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紫外分光光度法测定西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉莉中总黄酮含量



全 文 :△课题来源:国家科技部农业科技成果转化资金项目(受理编号:
10F40010412)
作者简介:索朗其美(1962 -)男,教授,从事藏医药教学与研究。
* 通讯作者:达瓦潘多,Tel:13989993167;E - mail:38845247@ qq.
com。
药物定性定量研究
紫外分光光度法测定西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉莉中总黄酮含量△
索朗其美 达瓦潘多* 刘 青 央 美 顿珠次仁 仁 增
(西藏藏医学院,西藏 拉萨 850000)
摘 要:目的:探讨西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉莉中总黄酮含量的测定方法。方法:以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠
为显色剂,利用紫外分光光度计测定西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉莉中总黄酮的含量。结果:最佳检测波长为
352urn,芦丁浓度在 16 ~ 80μg·mL -1范围内时,吸收度与浓度呈良好的线性关系,回归方程为 Y = 21. 262952 x + 0. 006124
(r = 0. 9991) ,平均回收率为 100. 92%,RSD为 2. 10%。结论:采用紫外分光光度法测定西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉
莉中总黄酮的含量简便易行,结果稳定可靠。
关键词:总黄酮;分光光度法;西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉莉
中图分类号:R291. 4 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2012)04 - 0060 - 03
喜马拉雅紫茉莉(巴朱)为紫茉莉科植物喜马拉雅紫
茉莉 Mirabilishimalaica(Edegw.)Heim.的干燥根[1],该藏药
具有温肾、益肾滋补、生肌、利尿、排石等功效,用于胃寒、肾
寒、下身寒、阳萎浮肿等[1 - 3]。喜马拉雅紫茉莉作为藏药使
用历史悠久,在藏医药名著《四部医典》和《晶珠本草》均有
记载[2,4]。目前国内外对紫茉莉根的研究主要集中在紫茉
莉蛋白(MAP)上,对其它化学成分研究较少。除报道紫茉
莉根含有多种甜菜素、氨基酸、有机酸、三萜、甾体、脂肪酸、
葫芦巴碱(Trigonelline)和半乳糖等之外,Yang,Shu - Wei
等从其植物细胞培养中分离得到多个黄酮和鱼藤酮类成
分,并发现它们对真菌有一定的抑制作用[5、6],目前已发现
的紫茉莉化学成分中以黄酮类为主,还有一些其他成
分[7]。本研究采用紫外分光光度法对西藏野生和人工种
植喜马拉雅紫茉莉中总黄酮的含量中总黄酮含量进行了测
定,旨在为西藏人工种植喜马拉雅紫茉莉的质量控制提供
科学依据。
1 材料
梅特勒 AE20O 电子天平;ASI0200BDT 超声波清洗器
(250w,天津奥特赛恩斯仪器有限公司) ;UV - 2100 紫外可
见分光光度计(北京莱伯泰科技仪器有限公司)。甲醇(色
谱纯)、亚硝酸钠(分析纯)、硝酸铝(分析纯)、氢氧化钠
(分析纯) ;优普超纯水机(蒸馏水自制)。芦丁(中国药品
生物制品检定所,批号:110811 - 200502)。喜马拉雅紫茉
莉野生和人工种植品由西藏藏医学院研究所提供。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备:精确称取在 105℃条件下干燥至
恒定质量的芦丁标准品 14. 48mg,置于 50mL 容量瓶中,加
甲醇摇匀,稀释至刻度,得浓度为 0. 2896mg /ml 的芦丁对
照品溶液,低温保存,备用。
2. 2 供试品溶液的制备精确称取喜马拉雅紫茉莉粉末约
1. 0000g,置于 250mL 容量瓶中,加入 200mL 甲醇,20℃超
声处理(功率 250W,频率 55kHz)超声提取 30min 共 3 次。
静置后定容。吸上清液 2mL,用甲醇定容到 10mL 容量瓶
中,即得样品溶液。
2. 3 测定波长的选择:精确量取对照品溶液和供试品溶液
各 0. 5mL,分别置于 10mL 容量瓶中,加入 5%亚硝酸钠溶
液 0. 5mL,摇匀,放置 6min,加入 10%硝酸铝溶液 0. 5mL,
摇匀,放置 6min,加入 10%氢氧化钠溶液 3. 0mL,再加入水
至刻度,摇匀,放置 15min,在波长为 200 ~ 600nm范围内扫
描,结果 2 种溶液均在 328nm、352nm 处有最大吸收,其他
成分对测定无干扰。
2. 4 标准曲线的绘制[8]:分别精确吸取芦丁对照品溶液
0、0. 25、0. 5、1. 0、2. 0、3. 0(mL)置于 10mL 容量瓶中,向容
量瓶中依次加入 3. 0mL 蒸馏水,依次加入 5%亚硝酸钠溶
液 0. 5mL,摇匀,放置 6min,加入 10%硝酸铝溶液 0. 5mL,
摇匀,放置 6min,加入 10%氢氧化钠溶液 3. 0mL,加入蒸馏
水至刻度,摇匀,放置 15min,进样,于波长为 352nm处测定
吸收值(用不含芦丁的空白管对照调零)。得回归方程:Y
=21. 262952x + 0. 006124(r = 0. 9991) ,结果表明,测定芦
了浓度在 16 ~ 80 范围内呈良好的线性关系。
0.000 0.020 0.040 0.060 0.000 0.100
0.000
0.400
0.800
1.200
1.600
2.000
Conc.[mg/ml]
[Abs]
06 中国民族医药杂志 2012 年 4 月第 4 期
[Abs]= KO + KI* [C]+ K2* [C]^2
K0 = 0. 006124 K1 = 21. 262952 K2 = 0. 000000 R = 0.
