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第 1 4卷 第 5 期
2012 年 5 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 14 No. 5
May，2012
濡养而发为此病[11]。我院根据既往多年治疗多发
性骨髓瘤的经验，以补脾肾、化瘀毒、散癌结立法，组
方制成毒结清口服液（桂药制字Z01060068）。毒结
清口服液中由人参、黄芪、白术、薏苡仁、八月扎健脾
益气、行气化痰 ；补骨脂、菟丝子、当归、川芎补肾坚
骨 ；解毒草、猫抓草、白花蛇舌草清热解毒 ；蜈蚣、土
鳖虫、八角莲、全蝎活血化瘀组方而成。现代药理研
究表明 ：化痰通络、活血化瘀药多具有抗凝、抑制血
小板黏附、聚集，改善血液黏滞度、防止血栓形成的
作用，人参、黄芪、白术、薏苡仁则能增强免疫功能，
又具有显著的抗癌、抑癌作用。我们在前期的临床
研究中发现毒结清口服液联合化疗有效好的协同增
效作用，较单纯化疗组疗效好，且能有效减轻MM患
者的骨痛症状，改善生活质量，降低血钙和CRP水
平[12-13]。本研究结果表明 ：中药毒结清口服液联合
化疗能有效减轻MM患者的骨痛症状，改善生活质
量，降低血钙和IL-6水平。其机制可能与抑制破骨
细胞分泌IL-6，改变MM瘤细胞的微环境，抑制骨髓
瘤细胞的增殖有关，从而减轻了MM的骨损害，延缓
MM进展。但毒结清口服液对MM骨损害的微环境
的影响机制尚需要更进一步的研究证实。◆
参考文献
[ 1 ] 邓家栋，杨崇礼，杨人楹，等.临床血液病学[ M ] .上海 ：上海
科学技术出版社，2001 ：1085-1090.
[ 2 ] 武永吉.治疗多发性骨髓瘤的新药[ J ] .继续医学教育，2006，
20 ( 4 ) ：22-26.
[ 3 ] 张之南.血液病诊断和疗效标准[ M ] .2版.北京 ：科学出版
社，1998 ：373- 376.
[ 4 ] 张天泽，徐光炜. 肿瘤学[ M ] . 天津 ：天津科学技术出版社，
1996 ：2725-2730.
[ 5 ] 傅卫军.多发性骨髓瘤的溶骨机制及及双膦酸盐的应用[ J ] .
癌症进展杂志，2006，4 ( 3 ) ：272-275.
[ 6 ] Abe M，Hiura K，Wilde J，et al. Role for macrophage inflanmatory
protein（MIP）-1alpha and MIP-1beta in the development of
osteolytic lesions in multiple myeloma[ J ] .Blood，2002，100 ( 6 ) ：
2195-202.
[ 7 ] Uneda S，Hata H，Matsuno F. Macrophage inflammatory protein-1
alpha is produced by human multiple myeloma（MM）cells and
its expression correlates with bone lesions in patients with MM[ J ] .
Br J Haematol，2003，120 ( 1 ) ：53-55.
[ 8 ] Shangqin Liu，Zi Ma，Huili Cai，et al. Inhibitory effect of baicalein
on IL-6-mediated signaling cascades in human myeloma cells[ J ] .
European Journal of Haematology，2009，10 ( 23 ) ：137-144.
[ 9 ] 孔宪涛，侯健，张玲珍，等.76例多发性骨髓瘤患者血清白细胞
介素-6活性分析[ J ] . 中华血液学杂志，1993，14 ：451-453.
[ 10 ] Adachi Y，Yeshio-Hoshino N，Nishimoto N. The blockade of
IL-6 signaling in rational drug design[ J ] .Curt Pharm Des，
2008，14 ( 12 ) ：1217-1224．
[ 11 ] 叶丽红，周红光，吴勉华.多发性骨髓瘤骨损的中医证治探
讨[ J ] . 中国中医药信息杂志，2003，10 ( 8 ) ：73.
[ 12 ] 李春珊，窦锡彬，程纬明.毒结清口服液结合化疗治疗多发
性骨髓瘤32例疗效观察[ J ] . 广西中医药，2006，29 ( 1 ) ：
18-19.
