全 文 ：·药学研究·
收稿日期:2015 － 02 － 02
作者单位:兰州军区兰州总医院药材科，全军高原环境损伤防
治重点实验室，兰州 730050
* 通信作者
DOI:10． 14053 / j． cnki． ppcr． 201509018
喜马拉雅紫茉莉总多酚含量测定的方法学研究
李兰茹，马慧萍*
［摘 要］ 目的 建立喜马拉雅紫茉莉总多酚的含量测定方法。方法 以没食子酸为对照品，用福林酚比
色法测定喜马拉雅紫茉莉总多酚的含量。结果 没食子酸在浓度 1. 74 ～ 10. 44 μg /mL 的范围内与吸光度值呈
良好的线性关系(r = 0. 999 5)，喜马拉雅紫茉莉总多酚的平均含量为 8. 946 mg /g，ＲSD = 1. 16%。结论 优选的
福林酚比色法稳定可靠，简便易行，快速准确，可作为喜马拉雅紫茉莉总多酚的含量测定方法。
［关键词］ 喜马拉雅紫茉莉;总多酚;福林酚比色法
Determination of total polyphenol from mirabilis himalaica LI Lan-ru，MA Hui-ping* (De-
partment of Pharmacy，Lanzhou General Hospital，Lanzhou Military Command，Key Laboratory of The Prevention and
Cure For The Plateau Environment Damage，PLA，Lanzhou 730050，China)
［Abstract］ Objective To establish the methodology for determination of total polyphenol in mirabilis himalai-
ca. Methods Gallic acid was taken as a reference substance，the content of total polyphenol was determined by Folin-
Ciocalteu colorimetric method. Ｒesults A linear correlation between density and absorption of gallic acid solution was
noted at the concentration of 1. 74 ～ 10. 44 μg /mL (r = 0. 999 5)，the average content of total polyphenol was 8. 946
mg /g，ＲSD = 1. 16%. Conclusion The optimized method was stable and reliable，simple，rapid，accurate，it could be
used for determination of total polyphenol in mirabilis himalaica.
Key words:Mirabilis himalaica;Total polyphenol;Folin-Ciocalteu
0 引言
喜马拉雅紫茉莉(Mirabilis himalaica)为紫茉
莉科植物喜马拉雅紫茉莉的干燥根，是藏医常用
药物，味甘、辛，具有壮阳、引黄水、治下身寒症［1］、
温肾、利尿排石的功效，常用于治疗肾寒浮肿、腰
及关节痛、下腹痛及膀胱结石［2］、各种性病及一些
病毒感染［3］。目前已发现该药材中含有多种甜菜
素、氨基酸、有机酸、三萜、甾体、脂肪酸、葫芦巴碱
和半乳糖等多种成分，而对其多酚类物质的研究
尚未见报道。多酚是一类抗氧化活性物质的重要
成分，具有较高的食品保健和药用开发价值。本
实验以喜马拉雅紫茉莉为原料，采用福林酚法
(Folin-Ciocalteu Method，FC 法)对其总多酚含量
进行测定，以期为喜马拉雅紫茉莉的深入开发利
用以及质量标准的制定提供科学依据。
1 仪器与试药
UV2800SPC 紫外分光光度计(上海舜宇恒平
科学仪器有限公司)，AE200 电子天平(上海梅特
勒 －托利多公司)，SK3300LH 型超声波清洗机
(上海科导超声仪器有限公司)。喜马拉雅紫茉莉
药材(产地:甘肃，购于青海西宁三江宝商贸有限
公司);没食子酸对照品(批号:110831-200302，中
国药品生物制品检定所);钨酸钠、钼酸钠、硫酸
锂、无水碳酸钠、磷酸、盐酸等试剂均为分析纯，水
为蒸馏水。
2 方法与结果
2. 1 喜马拉雅紫茉莉药材提取液的制备 将供
试药材用粉碎机粉碎，过 100 目筛。取供试药材
