全 文 ：第 26卷第 1期　 　　　　　　　　　　　　　　　　中南民族大学学报 (自然科学版 )　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol. 26 No. 1
2007年 3月　　　　　　　　　　 Journal of Sou th-Cent ral University for Nationali ties( Nat. Sci. Edi tion )　　　　　　　　　　 Mar. 2007
⒇
蛇葡萄根软膏质量标准
杨　柳　陈科力* 　叶丛进
(湖北中医学院 药学院 , 武汉 430065 )
摘　要　目的: 建立蛇葡萄根软膏的质量控制方法 .方法: 采用高效液相色谱法测定软膏中大黄素的含量 ,使用
Iner tsil ODS-35μm( 4. 6mm× 250mm )色谱柱 ;甲醇-0. 1%磷酸水溶液 ( 80∶ 20)为流动相 ;流速: 1. 0mL /min;柱温
35℃ ;检测波长为 254nm.薄层色谱检测软膏中的蛇葡萄根和虎杖 ,以没食子酸和大黄素作对照品 .结果: 大黄素在
0. 115 6～ 0. 578 0μg范围内线性关系良好 ,平均加样回收率为 98. 56% , RSD%为 1. 74% (n= 6) ;薄层色谱中供试品
与对照品相应位置上斑点清晰 ,阴性无干扰 . 结论: 该方法可用于蛇葡萄根软膏的质量控制 .
关键词　蛇葡萄根 ;软膏 ;大黄素 ;高效液相色谱法
中图分类号　 O657. 7+ . 2　文献标识码　 A　文章编号　 1672-4321( 2007) 01-0026-04
Experimental Study of Quality Criteria of Ampelopsis Sinica Ointment
Yang Liu　Chen Kel i　 Ye Congjin
Abstract　 To establish a quality contro l me thod fo r Ampelopsis sinica ointment. A HPLC m eth od was used to
determine the emodin in the ointment, Iner tsil ODS-3 5μm ( 4. 6mm× 250mm ) co lumn, methnol -0. 1% phospho ric
acid aqueous so lution ( 80∶ 20) a s mobile phase, flow rate at 1. 0 m L /min and detection w aveleng th at 254nm. The
Radix Ampelopsis Sinica and Rhizoma Polygoni Cuspidati we re tested by T LC method, gallic acid and emodin as
standa rd contr ol respectiv ely. Th e ca libration curv e was linear in the range of 0. 115 6～ 0. 578 0μg. The average
ra te of recovery was 98. 56% ( RSD% = 1. 74% , n= 6) . The cor respond spo ts in the ointment w ere clea r and no
inter ference in the nega tiv e contro l. The method could be used in qua lity cont rol fo r the ointment.
Keywords　 Ampelopsis sinica; ointm ent; Emodin; HPLC
Yang Liu　 Master′s Candidat e, Depar tment of Pha rmacy , Hubei Co llag e of T raditional Chinese Medicine, Wuhan
430065, China
　　蛇葡萄根为葡萄科植物蛇葡萄 Ampelopsis
sinica(Miq) . W. Wang等的根 , 长期以来民间广泛
用于治疗外伤及皮肤溃烂、风湿痹痛、疮疖等 ,是民
间一种常用的中草药 [1, 2 ] . 蛇葡萄根软膏是以蛇葡
萄根和虎杖为主药制成的软膏 ,具有清热解毒 ,祛腐
生肌 ,散瘀排脓等功效 [ 3] . 虎杖中含有大黄素等 [4 ] ,
蛇葡萄根含有没食子酸和儿茶素等 [ 5, 6] ,本文依据其
成分对该制剂质量控制方法进行了实验研究 .
1　材料、仪器与试剂
Agi lent 1100高效液相色谱仪 ,可变波长扫描
紫外检测器 ( VWD) ,四元梯度泵 ,带有化学工作站
数据处理系统 . A T-201电子分析天平 ( d =
0. 01 mg,瑞士 ) . 大黄素对照品 (供含量测定用 ,中
国药品生物制品检定所 ,批号 110756-200210) ;没食
子酸对照品 (供含量测定用 ,中国药品生物制品检定
所 ,批号 110831-9501) .甲醇 (分析纯 ,上海振兴 ) ,水
为双蒸水 .
