全 文 ：［收稿日期］ 20121107(016)
［基金项目］ 新疆维吾尔自治区科技计划项目(201033126) ;
国家自然科学基金(地区基金)项目(81060268)
［第一作者］ 孙晓伟，在读硕士，从事心血管药理学研究，Tel:
18699156430，E-mail:36156754@ qq． com
［通讯作者］ * 艾尼瓦尔·吾买尔，教授，博士生导师，从事心
血管药理学研究，Tel:0991-4362421，E-mail:
anwar． umar@ 126． com
榅桲叶和果实中总黄酮提取工艺优选
孙晓伟1，艾尼瓦尔·吾买尔1* ，周文婷1，刘宏炳2，田树革2
( 1. 新疆医科大学基础医学院，乌鲁木齐 830011; 2. 新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830011)
［摘要］ 目的:优选新疆榅桲叶与果实中总黄酮的提取工艺。方法:以总黄酮含量为指标，采用正交试验考察加醇量、超
声提取时间、超声功率、乙醇体积分数 4 个因素对提取工艺的影响。结果:榅桲叶和果实中总黄酮最佳提取工艺均为
A3B3C3D1，即加 30 倍量 60%乙醇超声提取 40 min，超声功率 80%。叶中总黄酮含量较果实中高。结论:优选的总黄酮提取工
艺稳定可行，为新疆医药的开发提供实验依据。
［关键词］ 榅桲;总黄酮;正交试验;提取工艺
［中图分类号］ R283． 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)04-0068-03
Optimization of Extraction Technology for Total Flavonoids from
Leaves and Fruit of Cydonia oblonga
SUN Xiao-wei1，Umar Anwar1* ，ZHOU Wen-ting1，LIU Hong-bing2，TIAN Shu-ge2
(1. Basic Medical College，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China;
2. Traditional Chinese Medicine College，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China)
［Abstract］ Objective:To optimize extraction technology of total flavonoids from leaves and fruit of
Cydonia oblonga． Method:With the content of total flavonoids as index，orthogonal design was used to investigate
influence of four factors on extraction technology， including the concentration of ethanol， ultrasonic time，
ultrasonic power and ethanol amount． Result:Optimum extraction technologies of leaves and fruit were A3B3C3D1，
ultrasonic extracted 40 min with 30 times the amount of 60% ethanol，ultrasonic power 80%，the content of total
flavonoids in leaves was higher than fruit． Conclusion:This optimized technology was stable and feasible，and it
could provide experimental basis for development of Chinese medicine in Xinjiang．
［Key words］ Cydonia oblonga;total flavonoids;orthogonal test;extraction technology
榅桲别名木梨、土木瓜、比也，世界各国均有分
布，国内新疆、陕西分布较多［1-2］。在新疆，其常用
于生食、制作抓饭、熬制果酱等。据记载，榅桲果、
