全 文 ：第 4 期
收稿日期：2014－06－30
基金项目：贵州省科学技术厅自然科学基金项目［黔科合 J 字（2011）2079 号］；凯里学院博士专项基金；贵州省高校优秀科技创新人才计划
项目［黔教合 KY 字（2012）099 号］；贵州省教育厅高层次人才引进项目（院科通（2012）7 号）；凯里学院重点项目（Z1202）；贵州省
特色重点学科资助项目［黔教高发（2011）208 号］；凯里学院重点学科资助项目［院通字（2010）86 号］
作者简介：苟体忠（1981－），男，贵州桐梓人，副教授，博士，主要从事天然药物化学研究，（电话）15286398512（电子信箱）gtz810110＠126．com。
甜草（Oldenlandia cantonensis How），又名野甘
草、山甘草，是双子叶茜草科植物广州耳草的全草，
其性平，味甘，具有清热解毒之功效。 甜草主要分布
在广东、江西等地。 目前，甜草已被简单加工为类似
于茶叶的保健品， 晒干的全草经开水浸泡即可饮
用。蓝文建等［1，2］从甜草乙醇提取物中分离得到了五
环三萜化合物，该化合物对胃腺癌细胞和肝癌细胞
具有抑制作用。 但甜草多酚抗氧化活性的研究尚未
见报道，因此，本研究分析了甜草总多酚的抗氧化
活性，从而为甜草的综合利用提供理论依据。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 样品 甜草样品购于 2013 年 7 月的凯里第
二届民间工艺品博览会。甜草成品于 80 ℃烘箱中烘
干，再用粉碎机粉碎并过 200目尼龙筛，待用。
1．1．2 仪器与试剂 紫外分光光度计 （UV－2550
型，岛津）；植物粉碎机（北京科伟永兴仪器有限公
司）；水浴振荡器（SHA－C 型，巩义予华仪器有限公
司）；超声波清洗机（WH－300 型，济宁万和超声电子
甜草总多酚体外抗氧化活性研究
苟体忠 a，b，雷小朋 c，徐绍琴 d，孙大方 a，陈永婷 a，彭章美 a
（凯里学院，a．化学与材料工程学院；b．应用化学研究所；c．人事处；d．继续教育学院，贵州 凯里 556011）
摘要：采用总抗氧化能力、OH·清除率、DPPH·清除率来考察甜草（Oldenlandia cantonensis How）总多酚
的体外抗氧化活性。结果表明，甜草总多酚总抗氧化能力略小于维生素 C（VC），但甜草总多酚 OH·清除
率远高于 VC。此外，甜草总多酚对 DPPH·的 IC50（22．2 μg ／ mL）与 VC 相近（16．0 μg ／ mL）。甜草总多酚是天
然的抗氧化活性剂和自由基清除剂。
关键词：甜草（Oldenlandia cantonensis How）；总多酚；抗氧化活性；OH·清除率；DPPH·清除率
中图分类号：R961；S567．21 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2015）04－0947－03
DOI：10．14088 ／ j．cnki．issn0439－8114．2015．04．044
Antioxidant Activity in vitro of Total Polyphenol from
Oldenlandia cantonensis How
GOU Ti－zhonga，b，LEI Xiao－pengc，XU Shao－qind，SUN Da－fanga，CHEN Yong－tinga，PENG Zhang－meia
（a． College of Chemistry ＆ Materials Engineering；b．Insititue of Applied Chemistry；c．The Personnel Department；d． School of Continuing
Education，Kaili University，Kaili 556011， Guizhou， China）
Abstract： The antioxidant activity in vitro of total polyphenol from Oldenlandia cantonensis How was evaluated by total antiox-
idant activity，hydroxyl and DPPH free radical scavenging effect． The results showed that the total antioxidant activity of total
polyphenol from Oldenlandia cantonensis How was slightly less than that of VC. The hydroxyl free radical scavenging effect of