[ 13 ] 程纬民，曾清.补脾肾化瘀毒法联合化疗治疗多发性骨髓瘤
溶骨病变20例临床观察[ J ] . 辽宁中医杂志，2009，36 ( 12 ) ：
2093-2095.
黑升麻提取物抗抑郁效应研究
胡光民1，张祖志1，彭清和2，秦勇2，申国明1，许浩2
（1.安徽中医学院解剖教研室，安徽 合肥 230038 ；2.安徽中医学院中西医结合研究所，安徽 合肥 230038）
摘 要：目的：观察黑升麻提取物对去势雌性大鼠强迫游泳行为学的影响，探讨黑升麻提取物的抗抑郁效应及
安全性。方法：30只雌性SD大鼠去势后随即分成去势（OVX）对照组、黑升麻（CR）提取物组和美雌醇（E）组，以
雌激素药物美雌醇作对照，观察去势雌性大鼠强迫游泳的不动时间及子宫内膜的变化，放射免疫法测定血浆雌二醇
含量，采用免疫组织化学的方法，检测下丘脑室旁核c-fos蛋白的表达。结果：与对照组相比，CR、E均可明显缩短
强迫游泳大鼠的不动时间（P<0.01），降低下丘脑室旁核神经元中c-fos的表达（P<0.01）；但是E组大鼠血浆雌二醇
水平明显升高（P<0.01），子宫内膜显著增生；而CR对去势大鼠血浆雌二醇水平无显著影响（P>0.05），子宫内膜无
明显改变。结论：CR可以减少强迫游泳大鼠的不动时间，抑制大鼠的抑郁绝望行为，其抗抑郁效应安全有效。
关键词：黑升麻；强迫游泳；去势雌性大鼠；c-fos ；安全性
中图分类号：R285 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2012) 05- 0035- 04
收稿日期：2011-10-22
基金项目：安徽省高校优秀青年基金项目（2009SQRZ116ZD）；安徽省人才开发资金项目（2007Z051）；安徽中医学院人才引进资金项目
（2006rc002）；安徽省自然基金资助项目（1208085MC49）
作者简介：胡光民（1979-），男，安徽萧县人，讲师，硕士，研究方向 ：人体解剖学教学和科研研究。
通讯作者：许浩（1966-），男，安徽绩溪人，教授，博士，研究方向 ：神经生物学。E-mail ：xhao@ustc.edu。
Study on the Antidepressant-like Effect of Cimicifuga racemosa
HU Guang-min1，ZHANG Zu-zhi1，PENG Qing-he2，QIN Yong2，SHEN Guo-ming2，XU Hao2
（1 Department of Human Anatomy，Anhui University of Traditional Chinese Medicine，Hefei
230038，Anhui，China ；2 Clinical College of Integrated Chinese and Western Medicine，
Anhui College of Traditional Chinese Medicine，Hefei 230038，Anhui，China）
Abstract ：Objective ：To study the effect of Cimicifuga racemosa（CR）on the behavior and the
expression of c-fos in paraventricular nucleus（PVN）of ovariectomized rats by forced swimming tests
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 4 卷
雌激素具有快速改善妇女围绝经期抑郁情
的作用，但临床资料显示使用雌激素可能增加乳
腺癌和子宫癌的发病率，而现有的抗抑郁药物仅
能对大约70%的患者有效并且副作用较大，因此
当务之急是寻找和研发替代雌激素的抗抑郁药
物。
黑升麻（又称总状升麻C. racemosa，CR）提取
物主要用于治疗女性围绝经期症状，可有效地缓
解围绝经期潮热、烦躁等症状[1]，而CR缓解围绝
经期症状的机制目前尚不清楚。即时反应基因中
c-fos蛋白作为神经元活动的定位和功能指标，近
年来在抗抑郁药的药理学机制中的作用越来越
受到重视[2]。c-fos蛋白是一种原癌基因，当机体
受损害性刺激时即表达c-fos蛋白，因此，c-fos常
作为神经元对外界刺激发生反应时的一种标志
物，可用免疫组织化学的方法检测其表达产物以
判断神经元活性。强迫游泳作为一种经典的抑
郁应激模型，在筛选抗抑郁药物的应激研究中得
到广泛应用。强迫游泳作为一种应激源可以引
起大鼠发生绝望行为，并诱导下丘脑某些核团区
域c-fos蛋白的表达水平增高，而抗抑郁药可以选
择性抑制强迫游泳大鼠不动时间，提高大鼠对应
激的耐受性[3]。
本实验研究以雌激素药物美雌醇作对照，观
察CR对去卵巢大鼠子宫内膜及血浆雌激素水平
和强迫游泳行为学的影响，并以c-fos蛋白为特异
性抗体，观察CR对去势雌大鼠强迫游泳运动后下