2　方法和结果
2. 1　软膏中虎杖的 TLC鉴别
取蛇葡萄根软膏 10g ,置圆底烧瓶中 ,加甲醇
⒇ 收稿日期　 2006-12-10　* 通讯联系人　 陈科力 ( 1947-) ,男 ,教授 , E-mail: kelichen@ 126. com
作者简介　杨　柳 ( 1981-) ,女 ,硕士研究生 ,研究方向: 中药资源和质量 , E-mail: emily7259@ 163. com
基金项目　湖北省自然科学基金资助项目 ( 2001ABB169)
30mL, 80℃水浴中加热 2min,搅拌使溶解 ,再置冰
水浴中冷却 ,滤过 ,用甲醇 30m L重复提取 3次 ,合并
滤液 ,滤液作为供试品溶液 .按制剂处方比例 ,取不
含虎杖的其它原料药制备软膏 ,按上述供试品溶液
制备方法 ,制成阴性对照液 .取大黄素对照品 ,加甲
醇制成 1× 10- 3g /mL的对照品溶液 .分别吸取供试
品溶液 ,大黄素对照品溶液 ,阴性对照液各 5μL点于
同一硅胶 G薄层板上 ,以甲苯 /甲酸乙酯 /甲酸 (体积
比为 5∶ 4∶ 1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外光
灯 ( 365 nm )下检视 .供试品色谱中 ,在与大黄素对
照品相应的位置上 ,显相同的荧光斑点 ;阴性无干扰
(见图 1左 ) .
1～ 3) 样品 ; 4) 对照品: 4a大黄素 , 4b没食子酸 ; ; 5)阴性样品
图 1　软膏的薄层色谱
Fig 1　 TLC of ointment
2. 2　软膏中葡萄根的 TLC鉴别
按节 2. 1供试品溶液的制备方法 ,制备供试品
溶液 .按制剂处方比例 ,取不含蛇葡萄根的其它原料
药制备软膏 ,按供试品溶液的制备方法 ,制成阴性对
照液 .取没食子酸对照品 ,加甲醇制成 1× 10- 3 g /mL
的对照品溶液 .分别吸取供试品溶液 ,没食子酸对照
品溶液 ,阴性对照液各 5μL,点于同一硅胶 G薄层板
上 ,以氯仿 /醋酸乙酯 /甲酸 ( 5∶ 4∶ 1)为展开剂 ,展
开 ,取出 ,晾干 ,喷 5% FeCl3乙醇溶液显色 ,日光下
检视 .供试品色谱中 ,在与没食子酸对照品相应的位
置上 ,显相同颜色的斑点 ;阴性无干扰 (见图 1右 ) .
2. 3　软膏中大黄素的含量测定
2. 3. 1　色谱条件与系统适用性试验
软膏中大黄素的测定参考文献 [4 ].检测波长的
选择: 取大黄素对照品适量 ,加甲醇使溶解 ,对其进
行光谱扫描测定 ,结果对照品溶液在 254nm处有最
大吸收 ,故选定 254nm作为测定波长 . 甲醇-0. 1%
磷酸水溶液 ( 80∶ 20)为流动相 ,柱温 35℃ ,流速
1. 0mL /min,检测波长为 254nm,理论塔板数不小于
3 000.
2. 3. 2　供试溶液的制备
对照品溶液的制备 .
精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥 36h
的大黄素对照品适量 ,加甲醇制成每 1mL含 57. 8μg
的溶液 ,即得 .
供试品溶液的制备 .
