全 文 ：基金项目：乌鲁木齐市科学技术计划项目（Ｇ１２１１１０００２）
作者简介：李　莉（１９６３－），女，教授，博士生导师，研究方向：药物成分分析，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｘｊｍｕ＠１６３．ｃｏｍ。
ＨＰＬＣ法测定西伯利亚接骨木中槲皮素、芦丁的含量
李　莉，王婷媛，热娜·卡斯木
（新疆医科大学药学院，乌鲁木齐　８３００１１）
摘要：目的　建立高效液相色谱法测定西伯利亚接骨木中槲皮素、芦丁含量。方法　采用 ＨＰＬＣ法，色谱
柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５　０ｍｍ，５μｍ），流动相：甲醇－０．１％磷酸水溶液（４９∶５１），柱温２５℃，流速１．０ｍＬ／
ｍｉｎ，检测波长２５４ｎｍ。结果　芦丁在０．２～１ｍｇ／ｍＬ浓度范围内线性关系良好 （ｒ＝０．９９９　９），平均回收率为
１００．３８％，ＲＳＤ＝２．０４％ （ｎ＝９）；槲皮素在０．８～８μｇ／ｍＬ浓度范围内线性关系良好 （ｒ＝０．９９９　７），平均回收率为
９９．２３％，ＲＳＤ＝０．９６％ （ｎ＝９）。槲皮素含量为０．０９７　１～０．１９８　５ｍｇ／ｇ，芦丁含量为７．７８５～１３．３００ｍｇ／ｇ。结论
　此方法简便、准确、可靠，可作为西伯利亚接骨木药材芦丁、槲皮素含量的测定方法，为完善西伯利亚接骨木的质
量标准提供理论依据。
关键词：西伯利亚接骨木；芦丁；槲皮素；高效液相色谱法
中图分类号：Ｒ９１４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５５１（２０１４）０２－０１６３－０３
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－５５５１．２０１４．０２．００９
ＨＰＬＣ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｕｔｉｎ，ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　Ｓａｍｂｕｃｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃａ　Ｎａｋａｉ
ＬＩ　Ｌｉ，ＷＡＮＧ　Ｔｉｎｇｙｕａｎ，Ｒｅｎａ　Ｋａｓｉｍｕ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００１１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｃｏｎｓｕｍｍａｔｅ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ａｎｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｈｅｏｒｙ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｓａｍｂｕｃｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃａ
Ｎａｋａｉ，ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ａｓｓａｙｉｎｇ　ｏｆ　ｒｕｔｉｎ　ａｎｄ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　Ｓａｍｂｕｃｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃａ　Ｎａｋａｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｒｕｔｉｎ　ｏｎａｎｄ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｏｆ　Ｓａｍｂｕｃｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃａ　Ｎａｋａｉ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ｗｈｉｃｈ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ
Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），Ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　０．１％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ（４９∶５１）．Ｃｏｌ－
ｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　２５℃．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０ｍＬ／ｍｉｎ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ａｔ　２５４ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｒｅ－
ｖｅａｌｅｄ　ｔｈａｔ　ｒｕｔｉｎ　ｗａｓ　ｐｒｏｖｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．２～１ｍｇ／ｍＬｗｉｔｈ　ａ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　０．
