全 文 ：·药物研究·
基金项目: 2014 年浙江省大学生科技创新活动计 划
(2014Ｒ433007)
* 通讯作者:王翰华，Email:wanghh@ mail． zjpc． net． cn
野葛叶总黄酮提取物对去卵巢大鼠骨质疏松的防治作用
王翰华1* 陆元勋2 吴庆玲1
1． 浙江医药高等专科学校，浙江 宁波 315100
2． 宁波明贝中药业有限公司，浙江 宁波 315000
中图分类号:Ｒ956 文献标识码:A 文章编号:1006-7108(2016)10-1311-04
摘要:目的 探讨野葛叶总黄酮提取物对去卵巢大鼠骨质疏松的防治作用。方法 选择 6 月龄 SD雌性大鼠 60 只，随机分为
假手术组、模型组、己烯雌酚组、野葛叶总黄酮提取物低和高剂量组。观察各组胫骨抗弯力，右股骨和腰 4 椎体的骨密度和骨
生物力学性能，血清中钙(Ca)、磷(P)和碱性磷酸酶(ALP)的变化。结果 野葛叶总黄酮高、低剂量组及己烯雌酚组大鼠胫骨
抗弯力，股骨和腰椎的骨生物力学性能均高于模型组(P ＜ 0. 05);野葛叶总黄酮高剂量组及己烯雌酚组大鼠股骨和腰椎骨密
度，ALP的变化均高于模型组(P ＜ 0. 05)。结论 野葛叶总黄酮提取物通过提高大鼠胫骨抗弯力，增加股骨和腰椎的骨密度，
改善股骨和腰椎的骨生物力学性能，提高血清 ALP含量等因素防治骨质疏松。
关键词:野葛叶;总黄酮;骨质疏松
The therapeutic effect of extracts of Kudzu leaf flavonoids on osteoporosis in ovariectomized rats
WANG Hanhua1，LU Yuanxun2，WU Qinling1
1． Zhejiang Pharmaceutical College，Ningbo 315100，China
2． Ningbo Ming Bei China Pharmaceutical Co．，Ltd． Ningbo 315100，China
Corresponding author:WANG Hanhua，Email:wanghh@ mail． zjpc． net． cn
Abstract:Objective To investigate the therapeutic effect of extracts of Kudzu leaf flavonoids (EKLF)on osteoporosis in
ovariectomized rats．Methods A total of 60 adult female SD rats were randomly assigned to 5 groups:sham operation group，
ovariectomized group，diethylstilbestrol group，low dose EKLF group，and high dose EKLF group． The bending force of tibia，bone
mineral density of the right femur and the 4th lumbar vertebra and bone biomechanical characteristics were determined． The serum
levels of calcium (Ca)，phosphorus (P)and alkaline phosphatase (ALP)were also measured． Ｒesults The bending force of
tibia and all the biomechanical parameters in high and low dose EKLF groups and the diethylstilbestrol group were higher than those
in the ovariectomized group (P ＜ 0. 05)． Bone mineral density of the lumbar vertebra and the right femur and the serum levels of
ALP in the high dose EKLF group and diethylstilbestrol group were significantly higher than those in the ovariectomized group (P ＜
