全 文 ：大理大学学报
JOURNAL OF DALI UNIVERSITY
第1卷 第10期 2016年10月
Vol.1 No.10 Oct. 2016
［DOI］10. 3969 / j. issn. 2096-2266. 2016. 10. 002
长期大量饮酒或饮用含酒精饮料易造成酒精
性肝损害，通常表现为酒精性肝炎、脂肪肝、肝硬
化等〔1〕。酒精性肝损害已成为危害全球的公共卫
生问题，其发病率呈明显上升趋势，但至今为止，
仍未找到对其有效的防治药物〔2〕。过氧化损伤是
酒精性肝损害的公认发病机制之一〔3〕。紫茉莉俗
名地雷花、胭脂花等〔4〕，全草均可入药，药用价值
高，收载于《本草纲目拾遗》。现代研究表明紫茉
莉具有抗氧化、抗癌、抗菌、收缩子宫平滑肌等多种
药理作用〔5-8〕。李凌智等〔9〕研究表明紫茉莉中含有
抗氧化物质——黄酮，黄酮对实验性肝损伤有一
定的保护作用。因此，本实验就紫茉莉提取物对
乙醇诱导损伤的L-02肝细胞的影响进行了研究。
1 材料
1.1 样品 紫茉莉采于云南省大理市，由大理大学
药学与化学学院张德全副教授鉴定为紫茉莉科紫
茉莉属植物紫茉莉（Mirabilis jalapa L.）。将紫茉莉
洗净，晾干，粉碎。称取5 kg用无水乙醇冷浸提取3
次，混合并浓缩冷浸液，得浸膏294.56 g（1 g浸膏约
相当于17 g生药），冰箱保存备用〔10〕。无菌条件下：
加药前 24 h配制母液，密封冰箱保存过夜；加药
前，用 PBS（磷酸盐缓冲液）稀释母液，得 81、27、9、
3、1 mg/mL药液〔10〕。
1.2 药品与试剂 RPMI-1640 培养基（Gibco公
司）；MTT（噻唑蓝，Sigma公司），胰蛋白酶（Sigma
公司），DMSO（二甲基亚砜，Sigma公司）；胎牛血清
（杭州四季青生物工程材料有限公司）；0.25%胰蛋
白酶和 1%双抗（Amresc公司生产）；谷丙转氨酶试
剂盒、谷草转氨酶试剂盒、超氧化物岐化酶测定试
剂盒及丙二醛试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
1.3 仪器 ES-315 型高压灭菌锅（TOMY公司）；
3-111型培养箱（Thermo公司）；AE-21型倒置生物
数码显微镜（MOTIC公司）；0408-2 型台式低速离
心机（上海医疗器械集团有限公司手术器械厂）；多
功能酶标仪（BioTek公司）。
2 方法
2.1 肝细胞（L-02）培养 用含 20%胎牛血清和
1%双抗的 RPMI-1640培养基（完全培养基），置
37 ℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养，每隔 1～
2 d 更换新鲜完全培养基继续培养。当细胞长满
紫茉莉提取物对乙醇诱导L-02肝细胞损伤的影响
罗爱莲，程胜邦，沈 磊，陈俊雅，郭美仙*
（云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理 671000）
［摘要］目的：研究紫茉莉提取物对乙醇体外诱导 L-02肝细胞损伤的作用。方法：选取处于对数生长期的 L-02肝细胞，以
终浓度为 100 mmol/L的乙醇诱导损伤 8 h后，加入不同浓度的紫茉莉提取物，继续培养 16 h后，MTT法检测乙醇对肝细胞的
抑制率，酶标法检测培养液中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）及超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。
结果：8 mg/mL或更高生药浓度的紫茉莉能减小乙醇对L-02肝细胞的抑制率，降低受损细胞培养液中的ALT和AST活性，增强
SOD活性，减少MDA含量。结论：紫茉莉提取物对乙醇诱导L-02肝细胞损伤有一定的保护作用。
［关键词］紫茉莉；乙醇；L-02肝细胞；保护作用
［中图分类号］R285 ［文献标志码］A ［文章编号］2096-2266（2016）10-0005-04
［基金项目］大理大学大学生科研基金资助项目（YHXSKY201310）
［收稿日期］2016-01-13 ［修回日期］2016-03-08
［作者简介］罗爱莲，2011级药学专业本科生 .