９９９　９，ｉｔｓ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　１００．３８％ ｗｉｔｈ　ＲＳＤ　２．０４％ （ｎ＝９）．ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｗａｓ　ｐｒｏｖｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｉｎ
ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．８－８μｇ／ｍＬ　ｗｉｔｈ　ａ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　０．９９９　７，ｉｔｓ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９９．２３％，
ｗｉｔｈ　ＲＳＤ　０．９６％ （ｎ＝９）．Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　０．０９７　１－０．１９８　５ｍｇ／ｇ，Ｒｕｔｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　７．７８５－１３．
３００ｍｇ／ｇ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ，ａｎｄ　ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ
ａｓ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｒｕｔｉｎａｎｄ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　Ｓａｍｂｕｃｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃａ　Ｎａｋａｉ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓａｍｂｕｃｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃａ　Ｎａｋａｉ；ｒｕｔｉｎ；ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ＨＰＬＣ
　　西伯利亚接骨木 （Ｓａｍｂｕｃｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃａ　Ｎａｋａｉ）
为忍冬科接骨木属植物。其药用历史悠久，为哈萨
克民族常用药。西伯利亚接骨木始载于《哈萨克药
志》［１］，春季采皮，夏季采嫩枝，切成小段，晒干备用。
性味辛、温，入骨节。主要治疗骨折、跌打损伤、风
湿性关节炎、肾炎等。是新疆独一无二的特殊稀
贵资源，具有很高的药用价值。其主要含有三萜
苷元类化合物、甾醇类化合物、酚酸类化合物［２－３］、
芹菜素、山奈酚、槲皮素、木犀草素、芦丁、花青素
等多种黄酮类成分及氰苷［４－６］、木脂素类等［７］。芦
　第３７卷　第２期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３７　Ｎｏ．２
　２０１４年２月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｆｅｂ．２０１４
丁具有抗炎、镇痛、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等作
用［８－９］。槲皮素具有抗炎、镇痛、抗病毒、抗肿瘤、
降血脂等作用［１０］。本实验首次采用 ＨＰＬＣ方法建
立西伯利亚接骨木中芦丁、槲皮素含量的测定方
法，对新疆不同产地西伯利亚接骨木进行质量对
比研究，为西伯利亚接骨木药材质量标准建立及
合理开发利用提供理论依据。
１　仪器与试药
１．１　仪器　岛津ＬＣ系列高效液相色谱仪，ＬＣ－
２０ＡＢ高压泵，ＳＰＤ－２０Ａ检测器，ＣＴＯ－１０ＡＳＶＰ柱
温箱，ＡＢ１３５－Ｓ型电子天平（梅特勒－托利多仪器有
限公司），高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪
器有限公司）。
１．２　试药　西伯利亚接骨木（产于小东沟、富蕴、北
屯、福海），药材经新疆医科大学药学院帕丽达·阿
布力孜教授鉴定为西伯利亚接骨木 （Ｓａｍｂｕｃｕｓ
ｓｉｂｉｒｉｃａ　Ｎａｋａｉ）。槲皮素（中国药品生物制品检定
所，批号：１０００８０－２００４０６），芦丁（中国药品生物制品
检定所，批号：１０００８０－２００７０７）。色谱甲醇（美国
ｓｉｇｍａ，批号ｗｘｂｂ１９１４ｖ），超纯水，其余试剂均为分
析纯。
２　方法与结果
２．１　色谱条件　色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）；流动相：甲醇－０．１％磷酸水溶液（４９∶
５１）［１１－１３］；流速：１ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：２５℃；检测波长：２５４
ｎｍ；进样量：１０μＬ。在此色谱条件下，样品中芦丁、
槲皮素出峰时间（ｔＲ）分别为６．０６３、１６．４６２ｍｉｎ，并与
其他峰均能达到基线分离，色谱图见图１、２。
１：芦丁；２：槲皮素
图１　混合对照品高效液相色谱图
２．２　对照品溶液制备　精密称取芦丁对照品
２５ｍｇ，置于２５ｍＬ的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释
至刻度，摇匀，得１ｍｇ／ｍＬ的储备液。分别吸取
１ｍｇ／ｍＬ芦丁对照品储备液１、２、３、４ｍＬ，置于
５ｍＬ的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，
得到０．２、０．４、０．６、０．８、１．０ｍｇ／ｍＬ芦丁系列溶液。
精密称取槲皮素对照品１０ｍｇ，置于５０ｍＬ的容量
瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到