叶、根、枝等部分均可入药，对心血管等疾病有一定
疗效，具有广泛的医药用途。近年来，将榅桲果实和
叶子的提取物进行动物实验时发现，其具有明显抑
制血栓形成、抗凝血和纤溶作用［3］。目前，榅桲总
黄酮的提取工艺研究较少，仅有少部分研究榅桲果
实及榅桲子，尚无榅桲叶提取工艺的报道，造成了资
源的极大浪费。本实验采用正交试验法首次探讨超
声提取对新疆榅桲叶与果实中总黄酮含量的影响，
优化榅桲总黄酮的提取工艺，为榅桲叶资源的合理
利用提供实验依据。
1 材料
XS205DU 型分析天平 (梅特勒 METTLER
TOLEDO) ，GBC Cintra-40 型紫外可见分光光度计
(澳大利亚 GBC 科学仪器公司) ，FW177 型高速万
能粉碎机(北京市永光明医疗仪器厂) ，TDL-5A 型
离心机(上海菲恰尔分析仪器有限公司)。
芦丁对照品(中国食品药品检定研究院，批号
·86·
第 19 卷第 4 期
2013 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 4
Feb．，2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.04.036
2010-A0103) ，试剂均为分析纯;榅桲由新疆医科大
学药学院天药 /生药学教研室帕丽达·阿不力孜教
授鉴定为蔷薇科榅桲属植物 Cydonia oblonga Mill．
的叶和果实。
2 方法与结果
2. 1 总黄酮的含量测定［4-6］
2. 1. 1 对照品溶液的制备 精密称取干燥恒重的
芦丁对照品 10. 14 mg，置 50 mL 量瓶中，加 60%乙
醇适量使溶解，待凉后定容至刻度，即得。
2. 1. 2 标准曲线的绘制 采用吸收光谱法测定总
黄酮含量，通过于 200 ～ 800 nm进行全波长扫描，确
定检查波长 504 nm。准确吸取对照品溶液 0. 0，
1. 0，2. 0，3. 0，4. 0，5. 0，6. 0 mL，分别置于 25 mL 量
瓶中，加 60%乙醇至 6 mL，加 5%亚硝酸钠溶液 1
mL，使混匀，放置 6 min，加 10%硝酸铝溶液 1 mL，
摇匀，放置 6 min，加 4%氢氧化钠溶液 10 mL，用乙
醇定容至刻度，摇匀，放置 15 min，以相应试剂为空
白，于 504 nm 测定吸光度(A) ，得回归方程 A =
0. 013C + 0. 0015(R2 = 0. 999 4) ，线性范围 0 ～
1. 217 mg。
2. 1. 3 供试品溶液的制备 分别取新疆榅桲叶子
和果实，用水洗净，55 ℃鼓风干燥 48 h，冷却后粉
碎，过 60 目筛，准确称取粉末各 15 g，分别采用索式
提取器石油醚脱脂 2 h，药渣挥干溶剂，真空干燥，备
用。每次称取 1. 000 g，用于正交试验，提取温度 60
℃，提取 1 次，抽滤，滤液于 3 000 r·min －1离心 5
min，去除残留色素等干扰，抽滤，取上清液，测定总
黄酮含量。
2. 1. 4 稳定性试验 准确称取榅桲果实粉末 1. 0
g，按 2. 1. 3 项下方法制备供试品溶液，精密吸取 1
mL，按 2. 1. 2 项下方法于 504 nm处测定 A，每隔 20
min测定 1 次。结果表明供试品溶液显色后 2 h 内
稳定，RSD 0. 98%。
2. 1. 5 精密度试验 准确称取榅桲果实粉末 1. 0
g，按 2. 1. 3 项下方法制备供试品溶液，精密吸取 1
mL，按 2. 1. 2 项下自“加 60%乙醇至 6 mL”起操作，
连续测定 6 次，RSD 0. 11%，说明仪器精密度良好。
2. 1. 6 重复性试验 取同一批榅桲果实粉末样品，
按 2. 1. 3 项下方法平行制备 6 份供试品溶液，按
2. 1. 2 项下方法于 504 nm 处测定 A。结果 RSD
0. 54%，表明该方法重复性良好。
2. 1. 7 加样回收率试验 精密量取已知总黄酮含
量的样品液 6 份，各加入 芦 丁 对 照 品 溶 液
(0. 202 8 g·L －1)0. 5 mL，按 2. 1. 3 项下方法制备供
试品溶液，在 504 nm 处测定 A，计算回收率。结果
平均回收率 99. 69%，RSD 1. 06%。
2. 2 正交试验 采用 L9(3
4)正交试验对影响乙醇
超声提取的主要因素加醇量、超声时间、超声功率、
乙醇体积分数进行考察，每个因素选择 3 个水平，以
总黄酮含量为指标，确定最佳提取工艺，因素水平见
表 1，试验安排及结果见表 2，方差分析见表 3。