*通信作者：郭美仙，实验师 .
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大理大学学报总第10期 医学
培养瓶底部80%以上时，以1：2或1：3进行传代，继
续置培养箱中培养。
2.2 肝细胞损伤模型的建立 以 1×105个/mL的细
胞悬液种板（96孔板，90 μL/孔）。设正常组和 3个
浓度乙醇组，每组重复 8孔，另设空白组 8孔，加入
完全培养基（90 μL/孔）。继续培养 48 h后，空白组
和正常组加入完全培养基（10 μL/孔），乙醇低浓度
组、乙醇中浓度组、乙醇高浓度组分别加入对应浓
度（500、1 000、2 000 mmol/L）的乙醇（10 μL/孔）。
继续培养24 h后，去培养液，各孔加入5 mg/mL MTT
（100 μL/孔），继续培养 4 h后，去上清液，各孔加入
DMSO（200 μL/孔），570 nm处检测吸光度（A值），
实验重复 3次，计算不同乙醇浓度下肝细胞抑制
率。选择能使肝细胞抑制率达到 50%的乙醇浓度
进行实验〔10-13〕。
2.3 紫茉莉提取物对乙醇损伤的L-02肝细胞的影响
以1×105个/mL的细胞悬液种板（96孔板，90 μL/孔）。
设正常组、模型组、溶媒组和紫茉莉 5个剂量组（A
组、B组、C组、D组、E组），每组重复6孔，另设空白组
6孔，加入完全培养基（90 μL/孔）。继续培养48 h后，
空白组和正常组各孔加入完全培养基（10 μL/孔），
其余各组各孔加入 1 000 mmol/L乙醇（10 μL/孔）。
继续培养 8 h后，空白组、正常组和模型组各孔加入
完全培养基（10 μL/孔），溶媒组各孔加入1% DMSO
（10 μL/孔），紫茉莉A组、B组、C组、D组、E组分别依
次加入对应浓度（1、3、9、27、81 mg/mL）的紫茉莉提
取物（10 μL/孔）。继续培养 16 h后，吸取培养液检
测ALT活性（波长510 nm）、AST活性（波长510 nm）
及 SOD活性（波长 450 nm）和MDA含量（波长 530
nm）。各孔加入5 mg/mL MTT（100 μL/孔），继续培养
4 h后，去上清液，各孔加入DMSO（200 μL/孔），酶标
仪检测 A值（波长 570 nm），计算各组肝细胞抑制
率〔10-13〕。实验重复3次。
2.4 数据处理 所得数据用均数±标准差（ xˉ ± s）
表示，用SPSS17.0统计软件对数据进行单因素方差
分析和组间 t检验。
3 结果与分析
3.1 不同浓度乙醇对 L-02肝细胞抑制率的影响
乙醇终浓度为50 mmol/L时，肝细胞抑制率为32.22%，
与正常组比较吸光度值明显减小，差异有统计学意义
（P＜0.01）；乙醇终浓度为100 mmol/L和200 mmol/L
时，肝细胞抑制率分别为51.79%、71.95%，与正常组
比较吸光度值均明显减小，差异有统计学意义（P＜
0.01）。因此，选择中浓度乙醇（1 000 mmol/L）进行
实验。见表1。
表1 不同浓度乙醇对L-02肝细胞抑制率的影响
（ xˉ ± s，n=8）
分组
正常组
乙醇低浓度组
乙醇中浓度组
乙醇高浓度组
终浓度/(mmol/L)
—
50
100
200
A值
0.435 ± 0.056
0.312 ± 0.030△△
0.220 ± 0.055△△
0.167 ± 0.034△△
细胞抑制率/%
—
32.22 ± 6.04
51.79 ± 7.93
71.95 ± 4.63
注：与正常组比较△△P＜0.01。
3.2 紫茉莉对乙醇损伤的L-02肝细胞抑制率的影响
模型组肝细胞抑制率为53.38%，与正常组比较吸光
度值明显减小，差异有统计学意义（P＜0.01），表明
造模成功。紫茉莉生药终浓度为 45.9 mg/mL时肝
细胞抑制率为 36.03%，与模型组比较明显减小，差
异有统计学意义（P＜0.05）；紫茉莉生药终浓度为
137.7 mg/mL时肝细胞抑制率为27.21%，与模型组比
较明显减小，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表2。
表2 紫茉莉对乙醇损伤的L-02肝细胞
抑制率的影响（ xˉ ± s，n=8）
分组
正常组
模型组
溶媒组
紫茉莉A组
紫茉莉 B组
紫茉莉 C组
紫茉莉D组
紫茉莉 E组
生药终浓度/(mg/mL)
—
—
—
1.7
5.1
15.3
45.9
137.7
A值
0.389 ± 0.051
0.181 ± 0.028△△
0.185 ± 0.027△△
0.191 ± 0.030△△
0.192 ± 0.046△△
