全 文 ：China Licensed Pharmacist Jan. 2016，Vol. 13 No.1
合理用药 呵护公众健康
基金项目：广东省中山市科技局项目（20102A033）
作者简介：萧俊祺，男，药师。主要从事中药制剂开发与研究。E-mail：602045059@qq.com
彭伟文，男，主任中药师，教授，硕士生导师。主要从事中药制剂开发与研究。通讯作者 E-mail：pww200688@21cn.com
复方黑面神软膏处方提取工艺研究
萧俊祺 彭伟文 董旺凤 李圣鹏
（广州中医药大学附属中山市中医院，广东 中山 528400）
【摘要 】 目的 ：建立复方黑面神软膏中表儿茶素和苦参碱含量的测定方法，优化提取工艺条件。方法 ：采用高
效液相色谱法（HPLC）测定表儿茶素和苦参碱含量，并运用正交试验考察浸泡时间、加水量、提取时间和提取
次数对苦参含量的影响。结果 ：表儿茶素在 0.008 4 ～ 0.033 6 g/L内线性关系良好，回归方程：y = 13 346x ＋
11.632，r = 1.000 0。最佳水提工艺：药材加 20 倍量水浸泡 45 min，80 ℃温浸提取 2 次，每次 1 h。苦参碱
在0.029 4 ～ 0.588 g/L 线性关系良好，回归方程：y = 1 714.9x - 3.835 5，r = 0.999 9，平均回收率达 96.7%，
RSD 为 1.18%。煎煮最佳工艺条件：药材加 20 倍水浸泡 45 min，提取两次，每次 1 h。结论 ：HPLC 测定复方黑
面神软膏中表儿茶素和苦参碱的含量操作简便，专属性强，准确可靠，可用于复方黑面神软膏的质量控制。
【关键词 】 复方黑面神软膏；苦参碱；正交试验；高效液相色谱法
doi：10.3969/j.issn.1672-5433.2016.01.004
Procedure for Extraction of Compound Breynia Fruticosa Ointment
Xiao Junqi, Peng Weiwen, Dong Wangfeng, Li Shengpeng （Zhongshan Traditional Chinese Medical Hospital
Affiliated to Guangzhou Univeristy of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Zhongshan 528400, China）
ABSTRACT Objective：To develop a method for determination of epicatechin and matrine contents in compound
breynia fruticosa ointment and optimize the procedure for extraction. Methods：The epicatechin and matrine con-
tents were determined by high performance liquid chromatography （HPLC）. The effects of time for immersing, ra-
tio of solid to liquid as well as time duration for extraction and number of extraction cycle on the matrine content
were evaluated by orthogonal test. Results：The linear range of epicatechin was 0.008 4 ～ 0.033 6 g/L, of which
the regression equation of standard curve was as fbllows: y = 13 346x + 11.632，r = 1.000 0. The optimal water
extraction procedure was as fb1lows: the materials were immersed with water at 20 times of the volume for 45
min, and extracted at 80 ℃ for 2 times, 1 h for each. The linear range of atrine was 0.029 4 ～ 0.588 g/L,
while the regression equation was as follows: y = 1 714.9x - 3.835 5, r = 0.999 9. The mean recovery of ma-
trine was 96.7%, with a RSD of 1.18%. The optimal condition for decoction extraction was as fo1lows: the mate-
rials were immersed with water at 20 times of the volume for 45 min and extracted for 2 times, 1 h for each.
Conclusion: HPLC method for determination of matrine is simple, specific, accurate and reliable, which may be
used for quality control of compound breynia fruticosa ointnent.