丘脑室旁核（PVN）内c-fos蛋白免疫阳性神经元
表达的影响，探讨CR的抗抑郁效应及其用药安全
性。
1 材 料
1.1 动物
SD成年雌性未孕大鼠30只，体重250~300g，
安徽医科大学实验动物中心提供，许可证号 ：SCXK
（皖）2005-001。
1.2 主要药品和试剂
黑升麻提取物（商品名 ：希明婷片，主要成分升
麻总皂苷）：山东绿叶制药有限公司提供，国药准字
Z20050748，批号20071143 ；美雌醇 ：Sigma-Aldrich
货号 855871-500mg ；Sesame oil Sigma-Aldrich 货号
S3547-1L ；雌激素放射免疫分析试剂盒 ：北京北方
生物研究所提供，批号20080220 ；兔抗大鼠c-fos多
克隆抗体和即用型SABC免疫组化试剂盒 ：武汉博
士德生物工程有限公司提供。
1.3 主要仪器
T3-200型分析天平，成都科学仪器厂 ；101-A
恒温干燥箱，宁波自动化仪表厂 ；石蜡包埋机，英国
HIS2TOCENTRE公司 ；石蜡切片机，英国FINESSE
公 司 ；冰 冻 切 片 机CM1900，德 国Leica ；显 微 镜
OLYMPUS VANOX。
2 方 法
2.1 分组与给药
30只SD成 年 雌 性 大 鼠，10%的 水 合 氯 醛
（0.35mL/100g）麻醉，切除双侧卵巢，术后缝合清创，
随机分为去势对照（OVX）组、黑升麻提取物（CR）
组、美雌醇（E）组，每各10只，去势后饲养2周予药
物处理。CR组 ：希明婷片研成粉末用蒸馏水配制成
20mg/mL悬混溶液[4] ；E组 ：美雌醇用Sesame oil配
制成0.1mg/mL的溶液。各组使用相应的药物5mL/
（kg·d）灌胃，OVX组灌服等量的蒸馏水和Sesame
oil混合物，连续2周。
2.2 强迫游泳方案
大鼠置于高60cm、直径20cm的铁皮圆桶中，
水温（25±1）℃、水深30cm。强迫游泳15min，观
察大鼠挣扎、不动、游泳的状态，并用秒表测定其
前、中、后各5min内所呈现不动状态的时间总和。
测试完成后，将大鼠用干毛巾擦干，放回笼中自
由饮食。24h后，在同样条件下重复游泳5min，测
定在此期间内的挣扎、不动、游泳状态各时间总
和。
2.3　灌注固定及取材
各组大鼠分别在第2次强迫游泳2h后，10%
水合氯醛（0.35mL/100g）腹腔注射麻醉开胸，腹
主 动 脉 取 血2mL，离 心 机3000r/min，20min取 上
清，-20℃贮存，送安徽医科大学第一附属医院核
医学实验室检测血浆雌二醇含量，严格按放免试剂
盒说明书操作。灌注针头经左心室插至升主动脉，
剪开右心耳，先以100mL生理盐水冲洗血液，再用
4℃的4%多聚甲醛的0.1mol/L磷酸缓冲液（PBS，
pH=7.4）500mL灌注，先快后慢。灌注完毕后立即
断头取脑，并置于上述新鲜固定液中后固定24h，
再分别移入含15%和30%梯度的蔗糖溶液（4℃）
中直至脑组织沉底。将大鼠脑组织用恒温切片机
作连续冠状切片，切片厚度20μm，收集切片-20℃
保存。摘取大鼠完整子宫中性甲醛固定5天后，截
取Y型子宫交叉处上方段约1cm的子宫组织，常规
脱水、浸蜡、包埋，切片厚度5μm，组织脱蜡，常规
HE染色，脱水，透明，封片。
（FST）. Method ：Sprague Dawley female rats were ovariectomized. After two weeks recovery all rats were
administered daily dose of CR and Mestranol for two weeks. The antidepressant effects were evaluated by
FST in mice. The levels of E2 in blood plasma were measured by radioimmunoassay. The expression of
c-fos was mapped by the immunohistochemcal method. Results ：Both CR and Mestranol could significantly
suppress the accumulated immobility time of forced swimming（P<0.01）. The distribution of c-fos in the
PVN decreased significantly（P<0.01）. There is no difference in the levels of E2 in blood plasma between
CR group and the OVX group（P>0.05）. Conclusion ：The present study indicates that CR has remarkable
antidepressant function.
