全 文 ：·药物制剂与药品质量控制·
榅桲子总黄酮提取工艺研究*
哈及尼沙1，2，3，地力夏提·艾比布拉3，美丽万·阿不都热依木3，阿吉艾克拜尔·艾萨1
(1．中国科学院新疆理化技术研究所，乌鲁木齐 830011;2．中国科学院研究生院，北京 100049;3．新疆医科大
学药学院，乌鲁木齐 830054)
［摘 要］ 目的 优选榅桲子中总黄酮的最佳提取工艺条件。方法 以芦丁为对照品，用分光光度法在 506 nm波
长处测定榅桲子总黄酮含量，优选总黄酮的提取工艺。结果 测得样品中总黄酮含量为13． 60 mg·g-1，最佳提取工艺:
乙醇浓度为 75%，料液比 1∶ 10(倍)、回流时间 2． 5 h，回流温度 60 ℃，提取 3 次。结论 选用芦丁为对照品，用紫外分
光光度法测定榅桲子总黄酮含量准确度较高，方法简便，切实可行。
［关键词］ 榅桲子;总黄酮;提取工艺
［中图分类号］ R286;TQ460． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1004 － 0781(2011)07 － 0926 － 04
Study on Extraction Process of Total Flavones from Cydonia Oblonga Seeds
Hajinisa1，2，3，Dilxat HEBIBULLA3，Meriban ABDUREYIM3，Haji Akber AISA1(1． Xinjiang Technical Institute
of Physics and Chemistry，Chinese Academy of Sciences，Urumqi 830011，China;2． Graduate University of the
Chinese Academy of Sciences，Beijing，100049，China;3． School of Pharmacy，Xinjiang Medical University，
Urumqi 830011，China)
ABSTRACT Objective To extract and determine total flavonoids from Cydonia Oblonga Seeds and select the optimal
extraction technology． Methods With rutin being taken as the standard indicator，the total flavonoids were determined by
spectrophotometry at 506 nm to optimize the isolation technique． Results The total flavonoids in the samples were detected as
13． 60 mg·g-1，and the best extraction process included using 75% ethanol，at a solid liquid ratio of 1∶ 10，refluxing for 2． 5 h
at 60 ℃ and extracting for 3 times． Conclusion The content determination of total flavonoids from Cydonia Oblonga seeds by
ultraviolet spectrophotometry with rutin as control is an accuracy，practical and simple method．
KEY WORDS Cydonia Oblonga Seeds;Total flavonoids;Extraction process
榅桲(Cydonia Oblonga)是维吾尔医常用的具有浓
郁的地方民族色彩的传统维药。榅桲子有强化皮肤保
湿力，光滑皮肤，退烧，止咳，降低干躁等作用［1-4］，在维
吾尔医中常用主治干热性或胆液质性疾病，如:发热舌
燥、伤寒、肺结核、咳嗽、感冒、肠疡腹泻等［5］。据文献
报道［6-8］，榅桲子含有黄酮类及酚类成分，具有抗氧化、
抗菌、抗炎、抗溃疡和抗肿瘤等活性。目前笔者还未见
该药材总黄酮含量测定及提取工艺研究的报道。为了
该药材的进一步研究，在参考《中华人民共和国药典》
及文献中总黄酮测定方法的基础上［9］，采用乙醇提
取，紫外可见分光光度法首次测定维药榅桲子中总黄