KEY WORDS Compound Breynia Fruticosa Ointnent；Matrine；Orthogonal Test；High Performance Liquid Chro-
matography （HPLC）
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中国执业药师·
表 1 梯度洗脱程序
时间（min） 甲醇（%） 0.1%磷酸溶液（%）
0 5 95
15 15 85
35 18 82
60 23 77
65 5 95
黑面神为大戟科植物黑面神（Breynia fruticosa
（L.）Hook.f.）的干燥全株，具有清湿热 、化瘀滞的
功效，用于湿疹、皮肤瘙痒、过敏性皮炎、漆过敏、
阴道炎、外阴瘙痒、带状疱疹等多种疾病的治疗 [1]。
彭伟文等 [2]在黑面神的药理作用上作了研究 ，验
证了其有抗炎作用、免疫抑制作用、抗皮肤Ⅰ型超
敏反应作用。 针对黑面神在上述疾病方面的独特
疗效，拟研制出以黑面神为主药，苦参为臣药，蛇
床子、白鲜皮和地肤子为佐药的外用制剂复方黑
面神软膏。
王英晶等 [3]通过高效液相色谱法（HPLC）对黑
面神枝叶中表儿茶素含量进行了测定。 本实验在
此基础上运用 HPLC 测定复方黑面神软膏君药黑
面神中表儿茶素和臣药苦参中苦参碱的含量 ，并
运用 L9（34）正交试验优化其提取工艺 ，为 HPLC
测定黑面神复方制剂的含量奠定基础。
1 仪器和试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪 （美国 Agilent 1100 series）；
BS224S 型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限
公司）；KQ3200E 型医用超声波清洗器（昆山市超
声仪器有限公司）；HH-S4 数显恒温水浴锅 （金坛
市医疗仪器厂）；RE-2000B 型旋转蒸发仪（上海亚
荣生化仪器厂）；SHB-Ⅲ型循环水真空泵（巩义市
英峪华中仪器厂）；东方-A 型直热式电热恒温干
燥箱（广州东方电热干燥设备厂）。
1.2 试药
黑面神 （广州至信药业有限公司 ），经广州中
医药大学生药鉴定教研室鉴定为大戟科黑面神属
植物 （Breynia fruticosa（L.）Hook.f.）；苦参 （广州至
信药业有限公司 ，批号 ：140601）；蛇床子 （广州至
信药业有限公司 ，批号 ：150101）；地肤子 （亳州市
毫广中药饮片有限公司，批号：20120722）；白鲜皮
（广州至信药业有限公司 ，批号 ：140601）；表儿茶
素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110878-
200102）；苦参碱对照品 （中国食品药品检定研究
院，批号：110805-200508）。 水为屈臣氏蒸馏水；甲
醇为色谱纯；其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 指标成分含量测定
2.1.1 色谱条件 色谱柱为 Boston Green ODS C18
（4.6 mm × 250 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%
磷酸溶液 ，采用梯度洗脱 ，其程序见表 1。 流速
1.0 mL/min，柱温 30 ℃，检测波长分别为：表儿茶
素 280 nm，苦参碱 220 nm，进样量为 20 μL。 理
论塔板数按表儿茶素计算不低于 3 600， 按苦参碱
计算不低于 4 000。 根据以上条件，表儿茶素和苦
参碱的保留时间分别为 48.333 min 和 10.026 min。
色谱图见图 1 ～ 4。
图 1 表儿茶素对照品溶液 HPLC 图
图 2 表儿茶素供试品溶液 HPLC 图
图 3 苦参碱对照品溶液 HPLC 图
论著
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China Licensed Pharmacist Jan. 2016，Vol. 13 No.1
合理用药 呵护公众健康
2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取表儿茶素对
照品 8.4 mg， 加 50%甲醇制成每 1 mL 含 0.84 mg
的溶液，摇匀，得表儿茶素对照品溶液；精密称取
苦参碱对照品 14.7 mg，加甲醇制成每 1 mL 含
1.47 mg 的溶液，摇匀，得苦参碱对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备 取黑面神药材 30 g 加
20 倍量水浸泡 45 min，80 ℃温浸提取 2 次，每次
1 h，过滤得药渣，滤液 70 ℃减压浓缩到一定量，
用 50%甲醇定容至 50 mL，得表儿茶素供试品溶液。