表 1 新疆榅桲叶与果实中总黄酮的提取
工艺正交试验因素水平
水平
A
加醇量
/mL
B
超声时间
/min
C
超声功率
/%
D
乙醇体积
分数 /%
1 10 20 60 60
2 20 30 70 70
3 30 40 80 80
表 2 新疆榅桲叶与果实中总黄酮的提取
工艺正交试验安排
No． A B C D
叶中总黄酮
提取量
/mg·g － 1
果实中总
黄酮提取量
/mg·g － 1
1 1 1 1 1 41. 86 11. 98
2 1 2 2 2 47. 60 13. 61
3 1 3 3 3 52. 10 11. 72
4 2 1 2 3 52. 75 13. 32
5 2 2 3 1 70. 29 18. 12
6 2 3 1 2 64. 23 16. 75
7 3 1 3 2 63. 39 19. 10
8 3 2 1 3 55. 78 15. 66
9 3 3 2 1 73. 40 21. 61
叶 K1 47. 19 52. 67 53. 96 61. 85
K2 62. 42 57. 89 57. 92 58. 41
K3 64. 19 63. 24 61. 93 53. 54
R 17. 00 10. 58 7. 97 8. 31
果实 K1 12. 44 14. 80 14. 80 17. 24
K2 16. 06 15. 80 16. 18 16. 49
K3 18. 79 16. 69 16. 31 13. 57
R 6. 35 1. 89 1. 52 3. 67
由以上结果可知，叶中总黄酮含量明显高于果
实。由叶的直观分析可知，各因素的主次顺序 A ＞
B ＞ D ＞ C;由果实的极差可知，各因素主次顺序为
A ＞ D ＞ B ＞ C。分别以极差最小的因素为误差项进
行方差分析，表明各因素对提取工艺均无显著性差
异。确定榅桲叶和果实的最佳提取工艺均为
·96·
孙晓伟，等:榅桲叶和果实中总黄酮提取工艺优选
表 3 总黄酮提取量方差分析
类别 误差来源 SS f F P
叶 A 524. 39 2 5. 50 ＞ 0. 05
B 167. 81 2 1. 76 ＞ 0. 05
C(误差) 95. 28 2 1. 00
D 104. 51 2 1. 10 ＞ 0. 05
果实 A 60. 95 2 14. 40 ＞ 0. 05
B 5. 38 2 1. 27 ＞ 0. 05
C(误差) 4. 23 2 1. 00
D 22. 56 2 5. 33 ＞ 0. 05
注:F0. 05(2，2)= 19. 00。
A3B3C3D1，即加 30 倍量 60%乙醇超声提取 40 min，
超声功率 80%。
2. 3 验证试验［7］ 精密称取榅桲叶与果实各 1. 00
g，按优选的提取工艺进行 3 次验证试验，测得总黄
酮平均提取量分别为 74. 24，21. 81 mg·g －1。表明该
工艺稳定可行。
3 讨论
本实验通过索氏提取预处理以除去干扰物质，
超声后又经离心除去残存干扰物质，使总黄酮含量
测定更加可靠;通过正交试验筛选出榅桲叶和果实
总黄酮的最佳提取工艺一致，但影响因素的主次顺
序却不同，说明各因素对提取工艺的影响不同。新
疆榅桲叶中总黄酮的含量是果实的 3. 4 倍。说明采
用叶作为原料提取总黄酮更具有开发价值，效率更
高，同时可节省成本，更适合于工业化生产。本实验
收集的样品均采用 1 次提取，预试验采用单因素试
验考察提取次数，发现提取 3 次效果更显著。
［参考文献］
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木齐:新疆科技卫生出版社，1993:233．
［2］ 王济宪．新疆的稀有果类———榅桲［J］．特种经济动植
物，2000，19(5) :30．
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栓作用的实验观察［J］．中成药，2011，33(8) :1407．
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(2) :65．
［责任编辑 仝燕
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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第 19 卷第 4 期
2013 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 4
Feb．，2013