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当代医学　2013年5月第19卷第15期总第314期　Contemporary Medicine, May. 2013,Vol.19 No.15 Issue No.314
度，暂时对医生没有约束性，光凭临床药学人员的孤军奋战难成
大器。
2.3 医院还没有形成药师参与临床用药的大气候，领导重
视力度不够，临床药师自我推荐意识不强。很多临床医生包括医
院部分领导对药师下临床不理解，不了解药师下临床的目的，很
多时候是为了应付上级的检查而设，而临床药师本人也是因为医
院重视不够，得不到领导的支持，从而使工作难以开展，因此，平
时也应付了事。目前，国家还未出台相应法律法规，确认临床药师
相应的法律地位，当工作中遇到医生不合理用药或是提出一些用
药建议被医生的一句“后果你付得起责任吗？”就把一切打住，因
此即使你有文献及相关的用药基本原则支持，但医生不认可，药
师很多时候也是无奈，毕竟药师没有处方权。目前，我院临床的会
诊、病例讨论和疑难、危重患者的医疗救治需要临床药师参与的
诊治活动几乎没有药师的身影。
2.4 临床药师自身知识结构有所欠缺。目前的临床药师，
只是药师经过短期的培训而转行，专业上与医学专业存在较大差
别，缺乏一定的医学基础知识，因此，这是一个渐进的培训过程。
否则只掌握药物方面的知识，而对临床医学知识，如基本的诊断、
每种疾病的基本症状等等不了解，使其在临床用药疗效跟踪过程
中处于被动地位。可见，临床药师不仅仅要掌握药学专业知识，还
要掌握足够的诊断学、治疗学、检验学、微生物学及免疫学等知
识，只有掌握了相应的临床知识，才能针对具体病例提出合理的
用药建议，并能深入地与医生和患者进行沟通。医院中不同的科
室应由相对固定的药师负责，毕竟人的精力有限，不可能对所有
的临床知识都精通，只有对某一领域全面深入学习，才能对临床
出现的各种病情突发事件得心应手，做到游刃有余。
目前，县级医院临床药师的处境也相似,临床药师的出现虽
然不同程度地对临床的用药产生一定的影响,但还没有形成气候。
（1）首先要配备称职的药师，既要掌握扎实的药学专业知识，又要
熟悉相关的医学知识。（2）必须培养良好的沟通技能。对于临床存
在的不同问题，要掌握不同的处理技巧，这一点对于做好临床药师
的工作非常重要；具备较强的书面总结能力。因为临床药师工作最
基本的要求就是“做你所记的，记你所做的”，需要把在工作中发现
的问题、解决的问题及时进行归纳、总结、升华，进一步研究分析。
（3）临床药师的成长需要院领导的高度重视，如肯定临床药师的地
位，提供不定时的进修培训机会，引进人才。（4）政府应从法律、法
规角度上对临床药师及临床药学工作有明确规定[2]，提高广大民众
对药学服务特别是药学监护的认可。临床药学服务使药师从幕后
走到台前，直接面对患者，不仅要参与药物治疗决策的权力，也要
承担与药物治疗有关的法律和社会责任。
参考文献
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房，2004,15(10):580.
野鸦椿水提物对大鼠慢性肝纤维化的影响
刘迪栋 文旭 汤勇 张浩然 周常娥 高辉
[摘要] 目的 研究野鸦椿水提物对慢性肝纤维化的作用及机制。方法 将 50 只大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组及野鸦椿高和低剂
量组，除正常组外灌胃给予CCl4，2 次/周，共 8 周，造成慢性肝纤维化模型。第 4 周开始秋水仙碱组给秋水仙碱 0.1 mg/kg，野鸦椿高、低剂量组分别给
野鸦椿水提物 1 mL/kg和 0.2 mL/kg，连续 5 周，模型组及对照组给等体积生理盐水。给药结束后处死动物取血、分离血清，检测HA、LN、PⅢP及TGF-β1、
TNF-α含量。结果 野鸦椿高、低剂量组HA、LN、PⅢP及TGF-β1、TNF-α均明显低于模型组，高剂量组HA、LN浓度与秋水仙碱组无显著性差异，PⅢP则高于
秋水仙碱组，而低于低剂量组；野鸦椿高剂量组TGF-β1 浓度与秋水仙碱组无显著性差异，而低剂量组则高于秋水仙碱组，野鸦椿高剂量组则显著低于
低剂量组；野鸦椿高、低剂量组TNF-α浓度均高于秋水仙碱组，野鸦椿高剂量组则显著低于低剂量组。结论 野鸦椿水提物具有抗慢性肝纤维化的作
用，并存在一定的量效关系，抗肝纤维化的作用可能与其抑制TGF-β1 升高有关。
[关键词] 野鸦椿水提物；肝纤维化；TGF-β1；TNF-α
[Abstract] Objective To study the aqueous extract of Euscaphis effect and mechanism of chronic liver fibrosis. Methods 50 rats were