药渣和剩余的 4 味药（苦参 15 g，白鲜皮 10 g，蛇
床子 8 g，地肤子 5 g）加 20 倍量水浸泡 45 min，
提取 2 次 ，每次 1 h，提取液过滤 ，浓缩至一定浓
度，加 95%乙醇沉淀至 70%浓度，4 ℃放置一夜，
抽滤，滤液回收乙醇，用甲醇定容至 50 mL，得苦
参碱供试品溶液。
2.1.4 标准曲线的制备 分别精密吸取“2.1.2”中
表儿茶素和苦参碱对照品溶液 0.1，0.2，0.5，1.0，
2.0，4.0 mL 置 5 mL 量瓶中， 表儿茶素用 50%甲
醇稀释至刻度 ，苦参碱用甲醇稀释至刻度 ，在
“2.1.1”条件下进样 20 μL。以进样浓度（g/L）为横
坐标（x），以峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线，表
儿茶素回归方程为：
y = 13 346x ＋ 11.632（r = 1.000 0），
线性范围：0.008 4 ～ 0.033 6 g/L。 苦参碱回
归方程为：
y = 1 714.9x － 3.835 5（r = 0.999 9），
线性范围：0.029 4 ～ 0.588 0 g/L。
2.1.5 精密度试验 分别精密吸取同一浓度的表
儿茶素对照品溶液和苦参碱对照品溶液，在“2.1.1”
条件下连续进样 6 次，测得表儿茶素含量和苦参
碱含量 ，结果显示表儿茶素含量 RSD = 1.85% ，
苦参碱含量 RSD = 1.17%。
2.1.6 重复性试验 取 6 份 30 g 黑面神 ，按表儿
茶素供试品溶液的制备方法进行处理。 另取黑面
神药渣，苦参 15 g，白鲜皮 10 g，蛇床子 8 g，地肤
子 5 g，共 6 份 ，按苦参碱供试品溶液的制备方
法进行处理 ，在 “2.1.1”条件下进样分析 ，分别测
得表儿茶素含量和苦参碱含量 ，结果显示表儿茶
素含量 RSD = 0.95%，苦参碱含量 RSD = 1.39%。
2.1.7 稳定性试验 取黑面神按表儿茶素供试品
溶液的制备方法进行处理，另取黑面神药渣，苦参，
白鲜皮，蛇床子和地肤子，按苦参碱供试品溶液的
制备方法进行处理 ，分别于 0，2，4，8，16，24 h 在
“2.1.1”条件下进样分析，分别测得表儿茶素含量
和苦参碱含量 ，结果显示表儿茶素含量 RSD =
1.43%，苦参碱含量 RSD = 0.96% ，表明样品在
24 h 内稳定。
2.1.8 回收率试验 分别按表儿茶素供试品溶液
和苦参碱供试品溶液的制备方法进行处理后的样
品平均各分为 6 份，平行分 2 组，分别精密加入表
儿茶素对照品 0.350 mg 和 0.715 mg，苦参碱对照
品 0.350 mg 和 0.715 mg，按各自供试品溶液的制
备方法进行处理 ，在 “2.1.1”条件下进样分析 ，结
果显示表儿茶素平均回收率达 98.2%，RSD = 0.75%。
苦参碱平均回收率达 97.5%，RSD = 0.67%，表明
表儿茶素和苦参碱加样回收率试验良好 ，符合定
量分析要求。 结果见表 2 ～ 3。
图 4 苦参碱供试品溶液 HPLC 图
表 2 表儿茶素加样回收率试验结果
称样量
（g）
样品中量
（mg）
加入量
（mg）
测得量
（mg）
回收率
（%）
平均值
（%）
RSD
（%）
0.501 4 0.345 8 0.350 0 0.675 1 97.03 98.2 0.75
0.502 2 0.350 2 0.350 0 0.687 6 98.20
0.498 7 0.345 3 0.350 0 0.681 7 98.04
0.500 6 0.351 2 0.700 0 1.037 2 98.67
0.502 5 0.350 8 0.700 0 1.027 7 97.80
0.501 7 0.351 8 0.700 0 1.043 1 99.17
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中国执业药师·
表 5 正交试验结果
试验号 A B C D
表儿茶素含量
（mg/g）
1 1 1 1 1 0.323
2 1 2 2 2 0.510
3 1 3 3 3 0.412
4 2 1 2 3 0.553
5 2 2 3 1 0.408
6 2 3 1 2 0.562
7 3 1 3 2 0.602
8 3 2 1 3 0.473
9 3 3 2 1 0.447
K1 0.415 0.493 0.453 0.393
K2 0.508 0.464 0.503 0.558
K3 0.507 0.474 0.474 0.479
R 0.093 0.029 0.050 0.165
2.2 正交试验
2.2.1 表儿茶素提取正交试验
2.2.1.1 水提工艺条件 为优选出黑面神的最佳
提取工艺，以表儿茶素为考察指标，设计 L9（34）正
交试验对浸泡时间，加水量，提取时间和提取次数
进行考察（表 4）。
