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猫须草水提取工艺研究



全 文 :药 物 研 究
The medicine study
作者简介:杨江媛,E - mail:315942197@ qq. com
猫须草水提取工艺研究
杨江媛
云南省中医医院,云南 昆明 650000
【摘 要】 目的:考察猫须草的最佳提取工艺。方法:以猫须草提取物中总黄酮的含量为指标,对提取工艺进行考察,以确定猫须
草的最佳提取工艺。结果:15 倍量的水浸泡药材 10h后,80℃加热提取 2 次,每次 3h。结论:收率较好,该工艺条件可行。
【关键词】 猫须草;总黄酮;提取;收率
【中图分类号】R284. 2 【文献标志码】A 【文章编号】1007 - 8517 (2015)04 - 0024 - 02
猫须草 Clerodendranthus spicatus (Thunb.)C. Y. Wu又
名肾茶、牙努秒、猫须公,为唇形科肾茶属植物。该属植
物全世界仅有 5 种,产于东南亚的印度尼西亚、马来西亚
等东南亚国家,澳大利亚有少量分布。我国仅有猫须草一
种,主要分布于广东、海南、广西南部、云南南部、台湾
及福建,常生于林下潮湿处。从上世纪起,我国多地引种
栽培,其中以云南种植最多[1]。猫须草清凉消炎,可全草
入药,味苦,性凉。书中记载猫须草用以治疗小便热、涩、
疼痛等泌尿系统疾病。民间认为猫须草具有利尿、抗菌、
消炎、溶石、排石和抗肿瘤作用,用于治疗急慢性肾炎、
膀胱炎、尿路结石、风湿下肢关节炎和咽炎有特殊疗效[2]。
有文献报道猫须草中的主要化学成分为黄酮类化合物,为
控制猫须草的质量,提高猫须草中有效成分的含量,对猫
须草的提取工艺进行研究和优化,为猫须草的优质开发利
用提供理论依据。
1 材料
1. 1 试验器材 电子天平 (十万分之一,赛多利斯科学仪
器有限公司)、电子天平 (万分之一,赛多利斯科学仪器有
限公司)、NKSY型智能恒温水浴锅 (常州诺基仪器有限公
司)、3695 -Ⅱ型紫外分光光度计 (菲尔伯恩实业发展有限
公司)、昆山超声清洗仪 (安徽东南仪诚试验室设备有限公
司)
1. 2 对照品 芦丁 (中国食品药品检验所,批号:121268
- 200904)
1. 3 药材 猫须草 (采购自昆明市菊花村中药材市场)
2 方法与结果
2. 1 总黄酮含量测定方法
2. 1. 1 对照品溶液制备 精密称取芦丁对照品 16. 42mg,
加甲醇适量置水浴上微热使溶解,放冷,甲醇定容至 50ml,
摇匀,即得浓度为 0. 3284mg /ml的芦丁对照品溶液。
2. 1. 2 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0. 5、1、
1. 5、2、3、4、5、6ml,分别置 25ml 量瓶中,各加水至
6. 0ml,加 5% 亚硝酸钠溶液 1ml,混匀,放置 6min,加
10%硝酸铝溶液 1ml,摇匀,放置 6min,加氢氧化钠试液
10ml,再加水至刻度,摇匀,放置 15min,以相应的试剂为
空白,照紫外 -可见分光光度法 (附录ⅤA),在 509nm波
长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘
制标准曲线,结果见表 1。
以芦丁含量 (μg /ml)为横坐标,吸光度为纵坐标,
绘制出总黄酮的标准曲线为:Y = 0. 0107X + 0. 0012,R2 =
0. 9993,线性范围为 6. 568 ~ 78. 816μg /ml。
表 1 总黄酮含量测定标准曲线的绘制
芦丁含量 /μg·ml -1 吸光度 芦丁含量 /μg·ml -1 吸光度
6. 568 0. 070 39. 408 0. 416
13. 136 0. 142 52. 544 0. 555
19. 704 0. 214 65. 680 0. 715
26. 272 0. 295 78. 816 0. 849
2. 1. 3 供试品制备 称取浸膏适量,精密称定,置 25 ml
锥形瓶中,精密称定,加甲醇 10 ml 超声处理 10 min,放
冷,精密称定,甲醇补足重量,摇匀。精密量取 5 ml,置
10 ml量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密量取 3ml,置 25 ml
量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自 “加水至 6ml”
起依法测定吸收度从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的
浓度 (μg /ml),计算即得。
2. 1. 4 水提液供试品溶液的制备 称取各个单因素考察后
的干浸膏约 0. 5g至锥形瓶中,精密称定,50%甲醇水 30ml
浸泡 1h,超声提取 30 min,放冷,过滤,回收滤液至 5ml,
用 0. 45μm的微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
2. 2 药材含量测定
2. 2. 1 样品制备 称取猫须草药材 2 份,每份 5g,加入
100ml甲醇浸泡 4h,80℃加热提取 1h,过滤,滤渣再加入
100ml甲醇同法提取 1h,反复提取 4 ~ 5 次至提取完全,合
并滤液,减压回收溶剂,浓缩液转移至蒸发皿中,挥干溶
剂至恒重,称定浸膏重量,待测。
2. 2. 2 药材中总黄酮的含量 按照 2. 1. 3 项下总黄酮含量
测定的方法,测定药材中总黄酮的含量,测定结果见表 2。
表 2 猫须草中总黄酮含量
项目 药材重量 / g 吸光度 含量 /mg 百分含量 /%
1 5 0. 602 401. 2 4. 012
2 5 0. 598 378. 3 3. 783
均值 5 0. 600 389. 8 3. 898
2. 3 提取工艺考察