randomly divided into normal group, model group, colchicine group and Euscaphis high-and low-dose group, in addition to the normal group, orally
given CCl4, 2 times / week for 8 weeks, resulting in chronic hepatic fi brosismodel. 4 th week, the colchicine group to colchicine 0.1 mg/kg, Euscaphis
high and low dose groups respectively to extract 1 mL/kg and 0.2 mL/kg to Euscaphis water for fi ve consecutive weeks, the model group and control
The group was given an equal volume of saline. After administration, the animals were sacrifi ced blood, serum was separated, detection of HA, LN,
P III P and TGF-β1, TNF-α content. Results The wild crow Tsubaki high, the low-dose group HA, LN, P III P and TGF-β1, TNF-α were signifi cantly
lower than the model group, no signifi cant difference for the high-dose group HA, LN concentration with colchicine group, P III P is higher than
autumn Narcissus alkali group, but lower than the low-dose group; Euscaphis high dose group TGF-β1 concentration of colchicine group was no
doi:10.3969/j.issn.1009-4393.2013.15.017
基金项目：吉首大学大学生研究性学习和创新性实验项目 （JSU-CX-2011-37）
作者单位：湖南 416000 湖南省吉首大学医学院 （刘迪栋 文旭 汤勇 张浩然 周常娥 高辉）
通讯作者：高辉 E-mail：gaohui9512@163.com
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signifi cant difference between the low-dose group than colchicine group, Euscaphis high dose groupsignifi cantly lower than the low-dose group;
Euscaphis, TNF-α concentration of the low-dose group were higher than the colchicine group, Euscaphis high dose group was signifi cantly lower than
the low-dose group. Conclusion Euscaphis aqueous extract of the role of anti-chronic liver fi brosis, and there is a dose-effect relationship, and anti-
hepatic fi brosis may be related to inhibition of TGF-β1 elevated relevant.
[Key words] Water extracts from Euscaphis Japonica; Hepatic fi brosis; TGF-β1; TNF-α
肝纤维化是慢性肝病的共同病理学改变，也是各种慢性肝
脏疾病向肝硬化发展的必经阶段。近年研究表明，肝纤维化是一
种可逆的病理阶段，只要在肝纤维化阶段进行合理治疗，可以逆
转肝纤维化的进程，从而达到缓解甚至治愈。野鸦椿(Euscaphis
Japonica)为省沽油科野鸦椿属植物，是一种落叶小乔木，分布于
我国的暖温带地区，果实主要含异懈皮苷、矢车菊素-3-木糖-葡
萄糖苷、紫云英甙、山柰酚-3-葡萄糖苷及槲皮素-3-葡萄糖苷
等。
湘西地区使用其果实治疗肝炎、肝硬化历史悠久，取得了一
定的疗效。目前，关于野鸦椿的肝纤维化保护作用尚未见报道。本
