全 文 ：蜈蚣草总黄酮提取工艺的优选
周向军 ,杨宗琪 ,景红艳 ,高义霞
(1.天水师范学院 生命科学与化学学院甘肃 ,天水 741001)
　　摘要:采用水浴法提取总黄酮 , 以蜈蚣草为原料 、总黄酮得率为考察指标 ,通过正交试验研究乙醇浓度 、提取时间 、提取温度及
料液比对提取蜈蚣草总黄酮得率的影响。结果表明 ,各因素对总黄酮提取率的影响程度为∶乙醇浓度>提取时间>提取温度>料
液比;最佳的提取工艺条件为:乙醇浓度 60%, 料液比 1∶15 , 提取温度 60℃,每次 3h , 提取 3 次 , 在此条件下提取的总黄酮得率为
6.15%。
关键词:蜈蚣草;总黄酮;提取工艺
中图分类号:Q946.91　　文献标志码:A　　文章编号:1005-8141(2010)03-0210-02
Study on Optimization of Total Flavonoids Extraction Technology in Pteris Vittata L.
ZHOU Xiang-jun , YANG Zong-qi , JING Hong-yan , GAO Yi-xia
(School of Life Science , Tianshui Normal College , Tianshui 741001 , China)
Abstract:The ethanol extraction technology of total flavonoids in Pteris vittata L.was optimized by orthogonal experiments.The experiments re-
sults showed that the order of different factors affecting extraction rate was ethanol , extraction time , extraction temperate and rate of solid/ liquid.The
optimal experimental parameters were ethanol 60%, extraction temperate 60℃, rate of solid/ liquid 1∶15 , extraction time 3h , and three times.Under
this condition , the yield of total flavonoids was 6.15%.
Key words:Pteris vittata L.;total flavonoids;extraction technology
　　收稿日期:2010-01-15;修订日期:2010-02-03
基金项目:天水师范学院中青年教师科研项目(编号:TSA0820)。
第一作者简介:周向军(1980-),男 ,甘肃省庆阳人 ,硕士 ,助教 ,研
究方向为生物化学与分子生物学。
1　前言
黄酮类化合物是一类天然产物 ,广泛存在于植物
界 ,是许多中草药的有效成分[ 1] 。天然来源的生物黄
酮分子量小 ,能被人体迅速吸收 ,能通过血脑屏障 ,能
进入脂肪组织 ,进而体现出如下功能:消除疲劳 、保护
血管 、防治动脉硬化 、扩张毛细血管 、疏通微循环 、活化
大脑及其他脏器细胞[ 2] 。
现代药理学研究证明 ,黄酮类化合物抗心脑血管
疾病 、抗炎镇痛 、免疫调节 、降血糖 、治疗骨质疏松 ,清
除自由基 、超氧化物和羟基自由基 ,抑制脂质过氧化 ,
以及具有抗癌 、抗病毒 、抗氧化 、抗衰老 、抗辐射等作
用[ 3 ,4] 。
蜈蚣草(Pteris vittata L.)属蕨类植物门 、凤尾蕨
科 、凤尾蕨属 ,别名蜈蚣蕨 、长叶甘草蕨 、舒筋草 、牛肋
巴 ,生于山坡 、路边的钙质土或石灰岩壁缝中 。蜈蚣草
广布于我国长江以南地区 ,北到陕西 、甘肃和河南南
部。《全国中草药汇编》记载:蜈蚣草性味淡 ,平;祛风
活血 ,解毒杀虫 。主要用于防治流行性感冒 、痢疾 、风
湿疼痛 、跌打损伤;外用治蜈蚣咬伤 、疥疮[ 5] 。本文以
提取总黄酮的得率为指标 ,应用正交设计对蜈蚣草总
黄酮提取工艺条件进行优化 ,得到总黄酮的最佳提取
工艺 ,为将来进一步开发蜈蚣草资源提供参考 。
2　材料与方法
2.1　材料
蜈蚣草采自重庆大学校区周围 ,经天水师范学院
生化学院汪之波老师鉴定为凤尾蕨科凤尾蕨属植物
Pteris vittata L.。蜈蚣草全草 , 室温干燥 ,粉碎 ,过 80
目筛 ,备用 。
2.2　主要试剂及仪器
芦丁标准品购自南京替斯艾么中药技术研究所。
乙醇 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、氢氧化钠等均为国产分析纯
试剂 。主要仪器为电子天平(北京赛多利天平有限公