0. 05)． Conclusion EKLF has therapeutic effect on osteoporosis by enhancing the bending force of tibia，increasing bone mineral
density of the lumbar vertebrae and the femur，improving bone biomechanical characteristics and raising the serum levels of ALP．
Key words:Kudzu leaf;Total flavonoids;Osteoporosis
葛根是一味传统的药食同源的中药，其原植物
是豆 科 植 物 野 葛 (Pueraria lobata (Willd． )
Ohwi)［1］。现代药理研究表明，葛根具有防治骨质
疏松，保护心脏，降血压，抗凋亡，降血糖，保护神经，
抗氧化和治疗神经病理性疼痛等多种活性。社会人
口老龄化使因骨与关节退化引起骨质疏松(OP)成
为全世界所面临的重要问题。近年来葛根因含葛根
素、大豆苷及大豆苷元等异黄酮类成分，在防治骨质
疏松方面的作用得到广泛关注［2，3］。但关于野葛叶
的相关报道较少。本研究探讨了野葛叶总黄酮提取
物对去卵巢 OP 大鼠胫骨抗弯力，右股骨和腰 4 椎
体的骨密度和骨生物力学性能，血清中钙(Ca)、磷
(P)和碱性磷酸酶(ALP)的影响，旨在探讨野葛叶
总黄酮防治骨质疏松的活性，扩大野葛的药用部位，
为野葛叶的进步开发利用提供参考。
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中国骨质疏松杂志 2016 年 10 月第 22 卷第 10 期 Chin J Osteoporos，October 2016，Vol 22，No． 10
Published online www． wanfangdate． com． cn doi:10. 3969 / j． issn． 1006-7108. 2016. 10. 018
1 材料和方法
1. 1 主要材料
1. 1. 1 主要试剂:野葛叶购于安徽省亳州市药材市
场，经浙江医药高等专科学校中药学院杨雄志教授
鉴定为豆科植物野葛(Pueraria lobata (Willd． )
Ohwi)的叶;戊巴比妥钠(美国 SIGMA 公司);己烯
雌酚片(广东华南药业集团有限公司);所用试剂均
为化学纯。
1. 1. 2 主要仪器:1000N 数显推拉力计(上海甘坛
测力有限公司);双能 X 线骨密度仪 (美国
HOLOGIC公司);AGS-10KNG 万能材料试验机(日
本岛津公司);全自动生化分析仪(美国 BECKMAN
COULTEＲ公司)，试剂盒由北京中生生物工程高技
术公司提供。
1. 1. 3 实验动物:6 月龄 SD雌性大鼠，体重(270 ±
20)g，购于浙江大学实验动物中心，实验动物许可
证号:SYXK(浙)2012-0178。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 野葛叶总黄酮提取物的制备:参考笔者之前
的方法［4］，取野葛叶粉末，置锥形瓶中，加 60%乙
醇，超声 30 min，减压回收溶剂，即得。
1. 2. 2 分组及模型建立:将大鼠随机分成 5 组，每
组 12 只，分为假手术组、模型组、己烯雌酚组、野葛
叶总黄酮提取物低和高剂量组。用戊巴比妥钠
(35mg /kg)腹腔注射麻醉大鼠，无菌环境下打开腹
腔，模型组、己烯雌酚组、野葛叶总黄酮提取物低和
高剂量组切除双侧卵巢，假手术组保留卵巢仅切除
卵巢周围少量脂肪组织，关闭腹腔并逐层缝合。
1. 2. 3 给药方法:手术 1 w 后开始给药，大鼠灌胃
给药。野葛叶总黄酮提取物低和高剂量组分别灌胃
5 和 10 g /kg;己烯雌酚组灌胃 20 μg /kg;假手术组
和模型组灌胃等体积的纯净水。每周称量体重，并
根据体重调节给药量，连续给药 10 w。治疗结束后
断头处死大鼠。取血，离心后取血清于 － 20℃保存
备测;另取胫骨、右后肢股骨及第 4 腰椎，剔除骨表
面软组织，称重，备测。
1. 2. 4 参数测定:胫骨抗弯力测定:将大鼠胫骨置
推拉力计上，由中点处下压，记录胫骨断裂时压力。
骨密度和骨生物力学性能:由双能 X 线骨密度仪和
万能材料试验机测定。血清中 Ca、P 和 ALP:由全
自动生化分析仪，根据试剂盒说明进行测定。
1. 3 统计学处理