Key words ：Cimicifuga racemosa ；forced swimming test ；ovariectomized rat ；c-fos ；security
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1 4 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
2.4 c-fos免疫组化法（SABC法）
脑 组 织 切 片 经 室 温 复 温20min，60 ℃ 烤 箱
30min，0.2% Triton-100水浴锅37℃ 30min，3%过氧
化氢溶液封闭10min ；正常山羊血清封闭30min ；滴
加兔抗c-fos多克隆抗体（1 ：200）水浴锅37℃孵育
60min，4℃过夜 ；滴加生物素标记的山羊抗兔IgG，
水浴锅37℃孵育30min ；滴加链霉亲和素-过氧化
物复合物（SABC即用型），水浴锅37℃孵育30min ；
DAB显色5~7min，蒸馏水冲洗终止显色反应 ；最后
常规脱水、透明和封片。上述各步骤之间均用0.01M
PBS冲洗5min×3次。
2.5 图像分析及数据统计学处理
c-fos阳性细胞计数和定量分析，无论染色深
浅，只要所示细胞核的呈色为DAB 特征染色（阳
性神经元胞核呈棕黄色，核仁不着色，低倍镜下
为棕色小圆点），在低倍和高倍镜下与背景区分
明确，即可认定为c-fos蛋白免疫反应阳性细胞
核。低倍光镜下计数每张切片双侧下丘脑室旁
核c-fos阳性神经元的数量。实验结果均采用均
值±标准差（x—±s）表示，各组间比较采用方差
分析，统计结果用SPSS for windows 11.0软件分
析。
3 结 果
3.1 CR对强迫游泳去势雌性大鼠不动时间的影响
挣扎
0
50
100
150
200
250
300
前5
分钟
中5
分钟
后5
分钟
时
间
(s
)
CR
E
OVX

不动
0
50
100
150
200
250
300
前5
分钟
中5
分钟
后5
分钟
时
间
(s
)
CR
E
OVX
游泳
0
50
100
150
200
250
300
前5
分钟
中5
分钟
后5
分钟
时
间
(s
)
CR
E
OVX
图1 3组大鼠第1天强迫游泳每5min
内各种状态的时间总和
在两次强迫游泳过程中，OVX组大鼠的挣扎时
间和不动时间均较长，CR和美雌醇均可以明显缩短
大鼠的不动时间，同时延长大鼠的挣扎时间和游泳
时间（P<0.01）。E组大鼠的挣扎和游泳时间较CR
组明显增加，不动时间减少（P<0.05）。结果见图1、
图2。
注 ：*CR组与OVX组相比挣扎时间、不动时间和游泳时
间P<0.01 ；#E组与OVX组相比挣扎时间、不动时间和游泳时
间P<0.01 ；**E组与CR组相比挣扎时间、不动时间和游泳时
间P<0.05。
图2 3组大鼠第1天强迫游泳5min
内各种状态的时间总和
3.2 CR对强迫游泳去势雌性大鼠子宫内膜的影响
子宫切片HE染色显示 ：OVX组管壁明显变
薄，管腔狭窄，内膜变薄，黏膜层腺体减少，固有
层细胞密集 ；CR组内径扩大不明显，内膜萎缩伴
有不明显的单层柱状上皮增生 ；E组内径扩大，内
膜增厚、腺体增多、单层柱状上皮排列不规则。见
图3。

OVX组 E组
CR组
图3 3组大鼠子宫内膜的比较（HE染色，×200）
3.3 CR对强迫游泳去势雌性大鼠血浆雌二醇含量及
下丘脑 PVN c-fos 蛋白表达的影响
c-fos蛋白在各组大鼠下丘脑内均有表达，其免
疫阳性物质位于细胞核内，核深染，呈圆形或椭圆
形，核仁透亮不着色，胞浆染色为阴性。OVX组c-fos
阳性神经元大量散在分布于PVN等部位，CR组和E
组c-fos阳性神经元数目在脑内的分布较少。结果
见表1、图4。
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 4 卷
表1 3组大鼠血浆雌二醇含量及下丘
脑PVNc-fos蛋白表达（x—±s）
组别 雌二醇含量（pg/mL） 下丘脑PVN内c-fos蛋白表达（个/视野）