1 g，精密称定，加入 70%乙醇 20 mL，超声提取 2
次(功率 160 W，频率 59 kHz)，每次 15 min，过滤，
滤液合并后定容至 50 mL 量瓶，摇匀，再精密吸取
3 mL定容至 10 mL，摇匀，即为喜马拉雅紫茉莉提
取液。
2. 2 对照品溶液的制备 取没食子酸适量，精密
称定(0. 008 7 g)，置 25 mL 量瓶中，加去离子水制
成每 l mL 含没食子酸 0. 348 mg 的溶液，低温保存
备用。临用稀释成 34. 8 μg /mL 的溶液。
2. 3 福林酚(Folin-Ciocalteu，FC)试剂的制备
取钨酸钠 25 g，钼酸钠 6. 25 g，加水 175 mL、85%
磷酸 12. 5 mL、盐酸 25 mL，置磨圆底烧瓶中，缓缓
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加热回流 10 h，放冷，再加硫酸锂 37. 5 g、水
12. 5 mL和 0. 2 mL 双氧水，开口加热煮沸 15 min，
使双氧水完全挥发，冷却后用蒸馏水定容至
250 mL，过滤，滤液置棕色瓶中避光储存。临用前
用水稀释 5 倍，摇匀，即得。
2. 4 显色条件的确定
2. 4. 1 最大吸收波长的确定 精密量取上述喜
马拉雅紫茉莉药材提取液和对照品溶液各
1. 0 mL，分置 10 mL 容量瓶中，各加水至 2 mL，加
FC 试剂 2 mL，摇匀，静置 4 ～ 5 min，加 7. 5%
Na2CO3 溶液 2 mL，加水至刻度，摇匀，置于室温
反应 15 min 后，同时作空白，在波长为 500 ～
900 nm可见光区扫描，绘制吸收曲线。结果对照
品溶液和供试品溶液在 767 nm 处均有最大吸收
(图 1)，因此，选择测定波长为 767 nm。
图 1 对照品溶液和供试品溶液紫外吸收图谱
注:A. 对照品溶液，B. 供试品溶液
2. 4. 2 7. 5% Na2CO3 溶液最佳用量的确定 精
密量取 1. 0 mL 上述喜马拉雅紫茉莉提取液 5 份，
分置于 10 mL 容量瓶中，加水至 2 mL，加 FC 试剂
2 mL，摇匀，静置 4 ～ 5 min，分别加入 7. 5%
Na2CO3 溶液 1、2、3、4、5 mL，加蒸馏水至刻度，摇
匀，置于室温反应 60 min后于 767 nm 波长下测定
吸光度，根据吸光度确定 7. 5% Na2CO3 溶液的最
佳用量。由图 2 可知，当 7. 5% Na2CO3 溶液加入
量为 3 mL 时，吸光度最大。
2. 4. 3 FC 试剂最佳用量的确定 精密量取
1. 0 mL上述喜马拉雅紫茉莉提取液 5 份，分置于
10 mL 容量瓶中，加水至 2 mL，分别加入 FC 试剂
0. 5、1、1. 5、2、2. 5 mL，摇匀，静置 4 ～ 5 min，加入
7. 5% Na2CO3 溶液 3 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，
置于室温反应 60 min 后于 767 nm 波长下测定吸
光度，根据吸光度确定 FC 试剂的最佳用量。由图
3 可知，当 FC 试剂的加入量为 2 mL 时，吸光度最
大，故确定 FC 试剂的最佳用量为 2 mL。
图 2 7. 5% Na2CO3 溶液加入量与吸光度的关系
图 3 FC 试剂用量与吸光度的关系
2. 4. 4 最佳反应时间的确定 精密量取 1. 0 mL
上述喜马拉雅紫茉莉提取液 7 份，分置于 10 mL
容量瓶中，加水至 2 mL，加入 FC 试剂 2. 0 mL，摇
匀，静置 4 ～ 5 min，加入 7. 5% Na2CO3 溶液 3 mL，
加蒸馏水至刻度，摇匀，置于室温反应 10、20、30、
40、50、60、70 min 后，于 767 nm 波长下测定室温
下吸光度随时间的变化，确定最佳反应时间。由
图 4 可知，供试品溶液在室温反应 60 min 后吸光
度趋于稳定，故确定反应时间为 60 min。
综上所述，最佳显色反应条件:FC 试剂的加
入量为 2 mL，7. 5% Na2CO3 溶液加入量为3 mL，
常温反应 60 min，测定波长 767 nm。
2. 5 方法学验证
2. 5. 1 标准曲线的绘制 取没食子酸对照品储
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备液稀释成34. 8 μg /mL的溶液，分别精密量取
0. 5、1、1. 5、2、2. 5、3 mL，分置 10 mL 量瓶中，加水
至 3 mL，加入 FC 试剂 2. 0 mL，摇匀，静置 4 ～