实验主要观察野鸦椿对四氯化碳(CC14)所致大鼠慢性肝纤维化
的肝保护作用，并初步探讨其作用机制，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 材料与试剂 SD雄性大鼠 50 只，体重(150±10)g，由
吉首大学动物中心提供。采集自湖南吉首地区的野鸦椿成熟果
实，制成每毫升含生药 4 g的水提物。秋水仙碱（昆明制药有限公
司，批号：070732）。CC14 分析纯（北京化工厂，批号：20080209）。
透明质酸（批号：20090101）、层粘连蛋白（批号：20090108）、Ⅲ型
前胶原蛋白肽（批号：20090105）放免试剂盒，均购自上海海研
医学生物技术有限公司。大鼠转化生长因子-β1(transforming
growth factor-β1,TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(tumor
necrosis factor-α,TNF-α)ELISA试剂盒（武汉博士德公司）。
1.2 仪器与设备 TGL-16 G低温高速离心机（上海医用分
析仪器厂），GC-911 型γ放射免疫计数器（中国科技大学科技实
业总公司），EL301 型酶标仪（BIO-TEK公司，美国）。
1.3 方法
1.3.1 动物模型建立及药物处理 将实验大鼠随机分
成 5 组，每组 10 只，即正常组、模型组、秋水仙碱组以及野鸦椿
高、低剂量组。参考文献[1-2]造成大鼠肝纤维化模型，各组动物均
饮用 350 mg/L苯巴比妥溶液两周，随后模型组及各给药组灌
胃给予CCl4-橄榄油溶液（CCl4 与橄榄油的容积比为 1∶1），首
次每只大鼠给 0.08 mL，以后按 2 mL/kg给予，2 次/周，每周称
重 1 次，调整剂量，总计给CCl4-橄榄油溶液 8 周。正常组给等体
积橄榄油。
从给CCl4-橄榄油溶液第 4 周开始给药，秋水仙碱组给秋水仙
碱 0.1 mg/kg，野鸦椿高、低剂量组分别给野鸦椿水提物 1 mL/kg
和 0.2 mL/kg，以上药物使用时均用生理盐水稀释成 2 mL灌胃给
药，连续 5 周，模型组及对照组给等体积生理盐水。
1.3.2 指标检测 给药结束后各组大鼠腹主动脉取血，
离心取血清检查各项指标。放免法检查血清HA、LN、PⅢP，
TGF-β1 及TNF-α采用ELISA方法检查；肝组织病例采用HE
染色方法。
1.4 统计学方法 所有数据采用SPSS12.0 统计学软件进
行处理，结果以均数±标准差（x±s）表示，实验数据采用方差分
析，组建比较用q检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。
2 结果与分析
2.1 野鸦椿水提物对肝纤维化大鼠血清指标的影响 模
型组大鼠血清HA、LN及PⅢP浓度显著高于正常组，野鸦椿高、
低剂量组均明显低于模型组；野鸦椿高剂量组HA、LN浓度与秋
水仙碱组没有显著性差异，PⅢP则高于秋水仙碱组，而低剂量组
HA、LN及PⅢP均高于秋水仙碱组；组间比较野鸦椿高剂量组
HA、LN及PⅢP均显著低于低剂量组(见表 1)。
表 1 野鸦椿水提物对肝纤维化大鼠血清HA、LN及PⅢP的影响(x±s，n=10)
组别 HA(μg/L) LN(μg/L) PⅢP(μg/L)
正常组 84.2±12.86 23.49±4.93 17.43±2.16
模型组 330.36±47.07 c 49.76±8.54 c 39.82±4.35 c
秋水仙碱组 164.94±23.55 26.28±5.14 21.61±3.37
野鸦椿低剂量组 185.35±28.15 cfi 42.35±7.93 cfi 32.01±4.18 cfi
野鸦椿高剂量组 161.66±22.53 cfl 28.29±5.65 bfl 25.93±3.63 cfhl
注：b与正常组比较P＜0.01，c与正常组比较P＜0.01；f与模型组比较P＜0.01；h与
秋水仙碱组比较P＜0.05；i与秋水仙碱组比较P＜0.01；l与野鸦椿低剂量组比较P
＜0.01
2.2 野鸦椿水提物对肝纤维化大鼠血清TGF-β1 及
TNF-α的影响 模型组大鼠血清TGF-β1 及浓度显著高于正常
组，野鸦椿高、低剂量组两者浓度明显低于模型组；野鸦椿高剂量
组TGF-β1 浓度与秋水仙碱组没有显著性差异，而低剂量组则高
于秋水仙碱组，野鸦椿高剂量组则显著低于低剂量组；野鸦椿高、
低剂量组TNF-α浓度均高于秋水仙碱组，野鸦椿高剂量组则显著
低于低剂量组(见表 2)。
表 2 野鸦椿水提物对大鼠血清TGF-β1 及TNF-α的影响(x±s，n=10)
组别 TGF-β1(pg/L) TNF-α(μg/L)
正常组 15.47±4.64 30.69±6.66
模型组 39.43±10.32 c 199.53±32.84 c
秋水仙碱组 18.23±7.53 77.79±18.65