0.217 ± 0.038△△
0.249 ± 0.041△△*
0.283 ± 0.038△△**
细胞抑制率/%
—
53.38 ± 7.19
52.40 ± 6.92
51.03 ± 7.87
50.73 ± 11.81
44.26 ± 12.45
36.03 ± 10.57*
27.21 ± 9.68**
注：与正常组比较△△P＜0.01；与模型组比较*P＜
0.05，**P＜0.01。
6
总第10期 第1卷罗爱莲，程胜邦，沈 磊，等 紫茉莉提取物对乙醇诱导L-02肝细胞损伤的影响
3.3 紫茉莉对乙醇损伤的 L-02肝细胞培养液中
ALT和AST活性的影响 与正常组比较，模型组肝
细胞ALT和AST活性均明显增强，差异有统计学意
义（P＜0.01），表明造模成功。紫茉莉生药终浓度为
15.3 mg/mL时肝细胞ALT和AST活性明显减弱，与
模型组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。紫茉
莉生药终浓度为 45.9 mg/mL和 137.7 mg/mL时肝细
胞ALT和AST活性均明显减弱，与模型组比较差异
均有统计学意义（P＜0.01）。见表3。
表3 紫茉莉对乙醇损伤的L-02肝细胞培养液中
ALT和AST活性的影响（ xˉ ± s，n=8）
分组
正常组
模型组
溶媒组
紫茉莉A组
紫茉莉 B组
紫茉莉 C组
紫茉莉D组
紫茉莉 E组
生药终浓度/(mg/mL)
—
—
—
1.7
5.1
15.3
45.9
137.7
ALT活性/(IU/L)
1.71 ± 0.29
3.42± 0.50△△
3.06 ± 0.56△△
2.97 ± 0.48△△
2.89 ± 0.71△△
2.63 ± 0.42△△*
2.40 ± 0.41△△**
2.27 ± 0.45△**
AST活性/(IU/L)
2.12 ± 0.20
3.76 ± 0.58△△
3.58 ± 0.74△△
3.41 ± 0.65△△
3.30 ± 0.52△△
3.02 ± 0.45△△*
2.79 ± 0.37△△**
2.56 ± 0.43△**
注：与正常组比较△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组
比较*P＜0.05，**P＜0.01。
3.4 紫茉莉对乙醇损伤的 L-02肝细胞培养液中
SOD活性及MDA含量的影响 与正常组比较，模
型组肝细胞 SOD活性明显减弱，MDA含量明显升
高，差异有统计学意义（P＜0.01），表明造模成功。
紫茉莉生药终浓度为 15.3 mg/mL时肝细胞 SOD
活性增强，与模型组比较差异有统计学意义（P＜
0.05）；紫茉莉生药终浓度为 45.9 mg/mL和 137.7
mg/mL时肝细胞SOD活性均明显增强，与模型组比
较差异有统计学意义（P＜0.01）。紫茉莉生药终浓
度为 5.1 mg/mL时肝细胞MDA含量降低，与模型组
比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；紫茉莉生药终
浓度为15.3 mg/mL、45.9 mg/mL和137.7 mg/mL时肝
细胞MDA含量均明显降低，与模型组比较差异均有
统计学意义（P＜0.01）。见表4。
表4 紫茉莉对乙醇损伤的L-02肝细胞培养液中
SOD活性及MDA含量的影响（ xˉ ± s，n=8）
分组
正常组
模型组
溶媒组
紫茉莉A组
紫茉莉 B组
紫茉莉 C组
紫茉莉D组
紫茉莉 E组
生药终浓度/(mg/mL)
—
—
—
1.7
5.1
15.3
45.9
137.7
SOD活性/(U/mL)
44.08 ± 7.46
17.32 ± 4.15△△
17.61 ± 3.79△△
18.54 ± 3.69△△
20.90 ± 4.31△△
22.65 ± 3.47△△*
25.16 ± 2.39△△**
31.80 ± 5.60△△**
MDA含量/(nmol/mL)
52.37 ± 9.94
121.80 ± 17.34△△
118.31 ± 12.50△△
111.27 ± 8.49△△
104.23 ± 11.98△△*
97.35 ± 12.64△△**
82.06 ± 8.35△△**
70.81 ± 9.53△△**
注：与正常组比较△△P＜0.01；与模型组比较*P＜
0.05，**P＜0.01。
4 讨论
乙醇经肝脏代谢，转化为乙醛和多种氧自由
基，氧自由基攻击肝细胞膜，导致肝细胞脂质过氧
化损伤，产生过氧化物（MDA等）。肝细胞过氧化损
伤时，细胞膜通透性增加，ALT和AST由肝细胞内
释放，细胞培养液中的 ALT和 AST活性增强。因
