全 文 ：青海农林科技 ·专 题 综 述· 2015 年第 1 期
收稿日期:2014 － 08 － 18
作者简介:王 欢(1982 －) ，女，硕士，研究方向:药物分析。电话:13997269851，E － mail:251986635@ qq． com
喜马拉雅紫茉莉根部总黄酮成分的
提取与含量测定
王 欢，张跃华
(青海民族大学 化学与生命科学学院，青海 西宁 810007)
摘 要:采用单因素实验和正交设计试验，以分光光度法测定总黄酮含量为考察指标，研究喜马拉雅紫
茉莉根部在乙醇超声提取下的最佳提取工艺并测定其含量。喜马拉雅紫茉莉根部总黄酮的最佳提取工艺
为:45%乙醇，超声时间为 55min，料液比为 1∶25 的条件下超声提取 3 次，总黄酮含量为 2. 64%。本方法具有
快速、简便、经济可靠、效果显著等特点，可为开发和利用喜马拉雅紫茉莉根部总黄酮成分提供科学依据。
关键词:喜马拉雅紫茉莉;总黄酮;分光光度法
中图分类号:Q949. 745. 3 文献标识码:A 文章编号:1004 － 9967(2015)01 － 0027 － 04
Extraction and Determination of Total Flavonoids
in Mirabilis himalaica Ｒoots
WANG Huan，ZHANG Yue-hua
(College of Chemistry and Life Sciences，Qinghai Nationalities University，Xining Qinghai，810007，China)
Abstract:To determine the optimum extraction process of total flavonoids from Mirabilis himalaica roots
and determination of its content． Single factor experiments and orthogonal design to spectrophotometric deter-
mination of total flavonoids as indexes，research Mirabilis himalaica roots in ethanol ultrasonic extraction under
optimum extraction process and determine its content． The optimum extraction of total flavonoids Mirabilis hi-
malaica roots as follows:45% ethanol，ultrasonic time of 55min，solid － liquid ratio of 1∶ 25 under the condi-
tions of ultrasonic extraction three times，total flavonoid content was 2. 64% ． This method is fast，easy，econom-
ical and reliable，the effect is significant，etc．，can provide a scientific basis for the development and use of the
Mirabilis himalaica roots of total flavonoids．
Key words:Mirabilis himalaica;Flavonoids;Spectrophotomrtry
喜马拉雅紫茉莉(Mirabilis himalaica)为紫茉
莉科紫茉莉属植物。喜马拉雅紫茉莉根是干燥
块根。藏医学认为，喜马拉雅紫茉莉为五根的药
上品，味甘辛，有引黄水、温肾、壮阳、治下身寒
症、利尿排石的功效，常用于腰及关节痛，肾寒浮