［收稿日期］ 2010 －09 －16 ［修回日期］ 2010 －10 －22
［基金项目］ * 国家杰出青年基金资助项目(基金编号:
30925045)
［作者简介］ 哈及尼沙(1973 －) ，女，维吾尔族，新疆乌
恰人，讲师，在读博士，从事新疆药用植物研究。电话:0991 －
3836733，E-mail:ajinsa@ sina． com。
［通讯作者］ 阿吉艾克拜尔·艾萨(1965 －) ，男，维吾尔
族，研究员，博士，从事天然产物的研究。电话:0991 －
3835679，E-mail:haji@ ms． xjb． ac． cn。
酮含量，得到最佳提取工艺条件。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 电子天平(北京赛多利天平有限公司) ，
UV-2550 型紫外可见分光光度计(日本岛津公司) ，
XMT-DA 型电子恒温水浴锅(余姚市亚星仪器仪表有
限公司)。
1． 2 试药 芦丁化学对照品(中国药品生物制品检
定所，批号:100080-200707，纯度:92． 5%) ，亚硝酸钠
(天津市福晨化学试剂厂) ，氢氧化钠(天津市红岩化
学试剂厂) ，硝酸铝(天津市福晨化学试剂厂) ，无水乙
醇(天津市红岩化学试剂厂)等试剂均为分析纯。
榅桲于 2009 年 10 月采自新疆克拉玛依州上阿图
什乡，榅桲子从该新鲜成熟榅桲果实中分离、室温下干
燥。将干燥种子粉碎，过筛孔内径(180． 0 ± 7． 6)μm
(80 目)筛，得榅桲子粉末。并由新疆维吾尔自治区药
品检验所苏莱曼主任药师鉴定为榅桲子。
2 方法与结果
2． 1 榅桲子总黄酮的测定
2． 1． 1 标准曲线的绘制 精密称取芦丁标准品25 mg，
加 75%乙醇超声完全溶解，定容至 100 mL 量瓶中，摇
·629· Herald of Medicine Vol. 30 No. 7 July 2011
匀，制成浓度为 0． 250 mg·mL-1的标准品溶液。分别精
密吸取标准品溶液 0． 0，1． 0，2． 0，3． 0，4． 0，5． 0，6． 0 和
7． 0 mL置于 25 mL量瓶中，各加 5%亚硝酸钠 0． 5 mL，
放置 6 min后，加 8%硝酸铝 0． 5 mL，放置 6 min，再加
1 mol·L-1氢氧化钠 5 mL，加水至刻度，摇匀，放置
15 min，以不加标准品的溶液作空白，取中等浓度的标
准溶液在 400 ～800 nm波长范围进行扫描，在 506． 5 nm
波长处有最大吸收。最大吸收波长处测定各标准溶液
的吸光度值，以吸光度(Y)为纵坐标，浓度(X，
mg·mL-1)为横坐标，绘制标准曲线。用计算机进行线
性回归，得芦丁质量浓度和吸光度的关系为:Y =
7． 754 5X +0． 066 3，r = 0． 999 7。在吸光度 ＜ 0． 5 的范
围内，吸光度和浓度保持较好的线性关系。
2． 1． 2 榅桲子总黄酮含量的测定 称取一定量榅桲
子粉末，用适量 75%乙醇回流 2 h，抽滤后滤液置于
50 mL量瓶中，用 50%乙醇定容至刻度，摇匀。取此样
品液 5． 0 mL置于 25 mL量瓶中，然后按“2． 1． 1”方法
测定提取液的吸光度，通过标准曲线计算得到样品总
黄酮的含量。总黄酮含量 = 榅桲子中总黄酮提取量 /
榅桲子质量。
2． 2 单因素实验及水平考察 将原料榅桲子粉末按
1∶10 ～ 1∶35(倍)的料液比加入浓度为 55% ～ 95%
乙醇溶液，然后在温度 30 ～ 70 ℃条件下提取 0． 5 ～
3 h，1 ～ 4 次，每次改变其中 1 个因素，分析该因素对
提取量的影响。用单因素实验来确定总黄酮最佳提取
条件。
由于各因素之间有相互交叉影响，因此要全面考
虑乙醇提取法的工艺参数，采用 L9(3
4)正交设计表安
排实验，以总黄酮提取量作为主要考察指标。
2． 3 实验与结果
2． 3． 1 乙醇浓度对提取量的影响 精密称取榅桲子 5
份，每份 5． 00 g，分别取体积分数为 55%，65%，75%，
85%和 95%乙醇溶液各 100 mL，在 60 ℃水浴中回流提
取 2 h，趁热过滤，冷却后，按照“2． 1． 2”方法计算黄酮含
量，结果黄酮含量分别为 4． 00，10． 25，10． 50，7． 75 和
5． 75 mg·g-1。实验结果表明:随着乙醇浓度的增加，总
黄酮含量降低。低浓度乙醇中水分含量较多，可促进植
物在水中的膨胀，提高植物和溶剂的接触面。从实验中
也可以看出:乙醇浓度为 75%时黄酮含量最高，所以
75%乙醇选为最佳乙醇提取浓度。