此，检测肝细胞培养液中MDA含量、ALT和AST活
性，可以判断肝细胞被乙醇氧化损伤的程度和药物
治疗肝脏损伤的效果。抗氧化酶SOD活性的大小，
可以反应肝细胞抗氧化能力的强弱，肝细胞代谢乙
醇的过程中需要消耗大量的SOD。因此，检测肝细
胞培养液中SOD活性，可以反映细胞抗氧化能力的
增强和药物治疗肝脏损伤的效果。
实验表明，当紫茉莉生药终浓度达到或高于
45.9 mg/mL时，可以使乙醇对L-02肝细胞的抑制率
减小；当紫茉莉生药终浓度达到或高于 15.3 mg/mL
时，可以使受损的L-02肝细胞培养液中ALT和AST
活性减弱，SOD活性增强，MDA含量减少。表明紫
茉莉提取物可以减少乙醇对L-02肝细胞的损害，即
紫茉莉提取物对乙醇损伤的L-02肝细胞有一定保
护作用，提示紫茉莉在治疗酒精性肝损伤方面具有
一定的价值。其机制可能与抗氧化有关，有待进一
步研究。
7
大理大学学报总第10期 医学
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（责任编辑 李 杨）
Effect of Extracts formMirabilis jalapa on the Damaged L-02 Human Embryo Hepatocytes Induced by
Ethanol
Luo Ailian, Cheng Shengbang, Shen Lei, Chen Junya, Guo Meixian*
（Yunnan Provincial Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical R&D, Dali,Yunnan 671000, China）
〔Abstract〕Objective: To study the effect of extracts form Mirabilis jalapa on the damaged L-02 human embryo hepatocytes induced
by ethanol. Methods: L- 02 human embryo hepatocytes in logarithmic phase were chosen and damaged by ethanol at a final
concentration of 100 mmol/L. After 8 hours, different concentrations of the extracts form Mirabilis jalapa were added in. After 16 hours
of cultivation, MTT method was used to observe inhibition rate of L- 02 human embryo hepatocytes damaged by ethanol, and Elisa
method was used to detect the activity of glutamic- pyruvic transaminase（ALT）, glutamic- oxalacetic transaminase（AST）and
superoxide dismutase（SOD）, and the content of malonaldehyde（MDA）in nutrient solution. Results: 8 mg/mL or higher crude herbal
concentrations of Mirabilis jalapa can significantly decrease inhibition rate of ethanol-induced damaged L-02 cells, obviously reduce
ALT and AST activity, increase SOD activity and decrease MDA content in the culture for damaged cells. Conclusion: Extracts form
Mirabilis jalapa has protective effect on the damaged L-02 cells induced by ethanol.
〔Key words〕Mirabilis jalapa; ethanol; L-02 human embryo hepatocytes; protective effect
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