实验中所有检测数据以均数 ±标准差(珋x ± s)表
示，采用 SPSS18. 0 统计软件进行单因素方差分析。
2 结果
2. 1 野葛叶总黄酮提取物对去卵巢大鼠胫骨抗弯
力的影响
与假手术组比较，模型组大鼠胫骨抗弯力降低
明显(P ＜ 0. 05)。与模型组比较，己烯雌酚组及野
葛叶总黄酮低、高剂量组大鼠胫骨抗弯力均显著提
高(P ＜ 0. 05)，见表 1。
表 1 各组大鼠胫骨抗弯力比较(珋x ± s)
Table 1 Comparison of bending force of tibia among
the five groups (珋x ± s)
组别 胫骨抗弯力(N)
假手术组 78. 41 ± 5. 48
模型组 74. 96 ± 8. 551
己烯雌酚组 83. 52 ± 7. 322
低剂量组 80. 48 ± 8. 812
高剂量组 85. 23 ± 7. 862
注:与假手术组比较，1P ＜ 0. 05;与模型组比较，2P ＜ 0. 01
2. 2 野葛叶总黄酮提取物对去卵巢大鼠股骨、腰椎
骨密度的影响
模型组大鼠股骨、腰椎骨密度较假手术组降低
明显(P ＜ 0. 05)。己烯雌酚组及野葛叶总黄酮高剂
量组大鼠股骨、腰椎骨密度均高于模型组组(P ＜
0. 05)。野葛叶总黄酮低剂量组大鼠股骨、腰椎骨
密度与模型组无显著差异，见表 2。
表 2 各组大鼠股骨、腰椎骨密度的比较(珋x ± s)
Table 2 Comparison of F-BMD and L-BMD among
the five groups (珋x ± s)
组别 股骨 BMD(g /cm2) 腰椎 BMD(g /cm2)
假手术组 0. 208 ± 0. 009 0. 099 ± 0. 006
模型组 0. 169 ± 0. 0101 0. 085 ± 0. 0051
己烯雌酚组 0. 210 ± 0. 0072 0. 097 ± 0. 0032
低剂量组 0. 182 ± 0. 008 0. 088 ± 0. 006
高剂量组 0. 209 ± 0. 0092 0. 097 ± 0. 0052
注:与假手术组比较，1P ＜ 0. 05;与模型组比较，2P ＜ 0. 05
2. 3 野葛叶总黄酮提取物对大鼠股骨生物力学性
能的影响
与假手术组比较，模型组大鼠股骨弹性模量、刚
度、最大应力及最大承载力均明显降低(P ＜ 0. 05)。
己烯雌酚组及野葛叶总黄酮低、高剂量组大鼠腰椎
上述骨生物力学指标均较模型组升高(P ＜ 0. 05)，
见表 3。
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表 3 各组大鼠股骨生物力学性能的比较(珋x ± s)
Table 3 Comparison of biomechanical properties of the femur among the five groups (珋x ± s)
组别 弹性模量(Mpa) 刚度(N /mm) 最大应力(N /mm2) 最大承载力(N)
假手术组 8263. 81 ± 855. 09 223. 61 ± 20. 34 201. 97 ± 19. 08 123. 87 ± 12. 53
模型组 5314. 27 ± 678. 351 159. 27 ± 23. 651 143. 85 ± 22. 721 92. 05 ± 10. 261
己烯雌酚组 7963. 57 ± 531. 682 219. 17 ± 25. 272 197. 56 ± 18. 362 119. 44 ± 9. 862
低剂量组 7194. 26 ± 783. 242 197. 82 ± 23. 822 180. 11 ± 20. 732 103. 24 ± 10. 732
高剂量组 8052. 81 ± 673. 262 228. 39 ± 24. 662 206. 36 ± 23. 572 128. 25 ± 14. 172
注:与假手术组比较，1P ＜ 0. 05;与模型组比较，2P ＜ 0. 05
2. 4 野葛叶总黄酮提取物对大鼠腰椎生物力学性
能的影响
与假手术组比较，模型组大鼠腰椎弹性模量、刚
度、最大应力及最大承载力均明显降低(P ＜ 0. 05)。
己烯雌酚组及野葛叶总黄酮低、高剂量组大鼠腰椎
上述骨生物力学指标均较模型组升高(P ＜ 0. 05)，
见表 4。
表 4 各组大鼠腰椎生物力学性能的比较(珋x ± s)
