全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2016，28:1572-1575
文章编号:1001-6880(2016)10-1572-04
收稿日期:2016-07-04 接受日期:2016-08-02
基金项目:陕西省科技厅科技统筹创新工程计划(2015KTTSSF01-
02)
* 通讯作者 Tel:86-916-2641661;E-mail:zhaohuahz@ 126． com
蜜楝叶、花及果实中总黄酮含量积累动态研究
马英丽，赵 桦* ，闫 蕊，王 霞
陕西理工大学 生物科学与工程学院，汉中 723000
摘 要:本文采用紫外分光光度法分析检测了不同生长时期蜜楝叶、花及果实中总黄酮的含量及其积累动态。
芦丁标准品在 7． 76 ～ 77． 60 μg /mL范围内呈良好的线性关系，Y = 0． 0087X + 0． 0268(R2 = 0． 9964) ，平均加样
回收率为 101． 72%，RSD为 2． 25%(n = 6)。随着植物发育阶段的推移，蜜楝叶、花、果实中总黄酮的含量逐渐增
加，其中花蕾和幼果中总黄酮含量最高。研究结果表明蜜楝花及果实中黄酮类化合物含量丰富，可作为提取制
备黄酮类化合物的一种植物资源，具有很好的开发利用价值。
关键词:蜜楝;总黄酮;含量积累
中图分类号:Q949． 95 文献标识码:A DOI:10． 16333 / j． 1001-6880． 2016． 10． 013
Accumulation of Total Flavonoids in Different
Parts of Evodia lenticellata Huang
MA Ying-li，ZHAO Hua* ，YAN Rui，WANG Xia
Biological Science and Engineering College，Shaanxi Sci-Tech University，Hanzhong 723000，China
Abstract:In this paper，the contents and accumulation of total flavonoids in the leaves，flower and fruit of Evodia lenti-
cellata Huang were determined by ultraviolet-visible spectrophotometer with colorimetric method． Rutin had good linearity
within the range of 7． 76-77． 60 μg /mL，Y = 0． 0087X + 0． 0268 (R2 = 0． 9964)． The average recovery was 101． 72%
with RSD of 2． 25% (n = 6)． The results showed that the content of total flavonoids increased constantly with the growth
of E． lenticellata and reached the highest when the fruits was close to maturity． The flower and fruit of E． lenticellata were
rich in total flavonoids and can be used as a resource to extract flavonoids．
Key words:Evodia lenticellata Huang;total flavonoids;accumulation
蜜楝 Evodia lenticellata Huang 为芸香科吴茱萸
属植物，主要分布于我国陕西南部和四川等地［1-3］。
该植物近成熟果实在民间可入药，功效同吴茱萸果
实。目前，关于蜜楝果实中药用成分的研究尚不多
见，尤其是对蜜楝中黄酮类化合物的研究未见报道。
黄酮类化合物广泛存在于植物界，是许多药用
植物的主要有效成分，具有抗菌消炎、镇咳祛痰等多
种药理作用，引起国内外的广泛重视［4，5］。本文采
用超声辅助提取法对蜜楝不同生长阶段的叶、花和
果实中总黄酮含量进行了分析研究，以期了解蜜楝
植物有效成分含量及其积累动态，为蜜楝植物资源
的开发利用提供参考。
1 材料与方法
1． 1 仪器与设备
岛津 UV-2550 紫外分光光度计(日本岛津公
司) ;AB204-S电子分析天平(瑞士 Mettler Toledo 公
司) ;KQ-300DE型数控超声波清洗机(昆山市超声
仪器有限公司) ;UPH-II-10T优普超纯水机(成都优
普净化科技有限公司)。
1． 2 材料与试剂
蜜楝叶、花及果实采自陕西省汉中市汉台区雷
家巷，经陕西理工学院杨培君教授鉴定为芸香科吴
茱萸属植物蜜楝。芦丁标准品购自上海同田生物技
术 股 份 有 限 公 司 (批 号 分 别 为:14061322、