2. 3. 1 浸泡时间 取药材 10g,按照提取工艺,加入 10 倍
量水分别浸泡药材 1、2、4、6、10h后,70℃温浸提取 2h,
过滤,收集滤液,滤渣同法提取 1 次,合并滤液,减压回
收溶剂至干,测定浸膏出膏率及总黄酮含量,滤渣烘干备
用,结果见表 3。
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中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
加权评分 =干浸膏含量 × 50% +总黄酮含量 × 50%
表 3 数据表明,当药材提取前浸泡 10h,浸膏含量及总
黄酮含量均较高,加权评分最大,因此药材浸泡时间
为 10h。
表 3 浸泡时间考察
浸泡时间 /h 1 2 4 6 10
干浸膏含量 / g 3. 001 3. 254 3. 116 3. 255 3. 447
总黄酮含量 /% 3. 05 3. 05 3. 12 2. 99 3. 41
加权评分 3. 026 3. 152 3. 118 3. 122 3. 428
2. 3. 2 提取温度 取药材 10g,按照提取工艺,加入 10 倍
量水浸泡药粉 10h 后,分别于 40、50、60、70、80℃浸渍
提取 2h,过滤,收集滤液,滤渣同法提取 1 次,合并滤液,
减压回收溶剂至干,测定浸膏出膏率及总黄酮含量,滤渣
烘干备用,结果见表 4。
表 4 提取温度考察
提取温度 /℃ 40 50 60 70 80
干浸膏含量 / g 2. 878 2. 905 2. 951 3. 112 3. 142
总黄酮含量 /% 2. 11 2. 13 2. 35 2. 45 2. 66
加权评分 2. 494 2. 518 2. 650 2. 781 2. 901
表 4 数据表明,当药材提取温度为 80℃时,浸膏含量
及总黄酮含量均较高,加权评分最大,因此药材提取温度
为 80℃。
2. 3. 3 水用量 取药材 10g,按照提取工艺,分别加入 6、
8、10、12、15 倍量水浸泡药粉 10h 后,80℃加热提取 1h,
过滤,收集滤液,滤渣同法提取 1 次,合并滤液,减压回
收溶剂至干,测定浸膏出膏率及总黄酮含量,滤渣烘干备
用,结果见表 5。
表 5 水用量考察
水用量 /BV 6 8 10 12 15
干浸膏含量 / g 2. 845 2. 972 2. 975 3. 010 3. 228
总黄酮含量 /% 3. 01 2. 98 3. 25 3. 32 3. 30
加权评分 2. 928 2. 976 3. 112 3. 165 3. 264
表 5 数据表明,当提取溶剂为药材的 15 倍量时,浸膏
含量及总黄酮含量均较高,加权评分最大,因此水用量为
药材的 15 倍量 /次。
2. 3. 4 提取时间 取药材 10g,按照提取工艺,加入 15 倍
量水浸泡药粉 10h 后,分别 80℃加热提取 0. 5、1. 0、1. 5、
2. 0、3. 0h,过滤,收集滤液,滤渣同法提取 1 次,减压回
收溶剂至干,测定出膏率及总黄酮含量,滤渣烘干备用,
结果见表 6。
表 6 提取时间考察
提取时间 /h 0. 5 1. 0 1. 5 2. 0 3. 0
干浸膏含量 / g 3. 005 2. 124 3. 225 3. 341 3. 329
总黄酮含量 /% 2. 92 2. 99 3. 02 3. 12 3. 17
加权评分 2. 962 2. 557 3. 122 3. 230 3. 250
表 6 数据表明,当药材提取时间为 3h时,浸膏含量及
总黄酮含量均较高,加权评分最大,因此药材提取时间为
3h,此时提取率较高且经济效益也高。
2. 3. 5 水提优选试验方案 由以上单因素考察的结果可
知,药材的水提最佳提取工艺条件为:15 倍量的水浸泡药
材 10h后,80℃加热提取 2 次,每次 3h。
2. 4 水提取小试结果 取药材 5 份,每份 10g,加入 15 倍
量的水浸泡药材 10h 后,80℃加热提取 3h,过滤,收集滤
液,滤渣同法提取 1 次,合并滤液,减压回收溶剂至干,
测定浸膏出膏率及总黄酮含量,滤渣烘干备用,结果见
表 7。
表 7 水提小试结果
提取药材编号 干浸膏含量 / g 总黄酮含量 /% 加权评分
1 3. 225 3. 04 3. 132
2 3. 231 3. 10 3. 166
3 3. 331 3. 08 3. 206
4 3. 209 3. 18 3. 194
5 3. 254 3. 20 3. 227
均值 3. 250 3. 12 3. 185
RSD /% 1. 48 2. 17 1. 16
由表 7 看出,水提工艺重复提取 5 份药材 RSD 值满足
要求,表明该提取工艺稳定可行。
3 结论
对猫须草药材进行水提取后,对提取物中的总黄酮含
量进行测定后发现提取物中总黄酮含量提高了 2 ~ 3 倍。但
是由于黄酮苷类易溶于水,而黄酮类化合物大多易溶于醇
类,为进一步提高猫须草中总黄酮的提取率,下一步实验
拟对水提取后的猫须草药渣进行低温干燥处理后再次进行
醇提工艺的考察,以提高药材的利用率。
猫须草是我国西南地区特有的少数民族药,经过长期
实践,猫须草在治疗泌尿系统疾病方面具有显著的疗效。
然而,由于缺乏系统完整的研究,大多数民族药还停留在
地区甚至更小的范围内用药,一些具有显著疗效的民族药
还没有得到充分的推广使用。对猫须草提取工艺的研究,
不仅有利于民族医药的推广使用,而且也对民族医药的发
展起到极大的推动作用。
参考文献
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药学,1995,7 (3):3 - 4.
(收稿日期:2014. 11. 20)
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中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy