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葎草的薄层色谱鉴别研究



全 文 :成都中医药大学学报
Journal of Chengdu University of TCM
2011 年 12 月第 34 卷第 4 期
Dec. 2011,Vol. 34,No. 4
葎草的薄层色谱鉴别研究
郭沛琳 马逾英 米小琴 卢晓琳
(成都中医药大学 药学院,四川 成都 610075)
摘 要:目的:建立葎草的薄层色谱鉴别方法。方法:以木犀草素对照品为对照,采用薄层色谱法进
行鉴别研究。结果:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,以甲苯-乙
酸乙酯-甲酸 (8∶ 2∶ 0. 5)展开后 Rf值适中,斑点清晰。结论:建立的薄层鉴别方法对葎草中木犀草素的
鉴别有较好的适应性,重现性好,为完善其质量标准奠定了基础。
关键词:葎草;木犀草素;薄层色谱
中图分类号:R282. 71;R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1004-0668 (2011)04-0078-03
基金项目:四川省科技厅基金项目资助 (编号:2009SZ0227).
作者简介:郭沛琳,女,1985 年生;硕士研究生;研究方向:中药品种、质量与资源研究。
Thin-Layer Chromatography of Herba Humuli Scandens
GUO Pei-lin,MA Yu-ying,MI Xiao-qin,et al
(College of pharmacy,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu,Sichuan 610075)
[Abstract] Objective:To establish a Thin-Layer Chromatography (TLC)identification method for Humuli Scandens. Method:
Using TLC with luteolin as the reference substance. Result:Both luteolin and Humuli Scandens had the same main spot and color on
the plate. The Rf value was moderate and the spot was clear by using toluence -ethyl acetate -formic acid (8∶ 2∶ 0. 5)as the developing
solvent substances. Conclusion:The method is adaptable and reproducible to identify luteolin of Herba Humuli Scandens,which pro-
vide a basis for the quality control of Herba Humuli Scandens.
[Key words] Herba Humuli Scandens;iuteolin;TLC
葎 草 为 桑 科 植 物 葎 草 Humulus scandens
(Lour. )Merr. 的干燥地上部分。始载于 《唐本
草》[1],其药用历史悠久,具有清热解毒,利尿通
淋的功效,主治肺热咳嗽、肺结核、肺痈、虚热烦
渴、热淋、水肿、小便不利、湿热泻痢、热毒。
1 实验材料
1. 1 样品来源
见表 1。对口药材及商品药材经成都中医药大
学中药鉴定教研室马逾英教授鉴定为桑科植物葎草
Humulus scandens (Lour. )Merr.
1. 2 试药与试剂
木犀草素 (购自中国药品生物制品检定所,
批号为 11520-200504) ,硅胶 G (青岛海洋化工
厂) ,羧甲基纤维素钠 (上海化学试剂采购供应
站) ,薄层硅胶板 1 (青岛海洋化工厂分厂) ,薄层
硅胶板 2 (青岛海浪硅胶干燥剂厂制造) ,其余试
剂均为分析纯。
表 1 样品来源
样品编号 样品来源
1 采于四川雅安雨城区
2 采于成都崇州隆兴镇
3 采于成都邛崃临邛镇
4 采于四川宜宾翠屏山
5 采于成都邛崃夹关镇
6 采于四川泸州江阳区
7 采于成都温江区
8 购于成都荷花池药材市场
9 购于成都荷花池药材市场 (成都双流)
10 购于成都荷花池药材市场 (成都龙泉)
·87·
DOI:10.13593/j.cnki.51-1501/r.2011.04.026
第 4 期 郭沛琳 等 葎草的薄层色谱鉴别研究
2 方法与结果
2. 1 样品前处理考察
葎草含有大量叶绿素、糖类等杂质,故对前处
理方法进行筛选。
2. 1. 1 提取方法的考察
方法一:取葎草粉末 3 g,加 95%乙醇 25 mL
回流提取 1 h,滤过,滤液备用。
方法二:取葎草粉末 3 g,加石油醚 25 mL 回
流提取 1 h,滤过,滤渣加 95%乙醇 25 mL回流提
取 1 h,滤过,滤液备用。
方法三:取葎草粉末 3 g,加石油醚 25 mL 回