野鸦椿低剂量组 28.68±9.61 cfi 122.62±25.82 cfi
野鸦椿高剂量组 20.57±7.17 cfl 85.81±18.49 cfhl
注：c与正常组比较P＜0.01；f与模型组比较P＜0.01；h与秋水仙碱组比较P
＜0.05；i与秋水仙碱组比较P＜0.01；l与野鸦椿低剂量组比较P＜0.01
3 讨论
HA、LN、PⅢP是反映肝纤维化较为敏感和特异的指标，3 项
联用更为客观、可靠，并可反应肝纤维化的不同阶段[3]。野鸦椿水
提物高、低剂量组均可显著降低大鼠血清HA、LN、PⅢP的水平，
且高剂量组三者水平均低于低剂量组，显示出一定的剂量依赖
性。病理切片也显示野鸦椿水提物高、低剂量组肝细胞的炎症水
肿、胶原纤维沉积等情况要好于模型组，这些都说明野鸦椿水提
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物具有良好的抗肝纤维化作用。其抗肝纤维化的作用可能与抑制
TGF-β1 及TNF-α表达有关。
TGF-β1是目前己知的重要致肝纤维化的细胞因子之一[4-6]。
在肝脏中TGF-β1 来源于窦内皮细胞、Kupffer细胞及肝星状细
胞(hepatic stellate cell，HSC)。TGF-β1 在肝纤维化的起始和持
续发展中起关键作用，能够促进HSC的增殖和活化[7]，促进细胞外
基质(extracellular matrix，ECM)的合成并抑制其降解[8-10]，能预
示肝炎病情的进展，并可反映肝纤维化的程度。激活的HSC又可
分泌TGF-β1[9]，导致恶性循环，使肝纤维化不断进展。野鸦椿水
提物高、低剂量组均可显著降低大鼠血清TGF-β1 的水平，从而
抑制HSC等细胞的激活，使HSC合成ECM减少，并且也可能由于
TGF-β1 的减少而促进HSC等的凋亡，阻断肝纤维化的进程，而抑
制TGF-β1 的作用及促进HSC的凋亡是肝纤维化及肝硬化治疗的
重要途径之一[11-12]。
TNF-α主要由单核巨噬细胞、HSC及Kupffer细胞等产生，
对肝纤维化的启动及调控起重要作用[13-14]。不仅是重要的炎症介
质，还可促进肝内纤维母细胞增殖、胶原合成[15]，更重要的是可促进
HSC的活化、增殖和分泌ECM，同时也能促使活化的HSC自分泌多
种细胞因子，如白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、IL-1、表皮生
长因子(Epidermal Growth Factor，EGF)、内皮素-1(endothelin-1，
ET-1)、TGF等，还与其他细胞因子如TGF-β、血小板源生长因子
(platelet-derived growth factor，PDGF)、IL-1 等形成调节网络，
共同导致肝纤维化[16-17]。而野鸦椿水提物高、低剂量组均可显著抑
制大鼠血清TNF-α的升高，从而抑制炎症反应，抑制纤维母细胞
的增殖，减少胶原纤维合成，抑制HSC的激活，使HSC合成ECM及
TGF-β、PDGF、IL-1 减少，阻断肝纤维化的进程。野鸦椿水提物
可使肝纤维化大鼠TGF-β1 及TNF-α均降低，不但可使两者各自
致肝纤维化作用得到抑制，更减少了两者致肝纤维化的协同作用，
阻断肝纤维化形成的调节网络。
参考文献
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小鼠microRNA-21 慢病毒抑制载体的构建及鉴定
覃玉桃 刘艳丽 伍伟锋
[摘要] 目的 构建microRNA-21(miR-21)慢病毒抑制载体，为研究miR-21 在小鼠体内的功能及作用机制打下基础。方法 利用miR-21 前体并
将其克隆入LV3 pGLV-H1-GFP质粒中，经酶切及测序鉴定，利用脂质体将鉴定的阳性重组LV3 pGLV-H1-GFP-miR-21 抑制载体、PG-P1-VSVG和pCMV-
dR 3 个质粒转染到HEK-293 T 细胞，将所得病毒感染 293 T细胞，检测病毒滴度，并将制备的病毒颗粒感染乳鼠心肌细胞和尾静脉注射小鼠，检测miR-
21 在小鼠体内的表达。结果 酶切及测序结果证明成功构建了LV3 pGLV-H1-GFP-miR-21 重组质粒，并成功包装成慢病毒，病毒滴度为 2.4×109 TU/
ml，重组病毒成功感染心肌细胞，同时在Balb/c小鼠心脏有表达。结论 成功构建miR-21 慢病毒抑制载体，获得高效表达miR-21 的慢病毒颗粒，为miR-
21 的进一步研究奠定了基础。
[关键词] microRNA；miR-21 慢病毒抑制载体；绿色荧光蛋白
基金项目：国家自然科学基金 (81050020)
作者单位：广西 530021 广西医科大学第一附属医院放疗科 （覃玉桃） 广西医科大学第一附属医院心内科 （刘艳丽 伍伟锋）
通讯作者：刘艳丽 E-mail：gxlyl@126.com