999132
Y = 21. 262952x + 0. 006124(r = 0. 9991)
2. 5 精确度实验:取对照品溶液于 352nm 波长处测定吸
收值 5 次.结果示平均吸收值为 0. 3658,RSD 为 0. 91%(n
= 5)。
2. 6 稳定性试验:取供试品溶液,于 0、1、2、4、8、24(h)时
测定吸收值。结果表明,总黄酮与铝离子形成的红色络合
物在 24h内稳定,RSD为 2. 056%(n = 6)。
2. 7 重现性试验:精密吸取 5 份样品溶液 1mL于 10mL容
量瓶内,按以上方法制备并进行含量测定,重复 3 次,考察
其重现性,测定结果表明 RSD为 1. 35%。
2. 8 加样回收率实验:分别精密吸取已知浓度的样品溶液
各 3 组(2mL /组) ,各组分别精密加入已知含量芦丁标准品
溶液 0. 5mL(组 1)、1. 0mL(组 2)、2. 0mL(组 3) ,按照“芦
丁标准曲线的制备”方法显色后,以不含样品的溶液作为
空白对照,进行含量测定,重复 3 次,并计算回收率,结果:
加样回收率为 100. 92%,RSD为 2. 10%
2. 9 样品的测定:精确称取研碎的样品野生原药材(1.
0092g)、人工种植原药材(1. 0072g) ,各置于 250mL 容量瓶
中,按照 2. 2 项下方法制备样品供试液,同法平行制备 3
份。精确吸取供试品溶液 2mL,按照 2. 4 项下方法进行操
作,在波长为 352nm 处测定供试液的吸收值,按回归方程
进行计算处理,总黄酮占生药百分比野生 7. 53%、人工种
植 9. 53%。
表 4 样品测定结果(n = 6)
药材浓度 吸光度 总黄酮含量 总黄酮占生药
批号 重量(g)(mg·mL -1) (mg·mL -1)百分比(%)
1. 0092 0. 2523 0. 4165 0. 0753
2011092301 1. 0092g 0. 2523 0. 4165 0. 0753
(野生) 1. 0092g 0. 2523 0. 4164 0. 0753 7. 53
1. 0072 0. 2518 0. 5164 0. 0953
2011092302 1. 0072 0. 2518 0. 5165 0,0953
(人工种植) 1. 0072 0. 2518 0. 5163 0. 0953 9. 53
3 讨论
黄酮类化合物广泛分布于植物界,而且生理活性多种
多样,目前研究主要生理活性表现在:(1)对心血管系统的
作用;(2)抗肝脏毒作用;(3)抗炎作用; (4)雌性激素样作
用;(5)抗菌及抗病毒作用; (6)泻下作用; (7)解痉作用。
对于西藏喜马拉雅紫苿莉野生和人工种植药材的研究中,
对其所含黄酮类成分的药理作用目前研究甚少,以芦丁为
对照品,以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂,利用紫
外分光光度计对西藏喜马拉雅紫茉莉野生和人工种植药材
中总黄酮的含量进行测定的方法具有简便易行及结果稳定
可靠,为下一步野生品和人工种植药材的研究,提供基础理
论。本实验方法线性关系良好,相关系数 R = 0. 9991,精密
度,重现性、回收率均符合要求,稳定性好,以此法拟制订的
质量标准能有效的控制其质量。
参考文献
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2011 年 5 月 12 日收稿
UVspectrophotometric determination ofTibet wild and artificial cultivation of
total flavonoids content in Himalaya purplc jasmlne
Suolang Qimei,Dawa Panduo,LIU Qing,Yng mei,Dunzhu Ciren,Ren zeng
(Tibetan Traditional Medical College,Tibetan Lhasa,850000)
162012 年 4 月第 4 期 中国民族医药杂志
[Abstract]Objective:To investigate the Tbet wild and artificial cuktivation Himalaya purpleJasmine content determination of total
fiavone In.Methods:By aluminum nitrate,sodium nitrite and sodium hydroxide as chromogenic agent,using ultraviolet spectropho-
tometer to determine the Tibet wild and artifcial cultvatiom of Himalaya purple Jasmine total flavone conten in. Results:The optimal
detection wavelength 352nm,rutin concentration at 16 ~ 80mg·mL -1 range,the absorbance and the concentration was a good linear
relationship,the regression equation was Y = 21. 262952x + 0. 006124(r = 0. 9991) ,the average recovery was 100. 92%,RSD was
2. 10% . Conclusion:Adopt UV spectrophotometric method for the determination of Tibet wild and artificial cultivation of Himalaya
purple Jasmine total flavone content in the simple,stable and reliable results.
