全 文 ：药物分析杂志 h C inJ P ha r mAn a l2 0) ( 5
,
2 5 ( 2 )
胶束毛细管电泳测定小野芝麻中毛蕊花糖昔的含量
蒋受军` , 鲁静“ ,林瑞超 , , 马双成 2
( 1
. 广西药品检验所 南宁 53 X() 2 1 ;2 . 中国药品生物制品检定所 北京 1侧X )50)
摘要 目的 : 建立测定小野芝麻中毛蕊花糖昔含量的毛细管电泳方法 。 方法 :采用胶束毛细管电泳法 ( M E CC ) ,未涂层弹性石
英毛细管 (75 林m x 56 c m ,有效长度 50 c m ) ;压力进样 ,压力 : 138 kP a ,进样时间 : 10 5 ; 电压 :巧 kv ;柱温 : 25 ℃ ;检测波长 : 350
nm
;运行缓冲液 : 50 ~ ol
·
L
一 ’ 硼酸溶液 一 50 m m o l · L 一 ’磷酸二氢钠溶液 一 20 m n 10 1 · L 一 `脱氧胆酸钠溶液 (l m ol · L 一 ’ 氢氧化
钠溶液调 p H = 8 . 5 ) ;运行时间 : 35 而 n 。 结果 : 测得平均回收率为 % . 8% , RS D 为 1 . 1% 。 结论 : 方法准确可靠 ,适合于小野芝
麻中毛蕊花糖昔的含量测定 。
关键词 :小野芝麻 ;毛蕊花糖昔 ;胶束毛细管电泳
M E C C D e t e r m l n s it o n o f V e r b 8 S C 0 is d e i n
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( 1
.
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.
N at i o n al nI
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A b s t r a e t o bj ec it
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s h an H P C E m
e ht o d fo r ht e d e te mr i
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.
M e t h o ds
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.
50
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L
一 ` b o ir e a e id 一 5 0 m m o l · L 一 ’ s o d ium d
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s o d i u m d e o环 e h o l i。 。 e id ( adj u s t e d p H t。 s , 5 w iht 1 m o l · L 一 ` s o d iu m h y dro x id e ) w a s u s e d a s m n n i n g b u fe r
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e er e o v e理 w as 9 6 . 8% ( R SD = 1 . 1% ) .
C o cn l u s i o n
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,
an d s u i t ab l e fo r ht e d e t e mr i
n at i o n o f v e br as e o s id e i n C a l e o b d o l o n c h i n e n s e
.
K e y w o r ds : G a le o bd o l o n e h i n e n s e ; v e r b a s e o s id e : M E C C
小野芝麻为唇形科植物小野芝麻 ` al eo bdo lon
c h ien n s e ( B
e n ht
·
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.
Y
.
W u 的干燥全草 。 性寒味苦 ,
归肝 、脾 、 肺经 。 具清热解毒 ,凉血止血 , 止咳之功
效川 。 在民间 ,用于治疗急性扁桃体炎 、气管炎 · 肺
结核 、上呼吸道出血及肺部出血等症 ,疗效显著 。 经