2． 3． 2 提取时间对提取量的影响 精确称取榅桲子
药材粉末 6 份，每份 5． 00 g，在料液比为 1∶20 的提条
件下，加 75%乙醇溶液，在 60 ℃水浴中分别回流提取
0． 5，1． 0，1． 5，2． 0，2． 5 和 3． 0 h，趁热过滤，冷却后按
照“2． 1． 2”的方法计算黄酮含量，结果黄酮含量分别
为 6． 75，8． 00，8． 25，9． 50，9． 75 和 8． 25 mg·g-1。实验
结果表明:当提取时间为 2． 5 h 时，提取效果最好。而
当时间继续延长时，总黄酮含量反而降低。这可能是
由于提取时间太长，部分乙醇被挥发而导致溶液沸点
逐渐增大，从而破坏某些黄酮类化合物。
2． 3． 3 料液比对提取量的影响 精确称取榅桲子药
材粉末 6 份，每份 5． 00 g，分别加 75%乙醇溶液，料液
比(倍)分别为 1∶10，1∶15，1∶20，1∶25，1∶30 和
1∶35，在 75 ℃水浴中回流提取 2 h，趁热过滤，冷却
后，按照“2． 1． 2”的方法计算黄酮含量，结果黄酮含量
分别为 6． 25，9． 50，5． 25，6． 50，6． 75 和 7． 00 mg·g-1。
从实验结果可知:料液比 1∶15(倍)时总黄酮提取量
最高，因此选择料液比 1∶15(倍)为最佳提取料液比。
2． 3． 4 提取温度对提取量的影响 精确称取榅桲子
药材粉末 7 份，每份 5． 00 g，乙醇浓度为 75%，料液比
为 1∶15，分别在 30，40，50，60，70，80 和 90 ℃恒温水
浴中回流 2 h。趁热过滤，冷却后，按照“2． 1． 2”方法
进行黄酮含量的测定。结果黄酮含量分别为 2． 25，
3． 75，5． 75，8． 25，9． 00，5． 55 和 7． 25 mg·g-1。实验结
果表明:70 ℃时总黄酮含量最大，黄酮在乙醇中的溶
解度随着温度的升高而增大，但温度 ＞ 70 ℃时发现含
量走势不稳定。温度太高有可能破坏黄酮类化合物的
结构，可能溶剂挥发率增加而影响黄酮的提取量，所以
初步选 70 ℃为最佳提取温度，进一步用正交实验来确
定最终提取温度。
2． 3． 5 提取次数对提取量的影响 精密称取榅桲子药
材粉末 4份，每份 5． 00 g，以 75%乙醇溶液为提取溶剂、
料液比为 1∶30下，分别在 70 ℃恒温水浴中回流 1，2，3
和 4次，每次 2 h。趁热过滤，冷却后按照“2． 1． 2”的方
法进行黄酮含量的测定，结果黄酮含量分别为 1． 50，
5． 75，6． 50和 6． 50 mg·g-1。实验结果表明:提取 2次以
上时总黄酮提取率明显增高，提取 3 次时总黄酮含量最
高与提取 4次的总黄酮含量差别不大，为了节约提取时
间选择提取 3次为最佳的提取次数。
2． 4 正交实验设计及结果 榅桲子总黄酮的提取量
受到很多因素的影响，根据单因素预实验分析，发现提
取温度(A)、提取时间(B)、料液比(C)、乙醇浓度(D)
对榅桲子总黄酮的提取量均有影响。由于各因素之间
有相互交叉影响，要全面考虑乙醇提取法的工艺参数。
通过以上单因素实验，找出最佳单因素，在最佳单因素
数据的基础上，采用 L9(3
4)正交设计表安排实验，以
总黄酮提取量作为主要考察指标。因素和水平见表
1，实验方案及结果见表 2，方差分析见表 3。
·729·医药导报 2011 年 7 月第 30 卷第 7 期
表 1 4 因素水平表
Tab． 1 The four factors and levels
水平
提取温度
(A)/℃
提取时间
(B)/h
料液比
(C)
乙醇浓度
(D)/%
1 50 1． 5 1∶10 65
2 60 2． 0 1∶15 75
3 70 2． 5 1∶20 85
表 2 L9(3
4)正交设计实验的结果
Tab． 2 Results of L9(3
4)orthogonal test
实验
因素
A B C D
总黄酮含量 /
(mg·g-1)
1 1 1 1 1 11． 75
2 1 2 2 2 9． 50
3 1 3 3 3 5． 75
4 2 1 2 3 8． 75
5 2 2 3 1 7． 00
6 2 3 1 2 13． 75
7 3 1 3 2 9． 50
8 3 2 1 3 7． 50
9 3 3 2 1 11． 25
K1 9． 00 10． 00 11． 00 10． 00
K2 9． 83 8． 00 9． 83 10． 92
K3 9． 42 10． 25 7． 42 7． 33
R 0． 83 2． 25 3． 58 3． 59