取蛇葡萄根软膏 ,约 10g ,精密称定 ,置圆底烧瓶
中 ,精密加甲醇 30mL, 80℃水浴中加热 2min,搅拌使
溶解 ,再置冰水浴中冷却、滤过 ,用甲醇 30mL重复
提取 3次 ,合并滤液置 100mL容量瓶中 ,用甲醇稀释
至刻度 ,摇匀 ,置冰水浴中冷却 2h以上 ,取出 ,立即
滤过 ,精密取 5mL滤液甲醇定容至 25mL,取续滤液
作为供试品溶液 .
阴性对照溶液的制备 .
按制剂处方比例 ,取不含虎杖的其它原料药制
备软膏 ,按上述供试品溶液制备方法 ,制成阴性对
照液 .
2. 3. 3　专属性试验
分别吸取对照品溶液、供试品溶液、缺虎杖的阴
性对照溶液各 5μL,按以上色谱条件分别进样测定 .
结果 ,大黄素对照品保留时间约为 15min,阴性对照
溶液在该时间无吸收峰 ,供试品溶液在该时间有吸
收峰 (见图 2) .
2. 3. 4　线性关系的考察
精密吸取 57. 8× 10- 3 g /mL对照品溶液 2、 4、 6、
8和10μL57. 8× 10- 6g /mL,各进样 2次 ,计算峰面积
积分值 ,结果见表 1,以大黄素峰面积积分值对进样
量进行线性回归 ,得到回归方程: Y = 3 832. 301
89X - 45. 413 97, r= 0. 999 88表明其线性关系良
好 ,线性范围为 0. 115 6～ 0. 578 0μg.
2. 3. 5　精密度试验
吸取供试品溶液 ,按上述色谱条件 ,连续进样 6
次 ,测得大黄素峰面积 ,结果见表 2. RSD为 2. 10% ,
表明仪器精密度符合要求 .
表 1　线性关系考察结果
Tab 1　 Resul ts of test ing lin eari ty relation
进样体积 /μL 进样量 /μg 峰面积积分值
2 0. 115 6 395. 842 07
4 0. 231 2 843. 230 96
6 0. 346 8 1 292. 220 04
8 0. 462 4 1 708. 641 05
10 0. 578 0 2 178. 207 52
27第 1期　　　　　　　　　　　　　　　　杨　柳 ,等:蛇葡萄根软膏质量标准　　　　　　　　　　　　　　　　　　
图 2　专属性考察的液相色谱图
Fig 2　 HPLC ch romatograms
表 2　精密度试验结果
Tab 2　 Resul ts of accuracy tes t
序号 峰面积积分值 RSD%
1 1 289. 460 57
2 1 298. 254 88
3 1 227. 261 35 2. 10%
4 1 294. 164 67
5 1 285. 477 29
6 1 265. 527 10
2. 3. 6　样品溶液稳定性试验
按上述色谱条件 ,取本品制成供试品溶液 ,分别
于配制后 0、 2、 4、 8、 12、 24和 48h,依法测定 ,结果见
表 3. 结果表明 ,供试品溶液在 48 h内基本稳定 .
2. 3. 7　重现性试验
取同一批号供试品 5份 ,分别按节 2. 3. 2“供试
品溶液的制备”处理 ,进样测定 ,样品中大黄素含量
平均值为 3. 62mg /g , RSD为 0. 85% .试验结果表明 ,
测定结果的重现性良好 ,见表 4.
表 3　稳定性试验结果
Tab 3　 Resul t s of stabi lit y tes t
时间 /h 峰面积积分值 RSD%
0 1 312. 909 55
2 1 377. 815 55
4 1 316. 257 32
8 1 367. 525 15 2. 37%
12 1 367. 228 39
24 1 399. 560 42
48 1 345. 169 80
表 4　重现性试验结果
Tab 4　 Resul ts of repeti tivenes s tes t
序号 大黄素含量 /
( mg / g)
平均含量 /
( mg / g )
RSD /%
1 3. 60
2 3. 61
3 3. 60 3. 62 0. 85
4 3. 62
5 3. 67
2. 3. 8　回收率试验
进行加样回收试验 ,精密称取已知含量的蛇葡
萄根软膏 6份 ,每份取 5g ,精密称定 ,分别精密加入
一定量的大黄素对照品溶液 .按节 2. 3. 2“供试品溶
液的制备”处理 ,进样测定 ;结果见表 5. 表明本法回
收率为 98. 56% , RSD为 1. 74% .