2.2.1.2 表儿茶素正交样品溶液的制备 取黑面
神 30 g 置 1 000 mL 烧杯中 ，按 L9（34）正交试验
表进行提取，具体工艺流程如下：黑面神→加水浸
泡→80 ℃浸泡→过滤→水提液→减压浓缩→定
容至 50 mL→得 9 份样品溶液。 在“2.1.1”条件下
进样分析，测定表儿茶素含量，结果见表 5 ～ 6。
2.2.1.3 试验结果分析 从直观分析结果可知，影
响表儿茶素含量高低的各考察因素次序为 D ＞
A ＞ C ＞ B，方差分析结果显示，浸泡时间、加水
量和提取时间对表儿茶素含量的影响无显著性差
异 （P ＞ 0.05），提取次数对表儿茶素含量的影响
有显著性差异（P = 0.031 ＜ 0.05）。 综合考虑各影
响因素，最终确定优选的提取工艺条件为 A2B1C2D2，
即 30 g 黑面神加 20 倍量水浸泡 45 min，80 ℃
温浸提取 2 次，每次 1 h。
2.2.2 苦参碱提取正交试验
2.2.2.1 水提工艺条件 为优选出苦参的最佳提
取工艺，以苦参碱的含量和干膏率为考察指标，设
计 L9（34）正交试验进行考察，其程序见表 7。
2.2.2.2 苦参碱正交样品溶液的制备 取黑面神
药渣 、15 g 苦参 、10 g 白鲜皮 、8 g 蛇床子和 5 g
地肤子置 1 000 mL 烧杯中，按 L9（34）正交试验表
进行提取，具体工艺流程如下：
称样量
（g）
样品中量
（mg）
加入量
（mg）
测得量
（mg）
回收率
（%）
平均值
（%）
RSD
（%）
0.501 2 1.228 1.230 2.398 97.56 97.5 0.67
0.502 4 1.231 1.230 2.383 96.83
0.502 5 1.241 1.230 2.429 98.30
0.501 4 1.225 2.460 3.619 98.21
0.503 2 1.236 2.460 3.578 96.81
0.501 8 1.233 2.460 3.598 97.43
表 3 苦参碱加样回收率试验结果
表 6 表儿茶素方差分析结果
因素 SS f F P
A 0.017 2 13.143 0.071
B 0.001 2 0.063 0.062
C 0.004 2 2.982 0.251
D 0.041 2 31.517 0.031
误差 0.010 2
注：F0.05（2,2）= 19.00，f = 2
水平
A
浸泡时间（min）
B
加水量（倍）
C
提取时间（h）
D
提取次数（次）
1 30 10 0.5 1
2 45 15 1.0 2
3 60 20 1.5 3
表 7 苦参碱正交试验因素和水平
表 4 表二茶素正交试验因素和水平
水平
A
浸泡时间（min）
B
加水量（倍）
C
提取时间（h）
D
提取次数（次）
1 30 20 0.5 1
2 45 25 1.0 2
3 60 30 1.5 3
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China Licensed Pharmacist Jan. 2016，Vol. 13 No.1
合理用药 呵护公众健康
原处方药材→加水浸泡→煎煮→过滤→水提
液→浓缩至一定体积→醇沉 →静置一夜→抽
滤→滤液回收乙醇→浓缩→定容至 50 mL→得 9
份样品溶液。 在“2.1.1”条件下进样分析，测定苦
参碱含量，结果见表 8 ～ 9。
2.2.2.3 干膏得率的测定 参照 《中国药典 》2010
年版一部（附录ⅩA）浸出物测定法 [4]，将正交试验
所得的药液浓缩至 10 mL，分别置于已干燥至恒
重的蒸发皿（设质量为 W1）中 ，水浴挥干 ，残渣于
105 ℃干燥 3 h，取出 ，置干燥器中冷却 30 min，
迅速精密称定质量（设质量为 W2），通过以下公式
计算干膏得率：
干膏得率 = W2 － W1
药材质量
× 100%。
结果见表 8 和表 10。
2.2.2.4 试验结果分析 从直观分析结果可知，各
考察因素对干膏得率的影响次序为 B ＞ D ＞ C ＞
A（表 10），对苦参碱含量的影响次序为 C ＞ B ＞
D ＞ A（表 9），综合评分影响提取效率的因素次序
为 D ＞ B ＞ C ＞ A（表 8 和表 11）。 由方差分析
结果可知，加水量和提取次数对苦参碱含量的影
响有显著性差异（P = 0.041 ＜ 0.05，P = 0.036 ＜
0.05），浸泡时间和提取时间对苦参碱含量的影响
无显著性差异（P ＞ 0.05）。 通过综合考虑，确定优
选提取工艺条件为 A2B3C2D2，即黑面神药渣、苦参、
白鲜皮、蛇床子和地肤子加 20 倍量水浸泡 45 min，
煎煮提取 2 次，每次 1 h。
3 小结与讨论
表儿茶素有一定的热不稳定性 ，根据前期实
表 11 综合评分方差分析结果
因素 SS f F P
A 0.217 2 1.000 0.062
B 0.921 2 23.594 0.041