查有关文献资料 , 国内外尚未有对小野芝麻化学成
分 、药理作用进行研究的报道 。 我们对小野芝麻的
化学成分进行了研究 ,从小野芝麻药材醋酸乙醋提
取物中分离得到了毛蕊花糖昔 、 金丝桃昔等成分 。
文献报道的毛蕊花糖昔的分析方法有 HPL c 法〔2例 ,
未见有关毛细管电泳的应用 , 本文利用胶束毛细管
电泳 ( M E C C ) ,对小野芝麻药材中毛蕊花糖昔的含
量进行测定 ,为控制药材的内在质量提供一种新的
分析方法 。
1 仪器与试药
美国 B ec km an P/ A C E 5 0 型毛细管电泳仪 ,
D A D 检测器 ,弹性石英毛细管 ( 75 协m x 56 c m , 有效
长度 50 c m ,河北永年光导纤维厂 ) 。
毛蕊花糖昔对照品 、懈皮素对照品 (内标物 )及
金丝桃昔对照 品均由中国药品生物制品检定所提
供 。
胆酸钠及十二烷基磺酸钠 ( SD s) 为 iS gm a 公司
产品 ,脱氧胆酸钠为北京怀柔生物研究开发所产品 。
硼酸 、磷酸二氢钠均为分析纯 ,实验中配制缓冲液和
样品液所用的水均为高纯水 ( M i l 一 Q ) 。
小野芝麻采集于浙江 、福建 、 江西等地 , 由中国
药品生物制品检定所标本馆张继副主任药师鉴定 。
2 分离条件
进样方式 ,压力进样 , 压力 13 8 k p a , 进样 10 5 ;
分离电压为 巧 k V (恒压分析 ) ;柱温 25 ℃ ;检测波
长 3 5 0 n m ;以 5 0 un ol
·
L
一 ` 硼酸溶液 一 5 0 m m o l ·
L
一 ’磷酸二氢钠溶液 一 20 ~ l
·
L
一 ’脱氧胆酸钠溶
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2005. 02. 003
药物分析杂志 Chin J h Pr m aAn l a2( ) 0 5
,
25 ( 2 )
液 (l m ol · L 一 `氢氧化钠溶液调 p H 至 8 . 5) 为运行
缓冲液 ,每次运行前毛细管用 0 . 1 m ol · L 一 ’ 氢氧化
钠溶液冲洗 3 m in ,去离子水冲洗 2 m in , 运行缓冲液
冲洗 3 m i n 。
3 溶液制备
3
.
1 内标溶液 取 50 ℃真空干燥至恒重的懈皮
素对照品 24 . 0 m g ,加 50 % 的甲醇制成每 l mL 含
0
.
12 m g 的溶液 , 即得 。
3
.
2 对照品储备液 精密称取毛蕊花糖昔对照品
8 0
.
80 m g
,加内标溶液制成每 1 m L 含 1 . 6 16 m g 的
溶液 , 即得 。
3
.
3 样品溶液 取本品 2 9 , 精密称定 , 置索氏提取
器中 ,加氯仿 一 石油醚 ( so 一 60 ℃ ) ( 4 : 6 ) 的混合液
10 m L
,水浴中提取至溶液近无色 , 弃去溶液 ,残渣
挥尽溶剂 , 加甲醇 90 m L , 水浴中提取至溶液近无
色 ,分取甲醇液 ,置 or o m L 量瓶中 ,用适量甲醇洗涤
容器 ,溶液并人量瓶中 ,并定容至刻度 ,摇匀 ,精密量
取 50 m L ,置三角瓶中 , 减压浓缩至干 , 用 20 m L 水
分数次溶解残渣 , 加于已处理好的聚酞胺柱 (玻璃
柱 ,直径 1 . 5 e m , 聚酞胺 2 9 , 9 0 一 1 8 0 目 ,水装柱 )
上 。 先用 50 m L 水超声洗涤容器 ,加于柱上洗脱 ,弃
去水液 ;再用 10 % 乙醇溶液 30 m L 超声洗涤容器 ,
加于柱上洗脱 ,弃去洗脱液 ,再用 50 % 乙醇溶液 10
m L 超声洗涤容器 ,加于柱上洗脱 , 收集洗脱液 ,减压
浓缩至干 ,残渣加甲醇溶解并定容至 5 m L ,摇匀 ,精
密吸取 1 . 0 m L , 置蒸发皿中蒸干 , 精密加人内标溶
液 4 . 0 m L ,超声使溶解 , 0 . 45 林m 的微孔滤膜滤过 ,
即得 。
4 线性关系
分别精密量取对照品储备液 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 10 mL ,
分置 10 r l d二量瓶中 ,加内标溶液稀释至刻度 ,摇匀 , 即
1
得 0 . 16 16 , 0 . 3 2 32 , 0 . 4 84 8 , 0 . 砚砚 , 0 . 8 0 8 , 1 . 6 16 m g ·
m L
一 `系列浓度的对照品溶液 , 进样测定 ,测量峰面积
值 。 以对照 品与 内标峰面积 的 比值作 为纵坐标
( Y )
, 以对照品的浓度 (mg · mL 一 ’ )为横坐标 ( X )绘
制标准曲线 。 经回归处理 ,得回归方程为 :
Y = 0
.
