全 文 ：　○中药研究○
大孔树脂对凤尾草水部位总黄酮的富集作用研究＊
★　刘建群＊＊　张维　张锐 　李青 　赵元　(江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室　南昌
330004)
摘要:目的:研究凤尾草水部位中总黄酮含量经大孔树脂吸附前后的变化情况 , 建立凤尾草水部位中总黄酮含量测定的方法 ,
为其提取工艺优化 、化学成分研究及质量评价提供依据。方法:凤尾草采用 70%乙醇提取 , 分部位萃取后 , 得水部位 , 利用
LSA-40大孔树脂对凤尾草中水部位的总黄酮进行富集 ,采用 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色 , 利用紫外分光光度法测定凤尾草
中的总黄酮含量 , 检测波长为 510 nm。结果:回归方程为 C=0.087 1A+0.000 7, R=0.999 8,总黄酮质量浓度在 0.004 ～ 0.04
mg/ml范围内与吸收度线性关系良好 , 水部位以及大孔树脂 95%乙醇洗脱部位平均加样回收率分别为 99.64%和 99.99%,
RSD为 1.16%和 1.47%。测得凤尾草水部位总黄酮含量为 5.16%,经 LSA-40大孔树脂富集后 ,总黄酮含量为 27.08%, 黄酮
含量提高了 5倍多。结论:该凤尾草水部位总黄酮测定方法操作简便 ,稳定性好 , 结果可靠;LSA-40大孔树脂对凤尾草水部位
总黄酮有很好的富集作用。
关键词:凤尾草;总黄酮;紫外分光光度法;含量测定;大孔树脂
中图分类号:O657.32　　文献标识码:A
StudyonAccumulationoftheTotalFlavonoidsofWaterSolubleFractioninPterismultifida
byMacroporousResin
LIUJian-qun, ZHANGWei, ZHANGRui, LIQing, ZHAOYuan
KeyLaboratoryofModernPreparationofTCM, JiangxiUniversityofTCM, Nanchang330004
Abstract:Objective:TostudytheaccumulationofthetotalflavonoidsofthewatersolublefractioninPterismultifidabymacroporous
resin.Methods:Thetotalflavonoidsofthewatersolublefractionwereaccumulatedbythemacroporousresin(LSA-40)anddetermined
byUVspectrophotometryatwavelength510nmbyNaNO2-Al(NO)3-NaOHchromogenicagent.Results:AUVspectrophotometryfor
thedeterminationofthetotalflavonoidsofthewatersolublefractioninPterismultifidawasdeveloped.Undertheselectedeperimental
conditions, theregressionequationwasC=0.087 1A+0.000 7, r=0.999 8, thelinearrangewas0.004 ～ 0.04mg/ml.Theaveragere-
coveryswere99.64%(RSD1.16%, n=6)and99.99%(RSD1.47%, n=6)forthesamplesbeforeandaftertreatedbymacroporous
resin(LSA-40).ThetotalflavonoidcontentsofthewatersolublefractioninPterismultifidawereincreasedfrom5.16%to27.08%after
treatedbymacroporousresin(LSA-40).Conclusion:TheUVspectrophotometrywassimple, stableandreliableforthedeterminationof
thetotalflavonoidsofthewatersolublefractioninPterismultifida.ThetotalflavonoidsofthewatersolublefractioninPterismultifida
canbeaccumulatedbymacroporousresin(LSA-40)withexcelenteficiency.