０．２ｍｇ／ｍＬ槲皮素溶液，吸取１ｍＬ槲皮素溶液置
于１０ｍＬ容量瓶中得到２０μｇ／ｍＬ储备液。分别吸
取槲皮素储备液０．４、１、２、３、４ｍＬ，置于１０ｍＬ容
量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到０．８、
２、４、６、８μｇ／ｍＬ的槲皮素系列溶液。
１：芦丁；２：槲皮素
图２　供试品高效液相色谱图
２．３　供试品溶液制备　精密称取西伯利亚接骨木
粉末（过６０目筛）０．５ｇ，加１５ｍＬ　６０％乙醇，称重，
超声提取３０ｍｉｎ，补足失重，取上清液，以０．２２μｍ
滤膜过滤，得供试品溶液。
２．４　线性关系考察　将芦丁、槲皮素对照品储备液
采用甲醇溶液稀释成０．２、０．４、０．６、０．８、１．０ｍｇ／
ｍＬ的芦丁标准溶液和０．８、２、４、６、８μｇ／ｍＬ的槲皮
素标准溶液。分别吸取１０μＬ进样。以浓度 （Ｘ）为
横坐标，峰面积（Ｙ）为纵坐标，进行回归分析。结果芦
丁回归方程为Ｙ＝２．１×１０７　Ｘ－４９８　６５６（ｒ＝０．９９９
９）；槲皮素回归方程为Ｙ ＝２３　６８１　Ｘ＋４３６．５（ｒ＝
０．９９９　７）。表明芦丁在０．２～１．０ｍｇ／ｍＬ浓度范围
内线性关系良好，槲皮素在０．８～８μｇ／ｍＬ浓度范
围内线性关系良好。
２．５　精密度试验　取芦丁对照品溶液、槲皮素对照
品溶液连续进样６次，每次进样１０μＬ，测定峰面
积，计算 ＲＳＤ，结果芦丁、槲皮素 ＲＳＤ 分别为
０．６２％、０．７９％，表明测定的精密度良好。
２．６　稳定性试验　取同一份西伯利亚接骨木样品
溶液，分别于０、４、８、１２、２４、４８ｈ测定峰面积，计算
含量，结果芦丁 ＲＳＤ＝１．９４％，槲皮素 ＲＳＤ＝
２．３７％，表明样品在４８ｈ内保持稳定。
２．７　重复性试验　精密称取同一批西伯利亚接骨
木样品（富蕴）６份，每份约０．５ｇ，按“２．３”项下制备
样品溶液，分别进样１０μＬ，测定峰面积，计算含量，
结果芦丁ＲＳＤ＝２．５８％，槲皮素ＲＳＤ＝２．８２％，表
明本方法重复性好。
２．８　加样回收率试验　精密称取已知含量的药材
粉末（芦丁１３．３ｍｇ／ｇ，槲皮素０．１９８　５ｍｇ／ｇ），分别
４６１ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３７卷　
精密加入一定量的芦丁和槲皮素对照品，按“２．３”项
下方法制备样品溶液，进样１０μＬ，结果芦丁平均回
收率为１００．３８％，ＲＳＤ＝２．０４％ （ｎ＝９）；槲皮素平
均回收率９９．２３％，ＲＳＤ＝０．９６％ （ｎ ＝９），见表
１、２。
表１　芦丁回收率测定结果
称样
量／ｇ
样品含
量／ｍｇ
加入
量／ｍｇ
测得
量／ｍｇ
回收
率／％
平均回收
率／％
ＲＳＤ／％
０．２５０　１　 ３．３２６　 ２．６７０　 ６．００９　 １００．４９
０．２５１　１　 ３．３４０　 ２．６７０　 ６．０８９　 １０２．９６
０．２５１　９　 ３．３５０　 ２．６７０　 ６．０９５　 １０２．８１
０．２５２　４　 ３．３５７　 ３．３５２　 ６．７０１　 ９９．７６　 １００．３８　 ２．０４
０．２５０　７　 ３．３３４　 ３．３５２　 ６．６５４　 ９９．０５
０．２５３　１　 ３．３６６　 ３．３５２　 ６．６２９　 ９７．３４
０．２５１　５　 ３．３４５　 ４．０２８　 ７．２９８　 ９８．１４
０．２５２　２　 ３．３５４　 ４．０２８　 ７．３９８　 １００．４０
０．２５３　５　 ３．３７２　 ４．０２８　 ７．５０１　 １０２．５１
表２　槲皮素回收率测定结果
称样
量／ｇ
样品含
量／μｇ
加入
量／μｇ
测得
量／μｇ
回收
率／％
平均回收
率／％
ＲＳＤ／％
０．２５０　１　 ４９．６４　 ３９．５３　 ８９．０１　 ９９．６０
０．２４７　９　 ４９．２１　 ３９．５３　 ８８．６３　 ９９．７２
０．２４８　８　 ４９．３９　 ３９．５３　 ８８．３９　 ９８．６６
０．２４９　３　 ４９．４９　 ４９．３５　 ９８．５１　 ９９．３３
０．２４８　５　 ４９．３３　 ４９．３５　 ９８．１２　 ９８．８７　 ９９．２３　 ０．９６
０．２５０　５　 ４９．７２　 ４９．３５　 ９９．６９　 １０１．２６
０．２４９　８　 ４９．５９　 ５９．１０　 １０８．１７　 ９９．１２
０．２４９　０　 ４９．４３　 ５９．１０　 １０７．７５　 ９８．６８
０．２４８　３　 ４９．２９　 ５９．１０　 １０７．１１　 ９７．８３
２．９　样品测定结果　按“２．３”项下方法制备样品溶
液，每批平行３份，进样１０μＬ，测定芦丁和槲皮素
含量，芦丁含量为７．７８５～１３．３００ｍｇ／ｇ，槲皮素含
量为０．０９７　１～０．１９８　５ｍｇ／ｇ，见表３。
表３　不同产地西伯利亚接骨木中芦丁，槲皮素含量
测定结果（ｎ＝３）
样品产地 芦丁／（ｍｇ／ｇ） ＲＳＤ／％ 槲皮素／（ｍｇ／ｇ） ＲＳＤ／％
北屯 ７．７８５　 ０．７０　 ０．１０８　０　 ０．９１
富蕴 １３．３００　 ０．２５　 ０．１９８　５　 ２．１８
小东沟 ７．９９５　 ２．８２　 ０．０９７　１　 ２．５９
福海 ９．５５０　 ０．８２　 ０．１８２　８　 ２．７１
３　结论
通过４个产地间芦丁、槲皮素含量比较，发现富
蕴地区样品芦丁和槲皮素均高于其他产区。小东沟
样品槲皮素含量最低，北屯样品芦丁含量最低。各
产地间西伯利亚接骨木中芦丁、槲皮素含量存在差
异，除了存在地域影响外，还与样品生长时间及采集
时间有一定关系，所采样品并没有统一采集，所以样
品中有当年枝及前一年枝，这对含量测定结果也存
在影响。
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［收稿日期：２０１３－０９－１１］
（本文编辑　施洋）
５６１　第２期 李　莉，等：ＨＰＬＣ法测定西伯利亚接骨木中槲皮素、芦丁的含量