肿，下腹痛及膀胱结石、一些病毒感染及各种性
病［1 － 3］。根部具有黄酮类化合物［4］，为测定其黄
酮含量本文采用超声提取法提取喜马拉雅紫茉
莉根部总黄酮化合物，用紫外分光光度法测定其
总黄酮含量［5］。结果表明，该提取工艺操作简
便，经济可靠，效果显著，适合对喜马拉雅紫茉莉
根部的总黄酮类化合物进行提取测定。
1 原料、仪器与试剂
1. 1 原料
试验药材:喜马拉雅紫茉莉根原料药材，采
于青海互助北山林场，经青海民族大学化学与生
命科学学院毛继祖教授鉴定。
1. 2 仪器
FA1064N型电子天平(上海精密仪器仪表有
限公司);TU － 1810 紫外可见分光光度计(北京
普析通用仪器有限责任公司);KQ － 300B 型超声
波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;粉碎机;
60 目筛网。
1. 3 试剂
72
95%乙醇、10%氢氧化钠、5%亚硝酸钠、10%
硝酸铝、芦丁标准品，所用试剂均为分析纯;实验
用水为蒸馏水。
2 实验方法与结果
2. 1 样品的处理
取喜马拉雅紫茉莉根原药材，去杂质，切断，
粉碎后过 60 目筛作为实验样品备用。
2. 2 样品溶液的制备
准确称取 1. 0000 g 喜马拉雅紫茉莉根药材
粉末，用 60%乙醇 20ml 超声提取 30min，过滤取
其滤液，即得待测溶液。
2. 3 紫外分光光度法测定喜马拉雅紫茉莉根部
总黄酮显色方法
精密吸取 1. 0ml样品溶液致 25ml容量瓶中，
加 95%乙醇 5ml，加入 5%亚硝酸钠溶液 1ml，摇
匀，6min后加入 10%硝酸铝溶液 1ml，摇匀，6min
后加入 10%氢氧化钠溶液 5ml，95%乙醇定容［6］。
随后做空白对照。
2. 4 最大吸收波长的确定
取上述样品溶液，在全波长范围内扫描溶液
的紫外吸收光谱，该溶液在 510nm 处有最大吸收
值，因此可以选择 510nm作为检测波长。
2. 5 对照品芦丁标准溶液的制备
精密称取芦丁标准样品 0. 0101g，至 25ml 容
量瓶中，用 95%乙醇溶解并稀释至刻度，即得芦
丁对照品标准溶液。
2. 6 标准曲线的绘制
精密吸取芦丁标准溶液 0. 0、0. 4、0. 8、1. 2、
1. 6、2. 0ml分别置于 25ml 容量瓶中，按 2. 3 项下
自“加乙醇 5ml 后同法测定吸光度。分别在
510nm处测定其吸光度。结果见表 1。
表 1 不同浓度芦丁标准溶液的吸光度
浓度(mg /ml) 0. 0 0. 0041 0. 0082 0. 0124 0. 0165 0. 0206
吸光度 A 0. 0 0. 058 0. 106 0. 161 0. 214 0. 263
根据上表数据，以吸光度 A 为纵坐标，以芦
丁标准溶液的浓度 C (mg /ml)为横坐标绘制标
准曲线，见图 1。得到芦丁浓度 C 与吸光度 A 关
系曲线，其线性回归方程式为:y = 8. 1259x +
0. 0023，相关系数 Ｒ2 = 0. 9996。
图 1 芦丁标准溶液浓度与吸光度度 A关系的标准曲线
2. 7 供试品溶液总黄酮含量的测定方法
精密称取喜马拉雅紫茉莉根粉末 1. 0000g，
用 60%乙醇 20ml 超声提取 30min。按照 2. 3 项
下的方法将提取后的溶液进行处理，测定吸光
度。根据公式 X =(A － 0. 0023)/8. 1259 × 25 ×
20 /1000 计算出样品的总黄酮浓度。
2. 8 超声波提取法的单因素实验及结果
影响超声波提取法提取效率的因素主要有:
提取剂浓度(乙醇浓度)，提取次数，提取时间及
料液比 4 个因素。本单因素实验主要通过考察
上述 4 个因素来判断它们对于提取率的影响。
从而选出每个单因素下的最优条件，为进一步正
交实验奠定基础。
2. 8. 1 提取剂浓度对总黄酮收率的影响
精密称取喜马拉雅紫茉莉根粉末 1. 0000g各
5 份，分别置于 250ml锥形瓶中，各自按照料液比