司)、RE —52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、
SHZ—D循环水式真空泵(河南开封宏兴科教仪器
厂)。
2.3　方法
2.3.1　标准曲线的绘制
准确称取 120℃干燥后并恒重的芦丁标准品
25mg ,加入 75%的乙醇溶液 80ml ,加热溶解 ,冷却后用
75%的乙醇定容至 100ml , 摇匀备用 , 配制成浓度为
0.25mg/ml的芦丁标准溶液;采用 NaNO2-Al(NO3)3-
NaOH光度法制作标准曲线[ 6] 。精密吸取 0 、2ml 、3ml 、
4ml 、5ml 、6ml 、7ml上述芦丁标准溶液 ,分别放置在 25ml
的容量瓶中 ,加 5%亚硝酸钠 1ml摇匀放置 6min;加
10%的硝酸铝 1ml摇匀放置 6min;加 4%的氢氧化钠
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10ml ,用 75%的乙醇稀释至刻度 ,放置 15min后测吸光
度。以吸光度为纵坐标 ,芦丁标准液浓度为横坐标 ,绘
制标准曲线(图 1)。
图 1　芦丁标准曲线
2.3.2　蜈蚣草总黄酮含量的测定
准确称取蜈蚣草干粉 1g ,置于 100ml烧瓶内 ,以一
定液固比例加入乙醇水溶液 ,在一定温度下回流提取
一定时间后过滤 。滤渣以同样条件提取 、过滤 ,合并滤
液 ,然后用乙醇水溶液定容 。用制作标准曲线的同样
方法测定蜈蚣草总黄酮的得率 。
其计算公式为:提取液总黄酮(以芦丁计)含量
(mg)=样液黄酮含量(mg)×提取液定容体积(ml)/样
液体积(ml);得率(%)=样液中黄酮的含量(mg)/蜈
蚣草重量(mg)×100%。
2.3.3　蜈蚣草总黄酮最佳提取条件的确定
根据单因素预实验 ,选择水浴温度 、乙醇浓度 、提
取时间 、液固比四个因素(表 1),固定提取次数为 3
次 ,选用 L9(34)正交表设计实验 ,以蜈蚣草总黄酮得率
作为考察指标 ,并利用 SPSS 11.5 进行分析以确定蜈
蚣草总黄酮最佳提取工艺参数[ 7] 。
表 1　正交因素水平
水平 提取温度(C°)A 提取时间(h)B 料液比C 乙醇浓度(%)D
1 50 1 1∶15 60
2 60 2 1∶20 70
3 70 3 1∶25 80
3　结果与分析
3.1　蜈蚣草总黄酮定性分析[ 8]
取上述提取的样品溶液滴一滴在滤纸上 ,在可见
光下呈灰黄色 ,在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点;取
样品溶液 1ml ,滴加 1%的氢氧化钠溶液 ,溶液出现桔
黄色;取样品溶液点在滤纸上 ,滴加 1%的三氯化铝乙
醇溶液 ,吹干在可见光下呈灰黄色 ,在紫外光下呈黄色
荧光斑点;取样品溶液点在滤纸上 ,滴加 1%的乙酸镁
甲醇溶液 ,吹干 ,在紫外光下呈黄色斑点;取样品溶液
1ml在试管中加镁粉 ,再加入浓盐酸数滴 ,在泡沫处呈
紫红色;取样品溶液 1ml ,滴加 1%的三氯化铁溶液 ,溶
液产生墨绿色沉淀 。综合以上颜色反应结果表明 ,蜈
蚣草乙醇提取物含有黄酮类化合物 ,可能含有黄酮醇
和二氢黄酮。
3.2　正交试验结果
从表 2分析结果可知 ,各因素对蜈蚣草总黄酮提
取率的影响强弱顺序为:D>B>A >C ,即乙醇浓度>
提取时间>提取温度>料液比 。我们选定蜈蚣草总黄
酮最佳提取工艺为 A2B3C1D1 ,即提取温度 60℃、提取
时间 3h 、料液比 1∶15 、乙醇浓度 60%,在此条件下蜈蚣
草总黄酮得率为 6.15%。
表 2　正交试验结果
实验号 提取温度(℃)A 提取时间(h)B 料液比C 乙醇浓度(%)D 总黄酮得率(%)
1 50 1 1∶15 60 5.62
2 50 2 1∶20 70 4.87
3 50 3 1∶25 80 5.25
4 60 1 1∶20 80 4.62
5 60 2 1∶25 60 5.99
6 60 3 1∶15 70 5.87
7 70 1 1∶25 70 5.10
8 70 2 1∶15 80 4.25
9 70 3 1∶20 60 6.15
K1 5.246 5.113 5.247 5.921
K2 5.497 5.038 5.213 5.281
K3 5.163 5.755 5.446 4.704
R 0.334 0.717 0.233 1.217
　
4　结论
蜈蚣草乙醇提取液经过颜色反应后初步鉴定为黄
酮类化合物 ,正交试验得出总黄酮的最佳提取工艺为:
A2B3C1D1 ,即提取温度 60℃、提取时间 3h 、料液比 1∶
15 、乙醇浓度 60%,在此条件下蜈蚣草总黄酮的得率
为6.15%。
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