Keywords:Pterismultifida;totalflavonoid;UVspectrophotometry;contentdetermination;macroporousresin
　　凤尾草为凤尾蕨科植物凤尾草 Pterismultifida
Poir.的全草或根 ,具有清热解毒 、凉血止血 、消肿解
毒等功效 ,民间用于治疗肝炎 、菌痢 、淋浊 、便血 、扁
桃体炎 、痈肿疮毒 、湿疹等 [ 1] 。现代药理研究表明 ,
凤尾草含黄酮类 、萜类化合物 、甾醇类 、挥发油 、苯丙
素类等成分 ,具有广谱抗菌 、抗肿瘤 、抗病毒作用
[ 2 ～ 4] 。
我们研究发现凤尾草水部位可以拮抗中药雷公
藤甲素所致肝损伤 ,其有效成分可能为黄酮类成分 。
本文首次报道了凤尾草水部位经大孔树脂吸附前后
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江西 中医学院 学报 2 0 0 9年 8月 第 2 1卷第 4期
JOURNALOFJIANGXIUNIVERSITYOFTCM 2009 Vol.21No.4
＊
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基金项目:江西省卫生厅中医药科研计划项目(2008B007)
作者简介:刘建群 ,男,副教授 ,博士。 Tel:0791-7118657;E-mail:liu5308@sina.com
　○中药研究○
的总黄酮的含量变化情况 ,发现 LSA-40大孔树脂对
凤尾草中水部位中总黄酮的富集效果明显 ,为凤尾
草水部位的进一步化学成分研究以及质量评价提供
依据 。
1　仪器与材料
岛津 U-3000 紫外分光光度计;分析天平
(TG328A)。药材凤尾草全草于 2007年 9月采自江
西省南昌市 ,原植物由江西中医学院药用植物研究
室赖学文教授鉴定 为凤尾草 (Pterismultifida
Poir.),凭证标本(No.070901)保存于江西中医学院
现代中药制剂教育部重点实验室 。芦丁对照品(中
国药品生物制品检定所 ,含量≥99%), LSA-40大孔
树脂(西安蓝深交换吸附材料有限责任公司),其它
试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　树脂预处理
大孔吸附树脂 ,先用水漂洗去白色混浊物 ,再用
95%乙醇泡 24 h后使之充分溶胀 ,上柱 ,用 95%乙
醇洗至流出液中加水无混浊 ,然后用蒸馏水洗至无
醇味 ,然后用 4%NaOH溶液洗至呈碱性 ,浸泡 6 h,
用蒸馏水洗至中性 ,再用 4%HCl溶液洗至呈酸性 ,
浸泡 6h,用蒸馏水洗至中性 ,待用 。
2.2　样品制备
称取粉碎后的凤尾草药材 2.2 kg,用 70%乙醇
回流提取 3次 ,合并提取液过滤 ,回收乙醇 ,减压浓
缩至无醇味 ,加水混悬至药液比 1:1,依次用石油
醚 、乙酸乙酯 、正丁醇萃取后 ,保留下层水部位 ,减压
干燥 ,得水部位浸膏(268 g)。称取 70 g水部位浸
膏用水溶解后 ,上 LSA-40大孔树脂柱 ,静态吸附 5h
后 ,先用水洗脱至基本无颜色后 ,再用 95%乙醇洗
脱 ,回收溶剂 ,得大孔树脂 95%乙醇洗脱部位样品
9.5 g。
分别精密称取上述水部位样品 162 mg, 95%乙
醇洗脱部位样品 20 mg,分别加 50%乙醇定容至 50
ml,供试品溶液水部位溶液浓度为 3.24 mg/ml,供
试品溶液大孔树脂 95%洗脱部位溶液浓度为 0.40
mg/ml。
2.3　定性检查
两份样品溶液分别用三氯化铝反应 、浓氨水反
应 、盐酸 -镁粉反应检查 ,结果均为阳性反应。以上
检查表明 ,供试品溶液中含有黄酮类化合物 。
2.4　含量测定
2.4.1　芦丁标准溶液的配制　称取芦丁标准品 10
mg,用 50%的乙醇溶解转移至 100 ml容量瓶 ,稀释
至刻度 ,备用 。
2.4.2　测定波长的选择　精确吸取两供试品溶液
和芦丁对照品溶液各 3 ml,分别置 25 ml量瓶中 ,各
瓶中分别加入 5%的 NaNO2溶液 1 ml,摇匀 ,放置 6
min, 10%Al(NO3)3溶液 1 ml,摇匀 ,放置 6 min;各
瓶中分别加入 4%NaOH溶液 10 ml,用 50%浓度的
乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min。用 50%浓度
的乙醇作空白 ,在 300 ～ 600 nm波长范围内进行扫
描 ,结果见图 1-4所示 ,供试品溶液和对照品溶液在
510nm波长处均有最强吸收峰 ,而空白溶液在相同
位置则无吸收峰 ,故选定 510 nm为测定波长 [ 5, 6]
图 1　空白溶剂
图 2　芦丁对照品
图 3　水部位样品
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　江西中医学院学报　2009年第 21卷第 4期
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图 4　95%洗脱部位样品
2.4.3　方法学考察　标准曲线绘制:精密移取对照
品溶液 0, 1.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0 ml,分别置
25 ml量瓶中 ,各加 5%的 NaNO2溶液 1ml,摇匀 ,放
置 6 min, 10%Al(NO3)3溶液)1 ml, 摇匀 ,放置 6