15090721)。乙醇为色谱纯，乙醚等试剂均为分析
纯，水为自制超纯水。
1． 3 实验方法
1． 3． 1 对照品溶液的制备
精密称取芦丁标准品 19． 4 mg，用 70%乙醇定
容于 50 mL 容量瓶中，制成 0． 388 mg /mL 芦丁母
液。准确量取芦丁标准品母液 0． 5、1、2、3、4、5 mL
至 25 mL 的棕色容量瓶中，即配制成浓度分别为
7. 76、15． 52、31． 04、46． 56、62． 08、77． 60 μg /mL 的
芦丁标准品溶液备用。
1． 3． 2 供试品溶液的制备
取蜜楝药材于 55 ℃条件下干燥至恒重，粉碎过
65 目筛，称取约 1 g 药材粉末，精密称定，加乙醚索
氏提取脱脂约 3 h，晾干，加 90 mL70%乙醇于 100
mL锥形瓶中，在超声功率 240 W，频率 40 KHz，温
度 40 ℃的条件下超声提取 40 min，取出，放冷，抽
滤，滤液定容至 100 mL容量瓶中。
1． 3． 3 检测波长的选择
按照 1． 3． 1 和 1． 3． 2 项下方法制备芦丁标准品
溶液和蜜楝提取液，以质量分数 70%乙醇为溶剂，
分别吸取对照品溶液和蜜楝黄酮提取液适量，于 25
mL容量瓶中，加水至 6 mL，加入 5% 亚硝酸钠 1
mL，摇匀，放置 6 min，再加入 10%硝酸铝 1 mL，摇
匀，放置 6 min，加入 1 mol /L 氢氧化钠 10 mL，加水
至刻度，摇匀，放置 15 min，在紫外分光光度计上
200 ～ 600 nm下进行全波长扫描，分别作出芦丁标
准品和蜜楝提取液的吸收曲线［6］。得出芦丁标准
溶液的最大吸收峰在 500 nm处，蜜楝提取液在波长
500 nm附近有较大吸收，由于芦丁标准品溶液与蜜
楝提取液之间的吸光度相差不大，因此后续标准曲
线的制作及蜜楝黄酮提取液中总黄酮的测定均选择
500 nm为测定波长。
2 结果与分析
2． 1 线性关系的考察
按照 1． 3． 3 项下方法，以不加芦丁对照品溶液
为空白，在紫外分光光度计上于 500 nm检测芦丁标
准品梯度溶液得对应吸光值，每个浓度分别检测 3
次得平均值，以芦丁标准品溶液浓度(X)为横坐标，
吸光值(Y)为纵坐标绘制标准曲线，得芦丁的回归
方程为 Y芦丁 = 0． 0087X + 0． 0268(R
2 = 0． 9964) ，在
7． 76 ～ 77． 60 μg /mL范围内呈良好的线性关系。
2． 2 精密度试验
准确吸取 0． 388 mg /mL 芦丁母液 1mL 于 25
mL容量瓶中，按照 1． 3． 3 项下方法，以不加芦丁对
照品溶液为空白，在 500 nm 处测定其吸光度，连续
测定 6 次，结果芦丁吸光度的 RSD = 0． 33%(n =
6) ，试验结果表明仪器精密度良好。
2． 3 稳定性试验
用某一份蜜楝样品制备供试液，供试液分别于
提取后 0、10、20、30、40、50、60 min 按 1． 3． 3 项下条
件测定吸光值。测得总黄酮吸光度的 RSD = 0． 66%
(n = 7) ，说明样品供试液中总黄酮在 1 h内稳定。
2． 4 重复性试验
精密称取同一蜜楝样品 6 份，每份约 0． 5 g，均
精密称定。按 1． 3． 2项下方法制备供试液，按 1． 3． 3项
下条件测定，每份供试液显色 3 次，每次检测得 3 个
吸光值求平均值。结果 RSD = 2． 24%，说明本实验
方法对蜜楝总黄酮的测定有很好的重现性。
2． 5 加样回收率实验
称取同一蜜楝样品 6 份，每份 0． 5 g，精密称定，
向 6 份样品中分别加入 97． 496 mg 芦丁对照品;按
1． 3． 2 项下方法制备供试液，按 1． 3． 3 项下条件测
定，计算回收率，结果见表 1。
表 1 总黄酮加样回收率实验(n = 6)
Table 1 Spiked recovery of total flavonoids (n = 6)
序号
No．
取样量
Sample
weight (g)
样品中含量
Content of
sample (mg)
添加标品量
Added
amount (mg)
测得值
Detected
amount (mg)
回收率
Recovery
(%)
平均值
Average
value (%)
RSD (%)
1 0． 5 97． 684 97． 496 196． 858 101． 72
2 0． 5007 97． 821 97． 496 192． 963 97． 59
3 0． 5002 97． 723 97． 496 196． 475 101． 29 101． 72 2． 25
4 0． 5008 97． 84 97． 496 195． 39 100． 05
5 0． 5003 97． 743 97． 496 199． 476 104． 35
6 0． 5003 97． 743 97． 496 194． 751 99． 5
2． 6 蜜楝叶、花及果实中总黄酮含量测定
称取不同发育阶段的蜜楝叶、花及果实 15 个样
品，不同发育阶段吴茱萸花及果实 4 个样品，每个样