A．提取温度;B．提取时间;C．料液比;D．乙醇浓度
A． extration temperature;B． extration time ;C． the ratio of
material to liquid;D． ethanol concentration
表 3 4 因素方差分析
Tab． 3 Variance analysis of 4 factors
因素 偏差平方和 自由度 F比 P值
A 1． 042 2 1． 000 ＞ 0． 10
B 9． 125 2 8． 757 ＞ 0． 10
C 20． 042 2 19． 234 ＜ 0． 05
D 20． 792 2 19． 954 ＜ 0． 05
误差 1． 042 2
F0． 10(2，2)= 9． 0，F0． 05(2，2) = 19． 0，F0． 01(2，2) = 99． 0;A．提取温
度;B．提取时间;C．料液比;D．乙醇浓度
A． extration temperature;B． extration time ;C． the ratio of
material to liquid;D． ethanol concentration
从表 2 中的 K1，K2，K3，R 分析得到:乙醇浓度，提
取时间，料液比，提取温度 4 种因素对榅桲子总黄酮提
取的影响程度依次为:乙醇浓度 (D)＞料液比(C)＞
提取时间 (B)＞提取温度(A)。比较各因素的极差 R
可知，料液比和乙醇浓度的极差较大，说明它们对总黄
酮的提取量影响较为显著;而提取时间和提取温度的
极差较小，说明对总黄酮提取量的影响较小。总黄酮
的提取量随乙醇浓度先升高，而后有所下降，在 75%
时提取量最高，浓度 ＞ 75%时提取量下降，可能是由于
乙醇浓度过大时，在加热条件下，溶剂挥发从而较多损
失的缘故。
由表 3 可知，料液比和乙醇浓度在置信度 95%水
平上对提取量影响显著。通过以上综合分析，结合单
因素实验和极差分析，确定最佳提取工艺为 A2 B3 C1
D2，即提取温度为 60 ℃，提取时间 2． 5 h，料液比 1∶
10，乙醇浓度 75%，提取 3 次。
2． 5 验证实验 按照正交实验确定的最佳工艺:提取
温度为 60 ℃，提取时间 2． 5 h，料液比 1∶10，乙醇浓
度 75%的条件下，重复 3 次进行实验，得到的平均提
取量为 13． 60 mg·g-1。3 次重复实验的结果之间相差
很小，说明该工艺稳定可靠，可作为有机溶剂提取榅桲
子的最佳工艺。
3 讨论
根据单因素实验，确定榅桲种子中总黄酮的提取
条件为:乙醇浓度 75%，提取时间 2． 5 h，料液比 1∶
15，提取温度 70 ℃，提取次数 3 次。各因素之间有相
互交叉影响，在单因素实验结果的基础上采用 L9(3
4)
正交设计实验，考虑乙醇提取法的工艺参数。正交实
验结果显示，影响总黄酮提取量的因素主次顺序为:乙
醇浓度 ＞料液比 ＞提取时间 ＞提取温度。确定提取条
件为 75%乙醇作溶剂，料液比 1∶10，温度为 60 ℃，提
取 3 次，每次提取时间 2． 5 h，得到榅桲子中黄酮类物
质总含量为 13． 60 mg·g-1。根据验证实验，该提取工
艺稳定性好，可靠。
本实验采用分光光度法，以芦丁为标准对照品，测
定榅桲子中总黄酮含量，选择最佳提取工艺条件。该方
法操作简便，成本低，提取效果好，可用于检测榅桲子中
黄酮含量，为该药材的进一步系统研究提供了依据。
(志谢:感谢“中国科学院、国家外国专家局创新团队国际
合作伙伴计划”项目和国家杰出青年基金项目的资助)
［DOI］ 10． 3870 /yydb． 2011． 07． 032
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原子吸收分光光度法
测定自制营养液中钾钠镁的含量
李伟1，吴峰2，王文清1，贺国芳1，方建国1，姜汉英1
(1．华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部，武汉 430030 ;2．武汉医药卫生学会联合办公室《中国医院
药学杂志》编辑部，武汉 430014)
［摘 要］ 目的 建立对自制营养液中钾、钠、镁等含量测定的方法。方法 分别以氯化钠和氯化锶为消电离剂，
采用火焰原子吸收分光光度法测定。结果 钾、钠、镁的平均回收率分别为 99． 1%，98． 5%，100． 0%(n = 9) ，RSD 分别
为 0． 77%，1． 51%和 0． 99%。结论 该方法的线性、精密度、准确度等均良好。可用于该自制营养液中钾元素、钠元素、