[Key words]total flavone;spectrophotometer;wild and artificial cultivation Himalaya purple jasmine
脑梗塞后遗症蒙医分型论治的临床观察
邢志阳
(辽宁省阜新蒙医药研究所,辽宁 阜新 123100)
关键词:脑梗塞后遗症;蒙医分型论治
中图分类号:R291. 2 文献标识码:B 文章编号:1006 - 6810(2012)04 - 0062 - 01
脑梗塞病经抢救治疗后,往往留有轻重不等的肢体障
碍,言语不利,口眼歪斜,脑功能减退的症状。进入恢复期,
西医认为本病病因主要是脑血管事件之后,导致血管的管
腔狭窄或闭塞,发生梗阻,造成局部供血中断,使脑组织发
生不可逆的损害,最终脑组织缺血、缺氧性坏死。[1]蒙医认
为长期饮食失调,恶血增盛,气虚血滞,上扰脑髓,损伤白
脉,而发生此病。[2]由于发病的性质和症候的不同,临床上
分型论治,是脑梗塞后遗症恢复治疗的关键。
1 临床资料
参照《神经内科疾病诊疗手册》中脑梗塞诊疗标准[1],
纳入观察:发病年龄 40 ~ 73 岁;其中男性 25 例,女性 11
例。发病诱因:气虚血瘀,久病体弱,巴达干偏盛,或饮食肥
甘,情绪激动,过度兴奋,恶血偏盛,梗塞脉窍,均为本病的
病因
2 辨证论治
2. 1 巴达干赫依型:半身不遂,口眼喎斜,言语謇涩,神疲
乏力,面白少华,伴头晕心悸,血压偏高或不高,舌质淡和瘀
斑,苔薄白,脉象沉细或弦细。[2]药用如意至宝丸 3g,2 /日
口服,升阳十一味丸 3g,1 /日口服。
2. 2 恶血黄水型;头痛头晕,心烦易怒,口眼喎斜,言语謇
涩,伴口苦咽干,失眠多梦,舌薄苔或黄腻,脉象弦滑或弦
数。[2]药用如意至宝丸 3g,2 /日口服;白云香十五味丸 3g,
1 /日口服。
3 疗效标准
参照《脑血管病中西医诊疗与康复》中治疗脑梗塞后
遗症疗效标准[3]。
基本治愈:临床症状体征消失或基本消失,专科检查正
常和基本正常,生活自理。缓解:临床症状体征明显改善,
生活基本自理。明显进步:临床症状及体征均有好转。无
效:临床症状及体征无明显好转或进行性加重。
4 治疗结果
以 3 个月为 1 疗程。基本治愈 15 例;缓解 10 例;明显
进步 10 例;无效 1 例;有效率为 97%。
5 体会
脑梗塞病的病机复杂,常涉及五脏及六腑、经络、血脉。
以内伤积损为主,即脏腑失调,偏虚偏盛有关。临床上恢复
程度与梗塞面积、大小、位置、个人体质、患病时间息息相
关。[4]但临床上分型论治,虚实兼顾,疗效明显。笔者将年
迈体弱、气血亏虚,气血运行无力,血行瘀滞者用蒙医辨证
为巴达干赫依型;将恣食纵欲,阴液亏损,恶血偏盛,黄水助
邪,损伤脉道者为恶血黄水型;分型而治,分清泌浊,补气养
血,育阴潜阳,抑制赫依,清除巴达干、恶血,燥黄水取得了
很好的疗效。
参考文献
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2011 年 3 月 29 日收稿
26 中国民族医药杂志 2012 年 4 月第 4 期