全 文 :第 32卷 第 5期 肇 庆 学 院 学 报 Vol.32, No.5
2011年 9月 JOURNAL OF ZHAOQING UNIVERSITY Sep. 2011
收稿日期:2011-07-06
基金项目:肇庆市科学技术创新计划项目(2011G210)
作者简介:赵建芬 (1974-),女 ,广东高要人 ,肇庆学院化学化工学院高级实验师 ,硕士 .
落葵果实中总黄酮提取条件的研究
赵建芬, 董 基, 严子军, 林奕云
(肇庆学院 化学化工学院, 广东 肇庆 526061)
摘 要:采用超声波提取法,通过正交实验确定从落葵果实中提取总黄酮的最佳工艺条件 ,并用比色法测定
提取物中总黄酮的含量 .结果表明,最佳条件是以体积分数为70%的乙醇为提取剂、料液比为1:20、提取时间为35
min.在此条件下,落葵果实总黄酮提取量为5.3 mg蛐g.
关键词:落葵果实; 总黄酮; 超声提取; 正交实验
中图分类号:TS255.2 文献标志码:A 文章编号:1009-8445(2011)05-0046-03
黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物 ,其在植物体内大部分与糖结合 ,一部分以游离
形式存在.黄酮类成分具有抗氧化、增强免疫力、降血脂 [1]、血糖等功效 [2],它已成为近年来的研究热点 [3-4].
落葵为落葵科落葵属植物(Basella rubra L.),又名胭脂菜 .其成熟果实为紫黑色浆果,含有黄酮类
化合物 .目前,尚未见到采用超声提取的方法从落葵果实中提取黄酮类化合物的研究报道 .本文采用超
声提取法,通过正交实验对影响落葵果实总黄酮提取效率的乙醇浓度、料液比、提取时间三因素进行考
察,选择最佳提取条件 ,并且采用比色法以芦丁为对照品对落葵果实中总黄酮的含量进行测定 .目的在
于寻找较为简单、快速和有效的提取方法,为以后落葵中黄酮类天然物质的研究和开发提供借鉴参考 .
1 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器
实验所用材料、试剂及仪器如下:红花落葵成熟果实(采自高要市莲塘镇农家菜园);芦丁对照品
(中国药品生物制品检定所,供含量测定用)、体积分数为95%的乙醇、亚硝酸钠,硝酸铝、氢氧化钠等(均
为A.R.级);SB25-12D台式超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司);UV蛐VIS916型紫外-可见
分光光度计(澳大利亚,GBC公司);S22蛐S22PC可见分光光度计(上海棱光技术有限公司);SHZ-D循环
水式真空泵等 .
1.2 标准溶液与样品液的制备
精确称取芦丁对照品0.005 2 g,用体积分数为70%的乙醇溶解并定量转移至25 mL的容量瓶中定容
至刻度,即得浓度为0.208 0 g蛐L的芦丁标准品溶液 .
称取新鲜落葵果实适量,破皮,置于100 mL带塞锥形瓶中 .按实验设计条件进行超声提取,提取液减
压抽滤,取其滤液.将滤液定量转移至50mL的容量瓶中,用相同浓度的乙醇溶液定容至刻度,即得样品液.
1.3 实验方法
1.3.1 芦丁标准曲线的绘制 [5]
精密量取芦丁标准溶液1.50 mL,置于10 mL的容量瓶中,加入体积分数为70%的乙醇3.5 mL.加质量
浓度为5%的亚硝酸钠溶液0.30 mL,摇匀,放置6 min;再加入质量浓度为10%的硝酸铝溶液0.30 mL,摇
匀,放置6 min;加入1.0 mol蛐L的氢氧化钠溶液4.00 mL,加水至刻度,摇匀,放置15 min.以试剂空白为参
第 5期 赵建芬等:落葵果实中总黄酮提取条件的研究
表1 正交实验因素和水平
比,在400~600 nm波长范围内对显色液进行扫描 .结果显示芦丁标准品在510 nm处有最大吸收,故选择
510 nm为检测波长.
取系列体积的芦丁标准溶液,按上述显色反应体系配制成系列浓度的芦丁显色液,以试剂空白为
参比,在波长510 nm处测定各溶液的吸光度,以芦丁浓度C(g蛐L)为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准
曲线 .结果表明:在0.008 32~0.049 9 g蛐L范围内,回归方程为A=12.878C-0.001 9,相关系数γ=0.998 5,线
性关系良好.
1.3.2 落葵总黄酮提取工艺条件的选择
落葵总黄酮提取工艺流程如下:落葵果实→
破皮→乙醇超声提取→减压过滤→取滤液→比
色法测定总黄酮的含量 .