镁元素的含量测定。
［关键词］ 钾元素;钠元素;镁元素;消电离剂;分光光度法;原子吸收
［中图分类号］ R927． 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1004 － 0781(2011)07 － 0929 － 03
Content Determination of Kalium，Natrium and Magnesium in a Self-made Nutrient
Solution by Atomic Absorption Spectrometry
LI Wei1，WU Feng2，WANG Wen-qing1，HE Guo-fang1，FANG Jian-guo1，JIANG Han-ying1(1． Department of
Pharmacy，Tongji Hospital Affiliated with Tongji Medical College，Huazhong University of Science and
Technology，Wuhan 430030，China;2． Editorial Office of Chinese Journal of Hospital Pharmacy in Wuhan
Medical Association，Wuhan 430014，China)
ABSTRACT Objective To establish a content determination method for kalium(K) ，natrium (Na)and magnesium
(Mg)in a self-made nutrient solution by atomic absorption spectrometry(AAS)． Methods Sodium chloride(NaCl)and
strontium chloride(SrCl2)were used as deionization agents，respectively and K，Na and Mg were determined by FAAS method．
Results The average recovery of K，Na and Mg were 99． 1%，98． 5%，100． 0%(n = 9)and RSD were 0． 77%，1． 51% and
0． 99%，respectively． Conclusion This method showed good linearity，precision and accuracy，which can be used for quality
control of K，Na and Mg in the self-made nutrient solution．
KEY WORDS Kalium;Natrium;Magnesium;Deionization agent;Spectrometry;Atomic absorption
华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植
研究所自制了一种移植器官营养液，其主要成分为多
种有机物质和无机矿物元素。经动物实验证明，该营
养液可有效维持器官移植过程中被移植器官细胞的活
［收稿日期］ 2010 － 08 － 23
［作者简介］ 李伟(1986 －) ，男，江西南昌人，硕士，研究
方向:药物分析。电话: (0)13476038303，E-mail:759900672@
qq． com。
［通讯作者］ 姜汉英，女，主任医师，副教授，主要从事移
植免疫和免疫药理研究。电话: (0)13886157473，E-mail:
hyjiang@ tjh． tjmu． edu． cn。
性。笔者对该营养液中所含的钾元素、钠元素、镁元素
的含量测定方法进行研究，建立的火焰原子吸收分光光
度法能快速、有效测定该自制营养液中上述 3 种金属元
素的含量，可用于该自制营养液的质量控制。
1 仪器与试药
AA6300型原子吸收分光光度计(日本岛津) ，钾、
钠、镁单元素标准溶液［国家标准物质研究中心，批号分
别为 GBW(E)080125，GBW(E)080127，GBW(E)
080126］，自制营养液(批号:Z0904001，Z0904002，
Z0904003) ，六水氯化锶 (GR 级，国药集团化学试剂有
限公司，批号:20081104) ，氯化钠 (AR级，天津市东丽
·929·医药导报 2011 年 7 月第 30 卷第 7 期