C 0.746 2 19.116 0.050
D 1.042 2 26.709 0.036
误差 0.039 2
注：F0.05（2,2）= 19.00，f = 2
表 9 干膏得率方差分析结果
因素 SS f F P
A 0.686 2 0.255 0.150
B 8.489 2 10.048 0.091
C 1.831 2 2.167 0.316
D 4.872 2 5.766 0.148
误差 0.845 2
注：F0.05（2,2）= 19.00，f = 2
表 10 苦参碱含量方差分析结果
因素 SS f F P
A 0.122 2 0.176 0.069
B 0.323 2 0.467 0.053
C 2.059 2 9.267 0.032
D 0.262 2 1.179 0.396
误差 2.770 2
注：F0.05（2,2）= 19.00，f = 2
表 8 正交试验结果
试验
号
1 1 1 1 1
2 1 2 2 2
3 1 3 3 3
4 2 1 2 3
5 2 2 3 1
6 2 3 1 2
7 3 1 3 2
8 3 2 1 3
9 3 3 2 1
K1 6.574 6.796 7.163 6.327
K2 6.897 5.907 7.111 6.597
K3 7.250 8.019 6.448 7.815
因素
A B C D
干膏
得率
（%）
6.139
5.450
8.134
7.897
4.057
7.936
6.352
7.413
7.986
苦参碱
含量
（mg/g）
0.511
2.127
2.340
2.138
2.104
1.297
1.620
1.235
1.845
综合
评分
2.199
3.124
4.078
3.866
2.690
3.276
3.040
3.089
3.678
RK 0.675 2.112 0.715 1.488
L1 1.659 1.423 1.014 1.487
L2 1.846 1.822 2.037 1.681
L3 1.576 1.829 2.021 1.904
RL 0.297 0.404 1.023 0.417
N1 3.134 3.035 2.855 2.859
N2 3.277 2.968 3.559 3.147
N3 3.272 3.680 3.269 3.678
RN 0.143 0.712 0.704 0.819
注：评分标准：综合评分 = 干膏得率 × 30% + 苦参碱含量 × 70%
21
中国执业药师·
（上接第 9 页）
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（收稿日期 ：2015-04-25）
验研究 ，从黑面神中提取表儿茶素时采用 80 ℃
温浸提取法提取得到的表儿茶素含量最高 ，在本
次实验的预实验中也得到了验证。 预实验还比较
了温浸提取法，醇提水沉法和水提醇沉法对苦参
中苦参碱含量的影响。结果显示，水提醇沉法苦参
碱得率较温浸法高。 故选择温浸提取为表儿茶素
的提取方法，水提醇沉法提取作为苦参碱的提取
方法。为体现本实验研究复方剂型的性质，每次提
取苦参碱时加入温浸提取后的黑面神药渣。 因用
甲醇定容制得的表儿茶素供试品所测得的峰面积
过小，而用 50%甲醇定容制得的表儿茶素供试品
测得的峰面积较大且分离度较好，故制备表儿茶
素对照品溶液和供试品溶液时用 50%甲醇定容。
《中国药典 》2010 年版记载测定苦参碱含量
时，色谱柱填充剂为氨基键合硅胶，流动相为乙腈-
无水乙醇 -3%磷酸溶液 （80 ∶10 ∶10），检测波长为
220 nm。 在此条件下进行预实验，发现苦参碱在
2 min 左右出峰，拖尾严重且峰形较差。 究其原因
可能是本次实验使用 C18 色谱柱而不是氨基键合
硅胶色谱柱。此条件下表儿茶素没有明显峰形。在
检测波长为 280 nm，选用流动相甲醇-0.1%磷酸溶
液进行梯度洗脱时，苦参碱出峰时间为 10.02 min，
分离度明显改善但仍有拖尾。 表儿茶素出峰时间
为 48.333 min，峰形较好。 当波长改为 220 nm，在
此梯度洗脱条件下，苦参碱峰形得到进一步改善，
但表儿茶素峰形不如在 280 nm 波长下检测到的。
故表儿茶素选用 280 nm 为检测波长，苦参碱选用
220 nm 为检测波长 ，流动相均为甲醇-0.1%磷酸
溶液梯度洗脱。
近年来对黑面神药理作用及临床应用的研究
报道日益增多，但在黑面神复方制剂研究方面进
展缓慢，尤其是在国内。 研究黑面神，既可为黑面
神属植物化学成分的分类奠定基础，也可为进一
步研究开发黑面神复方制剂奠定基础。 本次实验
结果为黑面神及其复方制剂的应用提供了一定的
实验依据。
参考文献：
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（收稿日期 ：2015-08-12）
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