分别对提取剂浓度、料液比和提取时间进行
单因素实验 .根据实验结果 ,设计了L9(33)正交实
验,对提取剂浓度、料液比和提取时间3个因子在
3个不同水平进行优选(见表1).
2 结果与讨论
2.1 检测方法精密度的测定
取适当浓度的芦丁显色液,在已建立的检测方法下重
复测定6次,结果如表2所示.
由表2数据分析可知RSD小于0.2%,说明该方法具有
良好的精密度,可将其用于测定同一匀质样品 .
2.2 正交实验确定落葵总黄酮的提取工艺条件
分别取样品液2.00 mL,按所建立的比色法测其吸光度
A值,分别计算落葵果实中总黄酮的含量,结果如表3所示.
表3 正交实验结果
由表3正交实验结果可知,影响落葵总黄酮提取因子的主次顺序为B>A>C,即料液比是落葵总黄
酮提取的主要影响因素,其次是乙醇浓度和提取时间 .综合分析正交实验结果,发现总黄酮超声提取条
件最佳组合为A2B1C3,即以体积分数为70%的乙醇为提取剂,料液比为1:20,提取时间为35 min.
(A)/%
(B)
(C)/min
1 60 1:20 15
2 70 1:30 25
3 80 1:40 35
表2 精密度的实验结果(n=6)
A /(g· 1)
1 0.534 0.041 6
2 0.536 0.041 7
3 0.533 0.041 6
4 0.535 0.041 7
5 0.536 0.0417
6 0.534 0.041 6
RSD/% 0.13
A B C /g A
/(g·L1)
/(mg·g 1
1 1 1 1 1.052 2 0.204 0.016 0 3.8
2 1 2 2 1.073 8 0.192 0.015 1 3.5
3 1 3 3 1.036 8 0.261 0.020 4 4.9
4 2 1 2 1.028 0 0.271 0.021 2 5.2
5 2 2 3 1.025 9 0.198 0.015 5 3.8
6 2 3 1 1.083 7 0.243 0.019 0 4.2
7 3 1 3 1.052 3 0.221 0.017 3 4.1
8 3 2 1 1.061 9 0.241 0.018 9 4.4
9 3 3 2 1.062 5 0.190 0.014 9 3.5
K1 4.1 4.4 4.1
K2 4.4 3.9 4.1
K3 4.0 4.2 4.3
R 0.4 0.5 0.2
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肇庆学院学报 第 32卷
2.3 提取工艺的验证实验分析
为进一步考察最佳提取条件的稳定性和合理性,称取适量的落葵果实,在最佳工艺条件下进行3次
平行实验,用所建立的比色法分别测定落葵果实总黄酮的含量 .结果如表4所示.
表4 最佳工艺的验证实验(n=3)
由表4数据分析可知,在优化条件下,提取的落葵总黄酮量均高于上面正交实验的9个实验点,所以
最佳提取条件A2B1C3是合理的而且该工艺稳定可行,从而证明了优选结果的科学性 .
3 结论
通过正交实验,确定了乙醇超声提取落葵果实总黄酮含量的最佳工艺条件为A2B1C3,即以体积分
数为70%的乙醇为提取剂、物料比为1:20、提取时间为35min,在此条件下提取出的总黄酮含量为5.3 mg蛐g.
总的来说,超声波提取法简单、易操作,在优化条件下落葵果实总黄酮提取率高,实验的重复性好,具有
一定的实用价值 .
参考文献:
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Study on the Extraction Conditions of Total Flavonoids from
Fruit of Basella rubra L.
ZHAO Jianfen, DONG Ji , YAN Zijun, LIN Yiyun
(College of Chemistry and Chemical Engineering, Zhaoqing University, Zhaoqing, Guangdong 526061, China)
Abstract: The orthogonal experiment to screen out the optimal extraction conditions of total flavonoids
from fruit of Basella rubra L. by ultrasonic extraction was utilized. The total flavonoids content extracted
from fruit of Basella rubra L. was determined by spectrophotometry. The results showed that the optimal ex-
traction conditions: Extractant is 70% ethanol, solid to liquid ratio is 1:20,the extraction time is 35 minutes.
Under the extraction conditions ,the yield of total flavonoids from fruit of Basella rubra L. was 5.3 mg.g-1.
Key words: fruit of Basella rubra L.; total flavonoids; ultrasonic extraction; orthogonal design
(责任编辑:陈 静)
/g A
/(g·L1)
/(mg·g1) /(mg·g 1)
1 0.994 6 0.269 0.021 0 5.3
2 1.040 5 0.281 0.022 0 5.3
3 1.014 9 0.275 0.021 5 5.3
5.3
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