min,再加入 4%NaOH溶液 10 ml,用 50%浓度的乙
醇稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 15min。以空白对照品溶
液作空白 ,分别在 510 nm波长处测定吸收度 ,以芦
丁对照品溶液质量浓度(C)为纵坐标 、吸收度(A)
为横坐标绘制标准曲线 ,回归方程为 C=0.087 1 A
+0.000 7, r=0.9998。结果表明 ,芦丁质量浓度在
0.004 ～ 0.04mg/ml范围内与吸收度呈线性关系 。
精密度试验:精密吸取对照品溶液 3 ml,共 5
份 ,分别置 25 ml量瓶中 ,按标准曲线绘制项下方法
进行显色操作 ,随行空白 ,于 510 nm波长处测定其
吸收度 ,吸收度平均值为 0.133, RSD为 1.56%(n=
5)。
重现性试验:分别称取同批次水部位以及大孔
树脂 95%洗脱部位两样品 ,各 6份 ,按 2.2项下方
法制得供试品溶液 ,再从每份供试品溶液中取 3ml,
依照标准曲线绘制项下方法平行操作显色 ,于 510
nm波长处测定其吸收度 ,计算两供试品中总黄酮含
量 ,两样品总黄酮含量的平均值分别为 5.15%,
27.10%, RSD分别为 0.85%, 1.97%(n=6)。
稳定性试验:分别精密吸取同批次两供试品溶
液 ,按标准曲线绘制项下进行显色操作 ,在 5, 20,
35, 50, 65 min时测定吸收度。吸收度的 RSD分别
为 2.10%, 2.05%,表明两供试品溶液在 5 ～ 65 min
内稳定。
加标回收试验:分别精密称取 6份已知总黄酮
含量的水部位粉末 50mg以及大孔树脂 95%洗脱部
位粉末 10 mg,分别加入干燥至恒重的芦丁对照品
适量 ,依法制备供试品溶液并测定总黄酮含量 ,计算
加标回收率 ,结果水部位和 95%洗脱部位平均加标
回收率分别为 99.64%(RSD1.16%), 99.99%
(RSD1.47%)。
表 1　水部位加标回收率
No 样品含量/mg·ml-1 芦丁加入量/mg·ml-1 测得总量/mg·ml-1 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
1 0.1032 0.1023 0.2052 99.74
2 0.1031 0.1057 0.2085 99.71
3 0.1032 0.1034 0.2049 98.35 99.64 1.16
4 0.1031 0.1044 0.2059 98.47
5 0.1032 0.1013 0.2045 100.00
6 0.1032 0.1051 0.2099 101.50
表 2　大孔树脂 95%洗脱部位加标回收率
No 样品含量/mg·ml-1 芦丁加入量/mg·ml-1 测得总量/mg·ml-1 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
1 0.1089 0.1022 0.2098 98.69
2 0.1086 0.1037 0.2110 98.73
3 0.1092 0.1043 0.2125 99.08 99.99 1.47
4 0.1094 0.1026 0.2142 102.20
5 0.1089 0.1037 0.2125 99.86
6 0.1092 0.1043 0.2149 101.40
2.4.4　样品含量测定　依法测定了水部位和大孔
树脂 95%洗脱部位各 5批样品含量。结果水部位
总黄酮含量分别为 5.10%、 5.18%、 5.18%、
5.19%、5.15%,平均含量 5.16%;大孔树脂 95%洗
脱部位总黄酮含量分别为 27.96%、 26.78%、
26.36%、27.09%、27.23%,平均含量 27.08%。
3　讨论
本文利用 LSA-40大孔树脂对凤尾草中水部位
的总黄酮进行富集 ,富集前 ,凤尾草中水部位总黄酮
含量为 5.16%,富集后 ,总黄酮含量为 27.08%,表
明 LSA-40大孔树脂对凤尾草中水部位中总黄酮的
富集作用明显。
大孔树脂对化学成分的吸附及解吸作用 ,目前
文献报道的有动态吸附法和静态吸附法 。本实验过
程中对样品静态吸附以及动态吸附进行考察 ,结果
发现两者存在一定差异 。与静态吸附相比 ,动态吸
附的吸附量偏低 ,这可能与动态吸附过程中药液在
树脂上停留时间大大缩短有关 ,从而影响了树脂的
吸附效果。
参考文献
[ 1]江苏新医学院 ,中药大辞典上册 [ M].上海;上海科学技术出版
社 1993:487.
[ 2]孙海燕 ,薛飞群 ,张可煜 ,等.中药凤尾草研究进展 [ J].中国兽医
寄生虫病 , 2007, 15:42-46.
[ 3]刘清飞 ,秦明珠.凤尾草的形态组织学研究 [ J] .中药材 , 2002,
(10):704-706.
[ 4]余有贵 ,赵良忠 ,段林东 ,等.凤尾草抗菌药物的提取与开发研究
[ J] .邵阳高等专科学校学报 , 2001(3):199-203.
[ 5]乔俊缠 ,陈理 ,刘涛 ,等.叶菊总黄酮含量测定 [ J] .中草药 , 1998,
29(7):453.
[ 6]李玉琪 ,李玉 ,张莉 ,等.赤土茯苓中总黄酮的含量测定 [ J] .解放
军药学学报 , 2000, 16(4):211-213.
(收稿日期:2009-06-24)
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刘建群等:大孔树脂对
凤尾草水部位总黄酮的富集作用研究