流提取 1 h,滤过,滤渣加 95%乙醇 25 mL回流提
取 1 h,过滤,回收乙醇,残渣加水 50 mL,置水
浴中加热 2 h,趁热滤过,滤液用等量乙酸乙酯萃
取 3 次,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇 1
mL使溶解。
方法四:取葎草粉末 3 g,加石油醚 25 mL 回
流提取 1 h,过滤,滤渣加 95%乙醇 25 mL回流提
取 1 h,过滤,回收乙醇,残渣加 2%硫酸 50 mL,
置水浴中加热 2 h,趁热滤过,滤液用等量乙酸乙
酯萃取 3 次,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇
1 mL使溶解。
以上 4 种溶液点于硅胶 G 薄层板上展开,结
果表明,方法 4 的色谱斑点清晰,杂质干扰少,效
果最好。
2. 1. 2 提取溶剂考察
以 50%乙醇,75%乙醇,95%乙醇,甲醇作
为提取溶剂,按上述方法 4 操作,各溶液于硅胶 G
薄层板上展开,结果表明,以 75%和 95%乙醇提
取的效果最好,故选用 75%乙醇为提取溶剂。
2. 1. 3 提取溶剂用量考察
以 75%乙醇为溶剂,加入量分别为 10 mL,25
mL,50 mL,按方法 4 操作,各溶液于硅胶 G薄层
板上展开,结果表明,以 25 mL 和 50 mL 效果好,
故选用加入量为 25 mL。
2. 2 展开剂考察
①甲苯-乙酸乙酯-甲酸 (8∶ 2∶ 0. 5) ;②氯仿-甲
醇-甲酸 (10∶ 3 ∶ 0. 1) ;③甲苯-氯仿-甲醇 (8 ∶ 5 ∶
3)。
以上 3 个展开系统展开前须先用展开剂饱和
30 min后,上行展开。
结果表明,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸 (8∶ 2∶ 0. 5)
分离效果最,好斑点清晰,Rf值适中。
2. 3 点样量考察
对照品、样品点样量分别为 1 μL,2 μL、3
μL、4 μL、5 μL、10 μL,于硅胶 G 薄层板上展
开,结果表明,对照品、样品的点样量均在 5 μL
时分离效果好,斑点清晰。
2. 4 展距考察
分别考查 9 cm、11 cm、13 cm,结果表明,展
距在 11 ~ 13 cm 时,斑点分离较好,无拖尾,Rf
值适中。
2. 5 展开湿度考察
加入不同浓度硫酸,调节展开缸内湿度分别为
32%和 72%,进行展开,结果表明,湿度为 72%
时,斑点分离效果较好,无拖尾。
2. 6 展开温度考察
分别在 4℃、16℃和 25℃下展开,结果表明,
在 16℃时,分离效果好,斑点较为圆整清晰。
2. 7 薄层板饱和时间考察
薄层板分别饱和 10 min、30 min、50 min,然
后展开,结果表明,薄层板饱和 30 min 或 30 min
以上时,分离效果较好,斑点圆整清晰。
2. 8 不同薄层板的考察
分别选用自制手铺板、薄层硅胶预制板 1 (青
岛海洋)和薄层硅胶预制板 2 (青岛海浪)进行点
样展开,结果表明,薄层硅胶预制板分离效果较
好,斑点较为清晰圆整。
2. 9 方法的确定及样品鉴别
供试品溶液的制备 取葎草粉末 3 g,加石油
醚 25 mL,回流提取 1 h,滤过,弃去滤液,残渣
加 75%乙醇 25 mL,回流提取 1 h,滤过,滤液蒸
干,残渣加 2%硫酸 50 mL,置水浴中加热 2 h,滤
过,滤液用等量乙酸乙酯萃取 3 次,合并乙酸乙酯
液,蒸干,残渣加甲醇 1 mL 使溶解,作为供试品
溶液。
对照品溶液的制备 取木犀草素对照品,加甲
醇制成每 1 mL 含 0. 1 mg 的溶液,作为对照品溶
液。
吸附剂:硅胶 G 薄层板 (预制板) ;展开剂:
甲苯-乙酸乙酯-甲酸 (8 ∶ 2 ∶ 0. 5) ;显色剂:3%三
氯化铝乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰,置紫外
灯 (365nm)下检视。
点样量:5 μL;展距:11 ~ 13 cm;展开湿度:
72%;展开温度:16℃;薄层板饱和时间:30
min。
取 10 批葎草药材样品,按上述方法试验,结
果表明,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位
置上,均显相同颜色的黄色荧光斑点。如图 1。
·97·
成都中医药大学学报 2011 年第 34 卷
S. 木犀草素对照品 1 ~10. 不同来源对口药材及商品药材(见本文1. 1)
图 1 不同产地葎草样品薄层色谱图
3 讨论
3. 1 建立了葎草中木犀草素的薄层色谱鉴别方法,
该方法对葎草中木犀草素的鉴别有较好的适应性,
其方法简便,重现性较好。
3. 2 以上葎草各样品薄层色谱中,6、8、10 号样
品在与对照品色谱相应的位置上,黄色荧光斑点较
弱,其余主要色谱斑点的荧光强弱有一定差异,可
能与采收时间和储存时间有关。通过文献查阅[6],
葎草中木犀草素含量,苗期 >花期 >果期,且随着
储存时间增长而减少。
参考文献
[1]李俊婕,王晓静 . 葎草的研究进展 [J]. 齐鲁药事,
2007,6 (26) :353-355.