1∶ 20 分别加入 40%，50%，60%，75%和 90%乙
醇，超声提取时间为 30min。根据 2. 3 项下的方
法将提取后的溶液进行处理，制备供试品溶液，
分别在 510nm 下测出吸光度，测定结果见表 2。
以吸光度 A 为纵坐标，以乙醇浓度为横坐标作
图，见图 2。
表 2 提取剂浓度对总黄酮收率的影响
编 号 乙醇浓度(%) 吸光度
1 40 0. 251
2 50 0. 280
3 60 0. 278
4 75 0. 272
5 90 0. 264
实验结果表明，50%乙醇提取效果最好，往
后随着乙醇浓度加大，总黄酮含量开始下降。可
82
能是随着乙醇浓度增加，某些脂溶性杂质溶出量
增加，干扰因素增多所致。因此应该选择 50%左
右的乙醇作为喜马拉雅紫茉莉根部总黄酮提取
溶剂。
图 2 提取剂浓度对总黄酮含量的影响
2. 8. 2 料液比对总黄酮收率的影响
精密称取粉碎好的喜马拉雅紫茉莉根原料
药材 1. 0000g5 份，分别置于锥形瓶中，按照料液
比 1∶10，1∶15，1∶20，1∶25 和 1∶30，加入 50%乙醇，
超声提取时间 30min。根据 2. 3 项下的方法将提
取后的成分进行处理，制备供试品溶液，分别在
501nm下测出吸光度，测定结果见表 3。以吸光
度 A为纵坐标，料液比为横坐标组图，见图 3。
表 3 料液比对总黄酮收率的影响
编号 料液比 吸光度 A
1 1∶10 0. 309
2 1∶15 0. 460
3 1∶20 0. 444
4 1∶25 0. 365
5 1∶30 0. 329
图 3 料液比对总黄酮收率的影响
实验结果表明，料液比 1∶ 20 提取效果最好，
随着料液比加大，总黄酮含量开始下降。可能是
随着料液比增加，某些杂质的溶出量增加，干扰
因素增多所致。因此应该选择 1∶ 20 左右料液比
作为喜马拉雅紫茉莉根总黄酮提取溶剂体积。
2. 8. 3 提取时间对总黄酮收率的影响
精密称取喜马拉雅紫茉莉根原料药材
1. 0000g5 份，分别置于锥形瓶中，按照料液比
1∶20依次加入 50%乙醇，按照提取时间 30min，
40min，50min，60min，70min 进行超声提取。根据
2. 3 项下的方法将提取后的成分进行处理，制备
供试品溶液，分别在 510nm 下测出吸光度，测定
结果见表 4。以吸光度 A 为纵坐标，以提取时间
为横坐标作图，见图 4。
表 4 提取时间对总黄酮收率的影响
编 号 提取时间(min) 吸光度
1 30 0. 390
2 40 0. 455
3 50 0. 493
4 60 0. 474
5 70 0. 440
图 4 提取时间对总黄酮收率的影响
实验结果表明，提取时间为 50min，提取效果
最好，随着提取时间增加，总黄酮含量开始下降。
可能是随着提取时间的增加，某些黄酮成分被破
坏所至。因此选择 50min 作为喜马拉雅紫茉莉
根中总黄酮提取时间。
2. 8. 4 提取次数对总黄酮收率的影响
精密称取喜马拉雅紫茉莉根粉末 1. 0000g各
4 份，分别置于锥形瓶中，按照料液比 1 ∶ 20 依次
加入 50%乙醇，提取时间均设定为 50min。分别
按照提取次数 1 次，2 次，3 次，4 次进行超声提
取，分别合并提取液。根据 2. 3 项下的方法进行
处理，制备供试品溶液，分别在 510nm 下测出吸
光度，测定结果见表 5。以总黄酮含量为纵坐标，
以提取次数为横坐标作图，见图 5。
表 5 提取次对总黄酮收率的影响
编 号 提取次数(次) 总黄酮收率(%)
1 1 2. 103
2 2 2. 219
3 3 2. 386
4 4 2. 401
92
图 5 提取次对总黄酮收率的影响
实验结果表明，随着提取次数增加，总黄酮
含量升高，但提取 3 次后，含量变化曲线已较为
平缓。考虑到生产工艺对时间的要求和溶剂的
损耗，提取次数以 3 次以内为宜。
2. 9 正交实验确定各单因素之间相互影响的大小
以上讨论了各单因素影响，根据每种单因素