5 min，再加入 7. 5% Na2CO3 溶液 3 mL，用水定容
至刻度，摇匀，室温放置 60 min，随行空白，在
767 nm处测定吸光度。以没食子酸标准溶液的浓
度(C)为横坐标、吸光度值(A)为纵坐标，绘制标
准曲线，得线性回归方程为 A = 0. 109 4 C +
0. 008 9，r = 0. 999 5，结果表明没食子酸在浓度
1. 74 ～ 10. 44 μg /mL 的范围内与吸光度值呈良好
的线性关系。
图 4 显色时间与吸光度的关系
2. 5. 2 精密度试验 取同一份供试品溶液，测定
吸收度值，平均值为 0. 656 6，ＲSD = 0. 07%，表明
本法精密度较好。
2. 5. 3 重复性试验 取同一样品 6 份，每份约
1. 0 g，精密称定，按“2. 1”项下的方法制备供试品
提取液。精密吸取提取液 1 mL，按“2. 5. 1”项下
测定方法测定吸光度。结果 ＲSD 为 0. 86%(n =
6)，表明本法重现性良好。
2. 5. 4 加样回收率试验 精密吸取已知总多酚
含量的样品溶液 6 份，每份 0. 5 mL，分置 10 mL 量
瓶中，再精密加入没食子酸标准溶液 1. 0 mL，按
“2. 5. 1”项下测定方法测定吸光度，计算加样回收
率。结果平均加样回收率为 98. 57%，ＲSD 为
1. 31%。见表 1。
2. 5. 5 喜马拉雅紫茉莉样品中总多酚的含量测
定 取过 100 目筛的供试药材 1 g，共 6 份，精密称
定，按“2. 1”项下的方法制备供试品提取液。精密
吸取提取液 1 mL，按“2. 5. 1”项下测定方法测定
吸光度，并根据回归方程计算喜马拉雅紫茉莉总
多酚的含量。结果，该法测得样品平均含量为
8. 946 mg /g，ＲSD 为 1. 16%。见表 2。
表 1 加样回收率试验结果
样品含量
(μg)
加入对照品
量(μg)
实测量
(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
27． 22 34． 80 61． 35 98． 07
27． 08 34． 80 60． 80 96． 91
27． 25 34． 80 61． 25 97． 72 98． 57 1． 31
26． 30 34． 80 61． 17 100． 20
27． 04 34． 80 61． 35 98． 59
26． 75 34． 80 61． 54 99． 95
表 2 样品中总多酚含量测定结果
编号 吸收值
样品含量
(mg /g)
样品平均
含量(mg /g)
ＲSD
(%)
1 0． 609 0 9． 013
2 0． 597 0 8． 880
3 0． 608 4 8． 996 8． 946 1． 16
4 0． 594 0 9． 096
5 0． 593 9 8． 845
6 0． 587 8 8． 848
3 讨论
目前常用的多酚类物质含量测定的方法有高
锰酸钾法、酒石酸亚铁比色法、原子吸收法、紫外
分光光度法、福林酚比色法等［4-5］，相比较而言，福
林酚法操作简单，重现性好。但福林酚法目前尚
无统一的实验条件，文献报道各种植物提取物的
测定条件，例如检测波长、加入福林酚的量、缓冲
盐碳酸钠的浓度和量、反应体系体积、反应时间及
温度等都不尽相同。本文在参考文献［6-11］的基础
上，建立了改良的 Folin-Ciocalteu 比色法，采用该
方法测定喜马拉雅紫茉莉总多酚的最佳条件为:
FC 试剂 2 mL，7. 5% Na2CO3 溶液 3 mL，常温反
应 60 min，测定波长 767 nm。平均回收率为
98. 57%(ＲSD = 1. 31%)，测得喜马拉雅紫茉莉总
多酚平均含量为 8. 946 mg /g。结果表明，该方法
操作简便、快捷、稳定，适用于喜马拉雅紫茉莉总
多酚含量的测定。本实验曾使用绿原酸作为对照
品，但在波长 400 ～ 900 nm 进行全波长扫描时，对
照品的最大吸收波长是 782 nm，而样品是769 nm，
两者相差 13 nm。以没食子酸为对照品，两者的最
大吸收波长均为 767 nm，故以没食子酸作为对照
品。
在样品提取实验中，笔者考察了超声和回流
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两种提取方式，结果样品分别超声、回流提取
30 min后含量相差无几，考虑到超声提取方法操作
简单，故选择超声提取方法。笔者还考察了不同
的乙醇浓度(30%、50%、70%、90%)对总多酚提
取效果的影响，结果表明用 70%乙醇提取，总多酚
含量较高。
综上所述，本文所建立的喜马拉雅紫茉莉总