[2]国家中医药管理局 《中华本草》编委会. 中华本草
[M]. 第 2 卷 . 上海:上海科学技术出版社,1999:
514-517.
[3]江西省卫生厅 . 江西省中药材标准 [S]. 南昌:江西
科学技术出版社,1997:197-198.
[4]徐炳声,汪汉津 . 中国植物志 [M]. 第 23 卷 . 北京:
科学技术出版社,1988:220-221.
[5]黎跃成,伍丕娥,周娟 . 药材标准品种大全 [M]. 成
都:四川科学技术出版社,2001:71.
[6]尹海波 . 中国葎草属植物的生药学研究 [D] . 辽宁
中医学院生药学专业硕士生学位论文,2001.
(收稿日期:2011-03-19 责任编辑:薛红
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(上接第 64 页)
[6] MullenKD,SzauterKM,McCullou ghAJ. Blood—brain
barrier (BBB)permeability [J]. Hepatolo gy,1988,8
(2) :440.
[7]武士京. 血脑屏障———解剖与生理 [J]. 现代神经疾
病杂志 2003,3 (2) :124.
[8]吴旭东,曹小定. 血脑屏障与脑缺血 [J]. 国外医学·
脑血管疾病分册,2000,8 (5):2721.
[9] 莫启忠,宫斌,茅惠明,等. H-麝香酮在体内的吸收
分布和排泄:中药麝香芳香开窍机制的初步探讨 [J].
中成药研究,1984,(7) :1.
[10]李瑾翠,王宁生,陆惠文,等. 麝香酮药代动力学
研究 [J]. 新药与临床药理,2000,11 (14) :208-
210.
[11]李伟荣,姚丽梅,宓穗卿,等. 冰片对大鼠下丘脑
组胺、5-羟色胺含量的影响 [J]. 中药材,2004,27
(12) :937-939.
[12]沈强,刘亚敏. 麝香在神经系统疾病中的临床运用
及其药理作用 [J]. 中西医结合心脑血管病杂志,
2003,1 (4) :217.
[13]上海中医学院基础部,中药系,同位素室,等. 3H一
冰片在机体内的吸收、分布和排泄———中药冰片芳
香开窍机理的初步探讨 [J]. 中成药研究,1981,3
(5) :8.
[14] 安立新,王保国 . 脑出血病理生理机制研究进展
[J]. 麻醉与监护论坛,2005,12 (5) :297-300.
[15]张培林. 神经解剖学 [M]. 北京:人民卫生出版社,
1998:559.
[16]吴文斌,胡常林 . 脑出血病理生理机制的研究进展
[J]. 国外医学·脑血管疾病分册,1999,7 (3) :
151-153.
[17]刘兆孔,梁志刚,郇英,等. 脑出血大鼠脑组织
ICAM-1 的表达与脑含水量的变化及药物对其影响
[J]. 中华神经医学杂志 ,2005,4 (4) :351-354.
[18]赵保胜,宓穗卿,张银卿. 冰片对大鼠脑微血管内
皮细胞 ICAM-1 表达量的影响 [J]. 中药新药与临床
药理,2001,12 (2) :88.
[19]刘亚敏,夏金华,赵光锋,等. 麝香配伍冰片对局
灶性脑出血再灌注大鼠脑含水量及血脑屏障通透性
的影响 [J]. 广州中医药大学学报,2007,24 (6) :
498.
(收稿日期:2011-04-20 责任编辑:薛红)
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