3 8 14 X + 0
.
3 3 3 8 r = 0
.
9 9 9 3
结果表明 , 毛蕊花糖昔在 0 . 16 16 一 1 . 6 16 mg · m L 一 ’
浓度范围内线性关系 良好 。
5 精密度试验
在上述色谱条件下 , 取上述 0 . 4 848 m g · m L 一 `
毛蕊花糖昔对照品溶液连续进样 5 次 ,毛蕊花糖昔
与内标物的峰面积比的 R s D 二 0 . 54 % 。
6 重复性试验
精密称取江西产样品 2 . 0 9共 5 份 ,依法测定 。
含量的平均值为 1 . 5 4% , R S D = 1 . 7% ( n = 5 ) 。
7 稳定性试验
取同一样品溶液 (江西产 ) , 放置 0 , 1 , 2 , 4 , 12
h
,分别测定样品的含量 , 含量的平均值为 1 . 5 % ,
R SD = 0
.
9 9%
。
8 回收率
精密称取含量为 1 . 54 % 江西产的样品 1 . 0 9 ,精
密加人 0 . 1侧拓 mg · fnL 一 ’ 毛蕊花糖昔对照品溶液 50
mL
,再加甲醇 O4 mL ,按样品提取 、 测定方法操作 ,测
得平均回收率 = % . 8% , SR D = 1 . 1% ( n = 5 ) 。
, 样品测定
取样品溶液 ,按上述方法测定 ,从标准曲线中计
算含量 。 结果浙江 、浙江乐清 、 福建 、江西产样品中
毛蕊花糖昔含量 ( n = 2) 分别为 0 . 45 % , 0 . 89 % ,
1
.
69 %
,
1
.
54 %
。 毛蕊花糖昔对照品 、小野芝麻样品
色谱图见图 1 。
习匕 - - - 二 - 一- - J - - - -目 ` 一一一 J一 - - - 日` -
0 10 20 30
A
0 10 2 0 30 它/` 1。
C
图 1 毛蕊花糖普对照品 ( )A 、 江西产小野芝麻样品 (无内标 ) ( B )及江西产小野芝麻样品 (加内标 ) ( )C HP C E 色谱图
F ig 1 Chlo m
a t o 『 aln s of v e br asc o s ide ( A )
,
~
p l e 6习 nI Ji an gx l 杭 ht ou t int enr al ,atn d田月 ( B ) an d s an l p l e 玩m Ji an g 肚 面 蕊记 w汕 in t e m al s t a n d田月
1
. 毛蕊花糖昔 ( v ebr asco s id e ) 2
. 金丝桃普 ( h y p~ d
e
) 3
. 搬皮素 (内标 ) (卿 e o et i n , i n t e m al 。atn dadl )
10 讨论
10
.
1 运行缓冲体系的选择 按常规的 M E C C 方
法 ,首先选择了 S D S 体系和胆酸钠体系为运行缓冲
体系 ,试验了不同浓度的 SD S 和胆酸钠及不同比例
药物分析杂志C h inJP h ~A n已 2) ( X 5
,
25 ( 2)
的添加剂 (如硼砂 , 磷酸二氢钠 , irT , 盐 , p 一环糊精
等 )和有机改进剂 ( 如甲醇 、 乙醇 、 正丙醇及乙睛
等 ) , p H 6 一 10 。 结果表明 : S D S 体系和胆酸钠体系
均无法使主成分峰与其他成分峰达到分离要求 。 最
后选择脱氧胆酸钠体系 , 以硼酸和磷酸二氢钠为添
加剂 ,使主成分峰与其他成分峰达到分离要求 ,且分
离时间较短 , 经过优化后 , 以 50 ~ ol
·
L
一 `硼酸溶
液 一 50 ~ ol
·
L
一 `磷酸二氢钠溶液 一 20 mnI o l · L 一 ’
脱氧胆酸钠溶液 (用 1 m ol · L 一 `氢氧化钠溶液调 p H
为 8 . 5 )分离效果最好 。
10
.