Table 4 Comparison of biomechanical properties of the lumbar vertebrae among the five groups (珋x ± s)
组别 弹性模量(Mpa) 刚度(N /mm) 最大应力(N /mm2) 最大承载力(N)
假手术组 395. 28 ± 68. 77 1008. 33 ± 148. 58 29. 94 ± 4. 52 328. 52 ± 52. 59
模型组 288. 43 ± 52. 691 729. 83 ± 139. 641 20. 15 ± 3. 871 251. 83 ± 48. 771
己烯雌酚组 391. 27 ± 49. 382 997. 27 ± 141. 372 28. 43 ± 3. 982 318. 95 ± 33. 252
低剂量组 335. 37 ± 44. 752 801. 62 ± 138. 842 23. 76 ± 2. 852 280. 21 ± 30. 062
高剂量组 389. 71 ± 46. 272 1001. 78 ± 143. 942 28. 24 ± 4. 732 330. 28 ± 31. 532
注:与假手术组比较，1P ＜ 0. 05;与模型组比较，2P ＜ 0. 05
2. 5 野葛叶总黄酮提取物对去卵巢大鼠血清 Ca、P
及 ALP的影响
与假手术组比较，模型组大鼠血清 Ca 升高明
显(P ＜ 0. 05)。与模型组比较，己烯雌酚组血清 Ca
降低明显(P ＜ 0. 05)，而野葛叶总黄酮高剂量组血
清 ALP升高明显(P ＜ 0. 05)。各组血清 Ca、P 水平
差异无统计学意义，见表 5。
表 5 各组大鼠血清 Ca、P、ALP含量的比较(珋x ± s)
Table 5 Comparison of serum levels of Ca，P，
and ALP among the five groups (珋x ± s)
组别 血 Ca(μmol /L)血 P(μmol /L) 血 ALP(μmol /L)
假手术组 2. 80 ± 0. 35 2. 69 ± 0. 38 129. 29 ± 17. 68
模型组 3. 23 ± 0. 231 3. 02 ± 0. 45 114. 36 ± 20. 59
己烯雌酚组 2. 75 ± 0. 292 2. 22 ± 0. 42 122. 62 ± 22. 16
低剂量组 3. 09 ± 0. 19 2. 11 ± 0. 57 128. 33 ± 24. 70
高剂量组 2. 84 ± 0. 28 2. 32 ± 0. 36 135. 45 ± 19. 522
注:与假手术组比较，1P ＜ 0. 05;与模型组比较，2P ＜ 0. 05
3 讨论
去卵巢大鼠已成为绝经后骨质疏松比较经典的
模型［5-8］。大鼠胫骨抗弯力，股骨和腰椎的骨密度和
骨生物力学性能，血清中 Ca、P 和 ALP 的变化成为
去卵巢大鼠模型中评价抗骨质疏松的主要指标［6-8］。
本实验结果显示:在切除大鼠卵巢 10w 后，模型组
大鼠胫骨抗弯力，腰椎、股骨骨密度明显低于假手术
组，说明骨质疏松模型造模成功;在己烯雌酚组及野
葛叶总黄酮高、低剂量组中大鼠胫骨抗弯力明显提
高，说明野葛叶总黄酮提取物可以提高大鼠胫骨抗
弯力进而改善骨的质量;在己烯雌酚组及野葛叶总
黄酮高剂量组中大鼠腰椎及股骨骨密度下降均受抑
制，说明野葛叶总黄酮提取物具有抑制大鼠骨量丢
失的作用;在己烯雌酚组及野葛叶总黄酮高、低剂量
组中，大鼠的股骨和腰椎的骨生物力学性能均较模
型组明显提高，说明野葛叶总黄酮提取物能抑制大
鼠骨生物力学性能下降，降低骨折的风险;在野葛叶
总黄酮高剂量组中，大鼠血清 ALP 升高明显，但血
清 Ca、p 降低不明显，说明野葛叶总黄酮提取物可
提高大鼠 ALP含量，促进成骨细胞功能活动促进骨
的形成，但对抑制骨吸收效果不显著。
目前，对于葛根的研究和开发已经较为深入，但
有关野葛叶的报道还较少见。根据已有报道，野葛
叶中成分与葛根基本相似，推测可能具有类似的药
理作用。对野葛叶的进步开发利用，可以扩大野葛
的药用部位，逐渐代替葛根药用，利于药源再生。本
实验结果提示野葛叶总黄酮提取物在去卵巢大鼠体
内具有防治骨质疏松作用，但其具体作用机制有待
进一步研究。
3131中国骨质疏松杂志 2016 年 10 月第 22 卷第 10 期 Chin J Osteoporos，October 2016，Vol 22，No． 10
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