品各取样 3 份，每份 0． 5 g，精密称定。按照 1． 3． 2
3751Vol. 28 马英丽等:蜜楝叶、花及果实中总黄酮含量积累动态研究
项下方法制备供试液，按照 1． 3． 3 项条件下测定，每
份样品重复测定 3 次，求其吸光值的平均值，根据回
归方程，计算总黄酮的含量，得出得率。
总黄酮得率 = cVf /1000 m
式中:c为所测浓度;V 为供试液体积;f 为稀释
倍数;m为样品质量。
测得 15 个蜜楝样品中总黄酮含量在 52． 15 ～
223． 96 mg /g之间，4 个吴茱萸样品中总黄酮含量在
131． 59 ～ 196． 90 mg /g 之间，不同发育阶段总黄酮
含量和 RSD见表 2。
表 2 密楝不同部位中不同生长时期总黄酮含量测定(n = 3)
Table 2 Determination results of the content of total flavonoids in different growth stages of different parts of E． lenticellata (n = 3)
样品编号
Sample No．
部位
Position
采样日期
Sampling time
总黄酮含量
Content of total
flavonoids (mg /g)
RSD (%)
1 蜜楝幼叶 2014-4-17 81． 415 2． 85
2 蜜楝幼叶 2014-5-17 89． 093 3． 21
3 蜜楝叶 2014-6-20 60． 143 2． 59
4 蜜楝叶 2014-7-20 74． 981 2． 00
5 蜜楝叶 2014-8-26 92． 055 4． 27
6 蜜楝叶 2014-9-11 58． 900 3． 59
7 蜜楝叶 2014-10-26 52． 152 2． 84
8 蜜楝花蕾 2014-6-28 223． 956 2． 89
9 蜜楝花蕾 2014-7-20 207． 829 3． 85
10 蜜楝盛花 2014-8-13 206． 915 2． 45
11 蜜楝幼果 2014-8-26 207． 162 3． 14
12 蜜楝果实 2014-9-11 223． 672 3． 28
13 蜜楝果实 2014-9-21 195． 368 3． 79
14 蜜楝果实 2014-10-11 184． 252 3． 92
15 蜜楝果实 2014-10-26 141． 681 1． 45
16 吴茱萸花 2014-8-4 138． 934 0． 56
17 吴茱萸果实 2014-9-3 169． 415 1． 16
18 吴茱萸果实 2014-10-11 196． 898 1． 59
19 吴茱萸果实 2014-11-3 131． 587 2． 20
实验结果表明，随着发育时间的推移，蜜楝叶、
花和果实中总黄酮的积累有一定的变化规律。从 4
月中旬幼叶萌发到 5 月中旬期间，蜜楝幼叶中总黄
酮含量较高，随后随着叶片的生长，叶中总黄酮成分
含量有所下降，但到 8 月下旬时，叶中的总黄酮含量
达到最高(92． 055 mg /g) ，10 月下旬落叶前，叶中的
总黄酮含量降至最低(52． 152 mg /g)。在花蕾至花
期(6 月下旬至 8 月中旬)花中的总黄酮含量可达
206． 915 ～ 223． 956 mg /g，其中花蕾中含量最高
(223． 956 mg /g)。在蜜楝幼果及近成熟果实中，总
黄酮含量很高，可达 207． 162 ～ 223． 672 mg /g，到果
实成熟时总黄酮的含量又有所下降(141． 681 mg /
g)。果实中总黄酮含量积累的动态变化情况与其
绿原酸、吴茱萸生物总碱和苦内酯成分的积累变化
情况十分相似［7，8］。
3 讨论
本实验对与蜜楝同一生长地的吴茱萸花及果实
中总黄酮积累变化同时做了分析研究，吴茱萸果实
中总黄酮含量积累变化范围在 131． 587 ～ 196． 898
mg /g，在 9 月下旬的近成熟果实中总黄酮含量最高
(196． 898 mg /g) ，幼果和成熟果实中含量较低。相
比之下，蜜楝果实中总黄酮含量高于吴茱萸果实的
含量。张颖等报道，吴茱萸果实中总黄酮含量为
109． 9 mg /g［9］，也低于本实验测得的蜜楝果实中总
黄酮含量。
《中国药典》(2015 版)规定，槐米中总黄酮含
量不低于 20%［6］。此外据文献报道，荷叶中总黄酮
4751 天然产物研究与开发 Vol. 28
含量为 116． 4 mg /g［10］，葛根中为 117 mg /g［11］，桂花
果实中可达 69． 9 mg /g［12］，薄荷叶中的可达 61． 1
mg /g［4］，通关藤中最高达 40． 22 mg /g［13］。相比之
下，蜜楝近成熟果实中总黄酮含量已经达到《中国
药典》对槐米总黄酮含量的要求，也远高于一些常
见的富含总黄酮的中药材。因此，蜜楝近成熟果实
可作为一种提取植物黄酮类化合物的优质资源，具
有很好开发利用潜力。
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