的最佳条件，为每个单因素设定提取的最佳范
围，即当提取剂为 50%乙醇，料液比为 1∶20，提取
时间为 50min，提取次数为 3 次时，提取效果最
好。但在实际操作中，各因素之间相互交叉影
响。因此，为了全面考察影响因素，选择 L9(3
4)
正交表，以乙醇浓度，料液比，提取时间和提取次
数为 4 因素，做 3 水平正交实验，正交实验因素水
平表见表 6。正交实验结果见表 7。方差分析结
果见表 8。
表 6 正交实验因素水平表
因素 乙醇浓度(%) 提取时间(min) 料液比 提取次数(次)
水平 A B C D
1
2
3
45
50
55
45
50
55
1∶15
1∶20
1∶25
1
2
3
表 7 正交实验结果直观分析表
实验号 A B C D 总黄酮收率(%)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
均值 1
均值 2
均值 3
极差
1
1
1
2
2
2
3
3
3
6. 83
6. 49
6. 54
0. 12
1
2
3
1
2
3
1
2
3
6. 56
6. 72
6. 58
0. 05
1
2
3
2
3
1
3
1
2
6. 18
6. 85
6. 83
0. 22
1
2
3
3
1
2
2
3
1
5. 67
6. 67
7. 53
0. 62
1. 794
2. 402
2. 640
2. 521
1. 949
2. 018
2. 246
2. 371
1. 925
表 8 方差分析结果表
因 素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值
A乙醇浓度(%) 0. 02 2 0. 04 19
B提取时间(min) 0. 01 2 0. 01 19
C料液比 0. 10 2 0. 17 19
D提取次数 0. 58 2 1. 00 19
(下转第 59 页)
03
油醚更适用于工业化提取沙棘黄酮。
2. 4 成本核算
分别以正己烷和石油醚为脱脂剂提取沙棘
黄酮新增成本如表 2 所示。
表 2 不同脱脂剂对新增生产成本的影响
脱脂剂 脱脂剂损耗量(g /g沙棘黄酮纯品) 新增成本(元 /g沙棘黄酮纯品)
正己烷 39. 32 0. 4915
石油醚 49. 29 1. 0844
由表 2 可知，以正己烷为脱脂剂时，新增生
产成本 0. 4915 元 / g 沙棘黄酮纯品，而使用石油
醚为脱脂剂提取沙棘黄酮，其新增成本为 1. 0844
元 / g。虽然以石油醚为脱脂剂时提取沙棘黄酮
时提取率及产品中沙棘黄酮含量均高于正己烷，
但其生产成本也远高于正己烷，故石油醚与正己
烷相比，正己烷更适用于工业化提取沙棘果泥中
的沙棘黄酮。
3 结论
虽然以正己烷为脱脂剂提取沙棘黄酮时提
取率及产品中沙棘黄酮含量均低于石油醚，但经
过成本核算，在同一沙棘黄酮含量情况下，其生
产成本远低于石油醚，故正己烷更适用于工业化
提取沙棘果泥中的沙棘黄酮。
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(上接第 30 页)
实验结果表明，由表 8 可知，影响喜马拉雅
紫茉莉根部总黄酮提取的主次因素顺序为 D ＞
C ＞ A ＞ B，即提取次数 ＞料液比 ＞乙醇浓度 ＞提
取时间 。由表 7 可知，喜马拉雅紫茉莉根部总黄
酮含量最高为 2. 64%。喜马拉雅紫茉莉根部总
黄酮含量最佳提取工艺为 A1B3 C3D3，即 45%乙
醇、料液比 1∶25、每次提取 55min、提取 3 次。
3 讨论
本论文主要通过乙醇超声波提取法提取喜
马拉雅紫茉莉根部总黄酮，通过单因素实验，筛
选出了单因素最佳提取条件。并利用正交实验
设计，研究了喜马拉雅紫茉莉根部总黄酮化合物
最佳提取工艺。该工艺操作简便，结果可靠，为
进一步研究喜马拉雅紫茉莉提供了科学依据。
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