CR组 68.506±3.849 31.9±9.9*
E组 127.205±13.522## 26.6±8.3#
OVX组 63.670±10.174 127.7±23.4
注 ：c-fos表达中，*CR组与OVX组相比P<0.01 ；# E组
与OVX组相比 P<0.01。雌二醇含量中，## E组与OVX组相
比 P<0.01 ；CR组与OVX组相比 P>0.05。

OVX组 E组
CR组
图4 3组大鼠强迫游泳后c-fos蛋白在
PVN的表达（DAB染色，×400）
4 讨 论
即时反应基因c-fos蛋白作为一种非特异的转
录调控因子，近年来被应用到研究精神药物调节靶
基因的作用机理之中。由于c-fos和c-jun蛋白可以
形成同源或异源二聚体，参与信号传递系统各效应
酶的转录过程，调控其它多种基因的表达的靶蛋白
合成，因而可以通过c-fos的示踪作用，来探索精神
药物作用于哪些特定的脑区。神经元c-fos的表达
一般认为具有普通性，即几乎任何形式的刺激只要
达到一定的强度和持续时间，都可以引起中枢c-fos
表达。下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴的激活是机
体对运动性应激最重要的适应性反应，下丘脑PVN
是HPA轴活动的直接控制部位，是整合运动应激反
应的中枢。机体处于抑郁或应激状态时，HPA轴功
能出现亢进，而抗抑郁药对功能亢进的HPA轴具
有调节作用[5]。因此，下丘脑可能是介导抗抑郁药
对抗大鼠绝望行为的中枢部位之一。另外，下丘脑
PVN是分泌促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）重
要中枢结构。已有研究证实[6-7]，下丘脑释放的CRH
可以刺激PVN神经元中c-fos的表达，而注射CRH
拮抗剂a-helicalCRH则能显著减少下丘脑PVN神经
元c-fos的表达，说明机体处于抑郁或应激时，可以
通过CRH的释放或HPA活性改变来诱导c-fos的表
达，而c-fos蛋白又可以反馈地调控CRH基因和其
它靶基因的活性，从而调节相关递质（或激素）的合
成，而发挥第三信使作用。
强迫游泳的基本原理是利用动物不能逃出恶
劣环境，以致行为绝望而设计的一种模型，动物经挣
扎后出现的绝望表现即不动状态，强迫游泳作为一
种研究抑郁症的负性心理应激动物模型，已被广泛
用于抗抑郁药物的筛选。
抑郁症是精神疾病中最主要的问题，而其病
因仍然不明，一般认为是遗传因素和环境因素共
同作用的结果。现有的抗抑郁药物副作用较大，
雌激素具有快速改善抑郁情绪及妇女围绝经期潮
热的作用，但长期使用雌激素增加乳腺癌和子宫
癌的发病风险[8]。CR被美洲印地安土著居民用
于治疗月经失调、绝经期综合征及其他妇科疾病。
CR根茎的主要活性成分是升麻总皂苷，而其根茎
中还含有其他生物活性成分，包括类生物碱、黄酮
和鞣酸[9-10]。最近许多研究发现，尽管一些生物成
分能与至少一种雌激素受体结合，但是仅产生极
微弱的雌激素效应，并且一些效应产生后会被选
择性抑制，故CR不属于雌激素，也不属于植物雌
激素[11]。实验结果表明黑CR对其血浆雌激素的
水平无影响，而且不会刺激子宫内膜的增生。在
治疗自主神经紊乱方面，CR与雌激素效果相当
[12]，而且CR对于雌激素受体阳性的乳腺癌细胞无
雌激素样刺激作用[3]。抗抑郁药可以选择性抑制
强迫游泳大鼠不动时间，降低c-fos的表达，提高大
鼠对应激的耐受性。CR可明显缩短强迫游泳大鼠
的不动时间，抑制大鼠绝望行为，降低下丘脑PVN
神经元中c-fos的表达，显示CR具有较好的抗抑郁
效应。而且CR对内源性雌激素的水平无影响，这
样在治疗女性围绝经期情绪抑郁方面有较好的优
势，解决了那些恐惧雌激素致癌以及雌激素慎用
或禁用的问题，为研发雌激素的替代药物提供了
广阔的开发和应用前景。◆
参考文献
[ 1 ] Borrelli F，Izzo AA，Ernst E. Pharmacological effects of
Cimicifuga racemosa[ J ] .Life Science，2003，73 ：1215-1229.