2. 3. 9　样品含量测定
取 5个批号样品 ,分别按节 2. 3. 2“供试品溶液
的制备”处理 .分别精密吸取对照品溶液与样品溶液
各 5μL,注入液相色谱仪 ,测定 ,计算 ,即得 .
表 5　回收率试验结果
Tab 5　 Resul ts of recov ery rate test
序号 取样量 /g 测得量 /mg 原有量 /mg 加入量 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD/%
1
2
3
4
5
6
5. 095 1
5. 208 8
5. 215 8
5. 098 0
5. 076 6
5. 270 2
37. 33
38. 97
38. 61
37. 90
37. 51
39. 39
18. 44
18. 86
18. 88
18. 45
18. 38
19. 08
19. 52
20. 02
20. 08
19. 86
19. 71
20. 14
96. 76
100. 47
98. 27
97. 93
97. 09
100. 84
　
　
98. 56
　
　
　
　
　
1. 74
　
　
　
28　　　　　　　　　　　　　　　　　　中南民族大学学报 (自然科学版 ) 第 26卷
表 6　 5批蛇葡萄根软膏含量测定结果 (n= 2)
Tab 6　 Resul ts of sample d etermination
序号 大黄素含量 / (mg /g ) 平均含量 / ( mg /g)
1
2
3
4
5
3. 58
3. 70
3. 55
3. 63
3. 52
　　
3. 60　　
3　讨论
( 1)本品为软膏制剂 ,基质对色谱柱有损害 ,对
样品测定容易干扰 ,样品溶液的制备过程中要尽量
除去基质 .本法利用在低温下在甲醇中基质的溶解
性远小于供试品的特性 ,采用甲醇做溶剂 ,加热使供
试样品从基质中分离而溶于甲醇中 ,再置冰水浴中
冷却使基质凝固 ,从而使基质与供试样品很好分离 .
( 2)根据实验结果 ,该含量测定方法精确度和
稳定性高 ,重现性好 ,回收率为 98. 56% ( RSD=
1. 74% ) .因此 ,本法可作为蛇葡萄根软膏的含量测
定方法 ,用以对蛇葡萄根软膏进行质量控制 .
( 3)根据实验结果 ,薄层色谱中指示药材组分
的斑点清晰 ,阴性无干扰 ,可以用于软膏中药材组分
的鉴别 (检测的温度为 20～ 25℃ ,湿度 60～ 75% ).
参　考　文　献
[ 1 ]　湖北中药资源普查办公室 . 湖北中药资源名录 [ M ].
北京:科学出版社 , 1990: 214.
[ 2]　陈科力 , 罗　毅 , 陈远彬 , 等 . 野葡萄根原植物的调
查研究 [ J]. 中药材 , 1996, 19( 4): 176-177.
[ 3]　孙江桥 ,陈科力 ,吴和珍 .蛇葡萄根霜剂治疗外科疮疡
的实验研究 [ J].中国实验方剂学杂志 , 2001, 7( 5): 37-
39.
[ 4]　国家药典委员会 .中华人民共和国药典 , 一部 [S ]. 北
京:化学工业出版社 , 2005: 145.
[ 5 ]　徐志红 ,刘星阶 ,梁启勇 .蛇葡萄根化学成分的研究
[ J]. 中国中药杂志 , 1995, 20( 8): 484-485.
[6 ]　张琼光 ,谭文界 ,陈科力 . 异叶蛇葡萄根化学成分研究
[ J] .中药材 , 2003, 26( 9): 636-637.
29第 1期　　　　　　　　　　　　　　　　杨　柳 ,等:蛇葡萄根软膏质量标准