 四 壁 各 接一
点 , 中央一点 。 在 21 ℃一 24 ℃避 光 恒 温 培
养 。 每周观察一次 , 两个月时小结 。
结果与讨论 : 培养两个月时 , 在 A 种培
养基上菌丝生长扩大的范围直径只 1 . 5厘米 ,
以后不再扩展 ; 而在 B 种培养基上 , 奋丝扩
大的范 围直径达 3一 4 厘米 , 约半年长满全
瓶 。 菌丝体白色 , 分散均匀 , 粗 壮 , 有 香
味 。 说 明 B 种培养基较好 。 尽管木屑的纤维
素松 口蘑不能利用 , 但木 屑使培养基疏松 、
透气 , 有利于好气性的松 口蘑菌丝生长 。 共
生性的松口蘑对维生素也极敏感 , 富含丰富
维生素的麦鼓 , 无疑对松 口蘑菌丝的生 一长是
有益的 。 松口蘑菌丝生长很慢 , 制 种 特 别
难 , 易污染 , 所 以要严格无菌操作 。
澳大利亚 发现食蚊蘑菇 巨野县发现特大野生蘑菇
澳大利亚生物学家在该 国米耳德地 区发现一种
野生的食蚊蘑菇 。 它分泌的粘液有一种特殊气味 ,
能吸引其周围三十米左右范围内的炊子朝它 飞来 。
停落在叶面上的蚊子一旦被粘液粘住 , 就 ,别` 想 生
还 。 它们很快就技分解成立浆 , 被蘑菇吸收 。
札认寸2 扇言
1 5 9 2年 , 金秋 10 月 , 在山东省巨野县丁官 屯乡
南于村南李氏老林一座坟墓前面发现一棵型似花 糕
的野生蘑菇 。经过一个多月生长 , 村民李映房采摘下
来时这颗鲜菇重量已达到19 公斤 。 到 12 月下旬在这
座坟墓后面又再次发现一颗型似相同的野生蘑菇 。
戈 态