[ 2 ] Beck CH，Fibiger HC. Conditioned fear-induced changes in
behavior and in the expression of the immediate early gene c-fos ：
with and without diazepam pretreatment[ J ] .Neurosci，1995，15
( 4 ) ：709.
[ 3 ] Prsolt RD，A nton G，Blaver N，et al. Behavioral despair in rats ：
a new model sensitive to antidep ressants treatments[ J ] .Eur J
Pharmacol，1978，47 ：379.
[ 4 ] Johannes Freudenstein，Clemens Dasenbrock，Thomas Niblein.
Lack of Promotion of Estrogen-dependent Mammary Gland
Tumors in vivo by an Isopropanolic Cimicifuga racemosa Extract[ J ] .
Cancer Research，2002，6 ( 15 ) ：3448-3452.
[ 5 ] Barden N，Reul JM，Holsboer F. Do antidepressants stabilize
mood through actions on the HPA system? [ J ] .Trends Neurosci，
1995，18 ：6.
[ 6 ] Cullinan WE，Hepman TP，Battaglia DF，et al. c-fos expression
in rat brain following acute stress[ J ] . Neurosci，1995，64 ：477.
[ 7 ] 晓虹，李凌江，李昌琦，等.应激对中枢神经系统即刻早期基因
c-fos表达及HPA轴的调节作用研究[ J ] .中国心理卫生杂志，
2000，14 ( 1 ) ：10-13.
[ 8 ] Rodriguez C，Patel AV，Calle EE，et al. Estrogen replacement
therapy and ovarian cancer mortality in a large prospective study
of US women[ J ] .Am Med Assoc，2001，285 ：1460-1465.
[ 9 ] Mahady GB，Fong HHS，Farnsworth NR. Rhizoma Cimicifuga
racemosae. In：WHO Monographs on Selected Medicinal Plants[ M ] .
Volume II. Switzerland ：World Health Organization，2002.
[ 10 ] Kruse SO，Lohning A，Pauli GF，et al . Fukiic and piscidic acid
esters from the rhizome of Cimicifuga racemosa and the in vitro
estrogenic activity of fukinolic acid[ J ] .Planta Med，1999，65 ：
763-764.
[ 11 ] Burdette JE，Liu J，Chen SN，et al. Black cohosh acts as a mixed
competitive ligand and partial agonist of the serotonin receptor[ J ] .
Agric Food Chem，2003，51 ：5661-5670.
[ 12 ] 张焱，胡娅莉.植物雌激素与激素替代治疗的比较[ J ] .国外
医学妇幼保健分册，2005，16 ( 4 ) ：222-225.