2 运行缓冲液 p H 的选择 运行缓冲液的 p H
既可改变溶质的结构 , 使溶质电离或呈中性状态又
可改变电渗流的大小 , 因此 , p H 对 C E 分离有较大
的影响 。 本文在保持其他条件不变的情况下改变
p H ( p H 用 1 m ol · L 一 `氢氧化钠溶液调节 ) 以考察
p H 对分离选择性的影响 , 见图 2 。 结果表明在 pH
7
.
5 一 9 范围内 ,主成分毛蕊花糖昔峰的迁移时间变
化不大 ,但金丝桃昔 (由金丝桃昔对照品定位 )等黄
酮类成分峰的迁移时间有较大的变化 , pH 为 8 . 5
时 ,主成分毛蕊花糖昔与金丝桃昔等黄酮类成分的
分离较理想 。
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2
t/ , 10
40 c/ . o l
. 目厂
图 3 脱氧胆酸钠浓度对迁移时间的影响
iF g 3 hT
e e压 e t fO ht e e o n e e n t l a ti o n fO d oe 材e ho il e 朋id o n ht e 而 -
『川 i o n it m e
1
. 毛蕊花糖昔 ( v ebr asc o s id e ) 2 . 金丝桃昔 ( h yp , s id e )
10 团
1 1 小结
1 1
.
1 根据上述实验 , 最后确定 “ 2 ” 项下的电泳条
件为最佳分离条件 。 在此条件下 , 毛蕊花糖昔出峰
快 ,与内标及其他成分基线分离 。
1 1
.
2 由于本品药用部位为全草 , 含有较多的叶绿
素等成分 ,在制备样品溶液时 , 采用聚酞胺柱 , 达到
纯化样品 、保护毛细管柱的目的 。
1 1
.
3 H PC E 法由于其高效快速的特点 , 改善了分
离效果 ,较 H PL C 法缩短 了分析时间 ( H PL C 法需用
时约 60 而 n ) 。
1 1
.
4 我们也建立了 H P LC 测定小野芝麻中毛蕊花
糖昔含量的方法 [ ’ 〕 ,结果浙江 、 浙江乐清 、 福建 、 江
西产样 品中毛 蕊花糖 昔含 量 ( n = 2 ) 分 别为
0
.
4 1%
,
0
.
9 6 %
,
1
.
7 6 %
,
1
.
5 6%
。
H P LC 法与 H P C E
法测定毛蕊花糖昔含量的结果基本一致 , H P C E 法
可以作为一种有效手段来控制小野芝麻药材的内在
质量 。
图 2 p H对迁移时间的影响
F ig 2 hT
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fe
e t Of p H
o n ht e
毛蕊花糖昔 ( v c rbasc os id e)
而群 a石。 n 6 m e
2
. 金丝桃昔 ( h刃邓 or s l d e)
10
.
3 脱氧胆酸钠浓度的影响 在其他条件不变的
情况下 ( 50 ~ ol
·
L
一 ’ 硼酸溶液 , 50 ~ l
·
L
一 `磷酸
二氢钠溶液 , 用 1 m ol · L 一 ’ 氢氧化钠溶液调 p H 为
8
.
5 )
,配制脱氧胆酸钠的浓度分别为 or , 20 , 30 , 40
m m ol
·
L
一 ’ 的运行缓冲液 ,考察脱氧胆酸钠浓度对
分离选择性的影响 , 见图 3 。 结果表明随着脱氧胆
酸钠浓度的升高 ,对主成分毛蕊花糖昔的峰迁移时
间影响不显著 ;但对其他黄酮类成分峰的迁移时间
有较大的影响 ,迁移时间随脱氧胆酸钠浓度增加延
长 ;电流值增大 。 结果 以脱 氧胆酸钠浓度为 20
m m ol
·
L
一 ’ 时主成分毛蕊花糖昔与其他黄酮类成分
达到基线分离 ,且分析时间较短 。
参考文献
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2X() 2
,
2 7 ( 4 )
: 2 63
(本文于 2X() 3 年 1 月 20 日修改回 )