全 文 ：应用荧光染料 DAI P对满江红鱼腥藻分化
细胞 DA N含 t的显微分光光度测 t
白 克智 李 日 新 .
(中国科学院植物研究所 , 北京 )
荧光染料 D PA I ( 4 ` 一 6一二眯基一 2 一苯基叫嗓 )能与各种来源的 富于 腺膘吟一胸 腺 哈 吮 的
D N A 结合 . 它具有专一性强 、 灵敏度高和使用方便的特点 , 近年已应用于多种原核和真核生
物的细胞内和胞外 D N A 的检测 , 但在蓝藻中尚未应用 lt, ” . 本文报告经 DPA I 染色的满江
红鱼腥藻的不同类型细胞的 D N A 含量的差异 .
材 料 和 方 法
满江红鱼腥藻 ( A二如。 。 。 or al e) 的抱子的培养和分离方法见先前的报道囚 .
芽在 BG 一 1 无氮培养基 , 10 0 0 勒克斯光强的日光灯 , 26 土 2℃ 和通气条件下进行 .
抱子的发
在 本 试
验条件下抱子接种 2斗小时后两个子细胞从抱子中生出 . 接种后 36 小时发育至 4 一 6 个 细
胞 ,在藻丝的一端出现一个原异形胞 . 这些分化的细胞用作本试验的材料 .
荧光染料 D A PI 由 Br ow n 大学的 c ol len an 博士惠赠 ,本试验也采用了她的染色方法 ,但
略去其固定处理的手续山 . 将藻样品放置 s lm 试管中 , 在 cM n va in e 氏 p H 4 . 4 的媒染液中浸
抱 , 分钟 , 然后以 .0 , pmP D A IP 在室温下染色 3 小时 , 封片观察 . 对照则以 D N A 酶 ( 0
.
25
M
, p H .6 0 的 T r i , 缓冲液 )在 3 7℃ 保温 4 小时然后染色 .
本试验应用 L改 z一 M P v- 2 型显微分光光度计 , 1 50 w 汞灯为激发光光源 , 激发光的峰值
为 3 5 一 4 25 nm . 选用 斗0 一50 0nm 的发射光滤光片以消除藻细胞的红色自发荧光 . 每一处
理至少测量 20 个细胞 .
结 果 和 讨 论
满江红鱼腥藻的各种细胞的 D N A 的相对含量列于表 1 . 结果表明发芽的抱子 (两个子
细胞阶段 ) D N A 的含量比休眠抱子高 . 原异形胞的分化则伴随着 D N A 的减少 , 而在成熟
的异形胞则检测不 出 D N A 的存在 . 异形胞是结构和功能上都非常特化 了 的 细 胞 . 它 的
D N A 的缺失可能是与其不存在光系统 n , 固氮酶的出现 , 氧保护系统的形成以及繁殖能力的
丧失相协调的 .
考虑到异形胞的厚壁可能成为染料透人细胞的障碍 , 为此做了下面补充试验 : 将分离的
纯异形胞用超声波或经 X 一 rP se : 压榨破碎后再用前述的方法染色 . 其结果也证实了异形胞中
确无 D N A 存在 .
本文 19 8 2 年 12 月 2 4 日收到 .
. 现在南京大学生物系 .
第 ” 期 科 学 通 报
表 1满江红鱼腹旅各种分化细饱中 D N A的含 t (任惫单位 )
细 饱 抱 子 营 养 胞 营 养 饱 原异形胞 异 形 胞
(两子细胞阶段 ) (成 熟 )
D A I P巧 3。 0 22 4。 92 68 。 0 53. 0 0含 t
F吃 g最早注意到柱胞鱼腥藻的成熟异形胞中没有 F浏 g e n试剂着色物质存在 [’ ]. 但其后
Ud
。 和 s awd a。 提出 F l eu g e n试剂不适合用于蓝藻 D N A的测量 [’ 1. w证 x o也曾猜想异形胞
中可能缺少 D N A, 是根据在超微结构的观察中未见到纤丝 ( ifb r击 )团 . 本文首次借助 D PA I
染色法证实了异形胞中确无 D N人 存在 .
荧光染料叮吮橙曾用于一种筒胞藻 D N A 的测 t , 但它并非是 D N A 的专一染料 , 而且
使用的浓度也较 D PA I 高得多 6[] , 本文报道的结果显示 DAP I 是测定蓝藻 D N A 的更合适
的染料 .
本试脸省略了染色前的固定手续 , 因为预备试验中未发现固定与否对结果有明显的 影
响 .
参 考 文 献
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科 学 通 报 1 9只飞 年