多酚的含量测定方法，将为喜马拉雅紫茉莉的进
一步研究工作提供科学依据。
参考文献:
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收稿日期:2015 － 01 － 26
作者单位:1. 湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室，湖
北 十堰 442000;2. 湖北医药学院药学院，湖北 十堰 442000
基金项目:湖北省教育厅项目(B2015487);湖北省 2011 协同
创新中心基金(4);湖北省自然科学基金面上项目(2014CFB642)
* 通信作者
DOI:10． 14053 / j． cnki． ppcr． 201509019
HPLC法测定补肾化瘀浸膏中毛蕊花糖苷的含量
王 娟1，2，汪选斌1，2，李洪亮1，2，欧阳露1，2*
［摘 要］ 目的 建立补肾化瘀浸膏中毛蕊花糖苷的 HPLC 含量测定方法。方法 采用 ODS Phenomenex
Gemini C18柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)，以乙腈 － 0. 1%醋酸溶液(16∶ 84)为流动相，检测波长:334 nm，流速:
1. 0 mL /min，柱温:30 ℃。结果 毛蕊花糖苷进样量在 0. 015 ～ 0. 300 μg 之间线性关系良好。回归方程 Y =
16 763 X － 7 948. 9，Ｒ =0. 999 6;平均加样回收率为 98. 24%，ＲSD 为 1. 34%(n = 6)。结论 本方法操作简便，测
定结果准确，重复性好，可作为补肾化瘀浸膏的质量控制方法。
［关键词］ 高效液相色谱法;补肾化瘀浸膏;毛蕊花糖苷
Determination of acteoside in Bushenhuayu extracts by HPLC WANG Juan1，2，WANG Xu-
an-bin1，2，LI Hong-liang1，2，OUYANG Lu1，2* (1. Laboratory of Chinese Herbal Pharmacology，Ｒenmin Hospital，Hubei
University of Medicine，Shiyan 442000，China;2. School of Pharmacy，Hubei University of Medicine，Shiyan 442000，
China)
［Abstract］ Objective To establish a method for determination of acteoside in Bushenhuayu extracts by
HPLC. Methods HPLC was conducted at a column temperature of 30 ℃ with a column of ODS Phenomenex Gemini
C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)，the mobile phase consisted of acetonitrile-0. 1% acetic acid (16 ∶ 84 V /V) ，wave
length was set at 334 nm and the flow rate was 1. 0 mL /min. Ｒesults There was a good linear ranging from 0. 015 ～
0. 300 μg of acteoside. The curve formulation was Y = 16 763 X － 7 948. 9，Ｒ = 0. 999 6，with an average recovery of
98. 24% (ＲSD = 1. 34%，n = 6). Conclusion The method might be one of the good quality criterion for Bushenhuayu
extract because of its simple，accurate and recovery property.
Key words:HPLC;Bushenhuayu extracts;Acteoside
0 引言
补肾化瘀浸膏由淫羊藿、骨碎补、熟地、当归、
地鳖虫等五味中药制成，前期动物实验研究证实，
该方能够有效调节骨代谢，改变骨吸收大于骨形
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