total polyphenol from Oldenlandia cantonensis How was much higher than that of VC． The half－maximal inhibitory concentra-
tion （IC50） for DPPH free radicals of total polyphenol from Oldenlandia cantonensis How and VC was similar，which was 22．2
μg ／ mL and 16．0 μg ／ mL，respectively． It is indicated that total polyphenol from Oldenlandia cantonensis How was an effective
and natural antioxidant， and free radical scavenger．
Key words： Oldenlandia cantonensis How；total polyphenol；antioxidant activity；OH· scavenging effect；DPPH· scavenging effect
第 54卷第 4期
2015 年 2 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 54 No.4
Feb.，2015
湖 北 农 业 科 学 2015 年
设备有限公司）；低速离心机（TD5M 型，长沙湘智
离心机仪器有限公司）；电子天平（上海衡平仪器仪
表厂）。三氯乙酸、没食子酸均为分析纯，1，1－二苯－
2－苦基肼自由基（DPPH 自由基）、Folin-Ciocalteu’s
酚试剂为 aladdin试剂。
1．2 方法
1．2．1 样品处理与总多酚的提取 称取约 2 g 上述
样品于 50 mL 离心管中，依次用石油醚、二氯甲烷、
80％乙醇连续提取， 其工艺条件经正交试验确定最
佳萃取条件为：料液比为 1∶20（g∶mL），240 W 超声波
间歇提取 2 次，每次 30 min，离心取上层清液合并，
再置于 50 mL 容量瓶中并用相应试剂定容至刻度，
摇匀，待测。
1．2．2 总多酚测定 总多酚含量的测定参照文献
［3］并稍作修改。其简要流程为：准确称取 0．125 g没
食子酸以去离子水定容至 1 000 mL。 分别吸取该标
准溶液 0、1、2、3、4、5 mL 于 6 个 25 mL 比色管中，
先加去离子水至 10 mL，摇匀，再加入 Folin－Ciocal-
teu（FC）酚试剂 1．0 mL，混匀，然后加入 6．0 mL 10％
Na2CO3溶液，并用去离子水定溶至刻度，摇匀。 然后
在暗室中放置 2 h， 并于 760 nm波长下测定其吸光
度。 以没食子酸浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵
坐标， 绘制标准曲线， 其回归方程为：A＝0．083 5C＋
0．02（r＝0．999 8）。 取乙醇提取液 0．2 mL 于 25 mL 比
色管中，按上述步骤测定其吸光度，再根据回归方
程计算样品溶液总多酚的浓度，并以此计算样品总
多酚含量， 以每克样品中没食子酸当量表示（mg-
GAE ／ g）。
1．2．3 醇提物总抗氧化能力测定 总抗氧化能力
的测定方法参照文献［4］，其简要流程为：取 1 mL
不同浓度的提取液，并依次加入 2．5 mL的 pH 6．6的
磷酸盐缓冲液和 1％ 铁氰化钾［K3Fe（CN）6］溶液，
摇匀并置于 50 ℃水浴振荡器中 20 min。 然后加入
2．5 mL 10％三氯乙酸溶液，摇匀并取混液 2．5 mL，
再加入 2．5 mL 去离子水以及 0．1％氯化铁溶液，摇
匀并静置 10 min，在 700 nm 处测定吸光度（As），以
超纯水代替提取液作为空白并测定其吸光度 Ac。则
总抗氧化能力可以用 ΔA 来表示（ΔA＝As－Ac），其值
越大，提取液抗氧化能力越强。
1．2．4 OH·清除率的测定 OH·清除率的测定方
法参照文献［4］，其简要流程为：在 25 mL 比色管中
依次加入 4 mL pH 7．4 磷酸盐缓冲液和 1．5 mL
5 mmol ／ L 邻二氮菲溶液、1 mL 7．5 mmol ／ L FeSO4溶
液、1．5 mL 去离子水，摇匀，再加入 1 mL 不同浓度
的提取液， 立即摇匀。 最后加入 1．0 mL 1％ H2O2溶
液，摇匀并置于 37 ℃恒温水浴中恒温 60 min，再于
536 nm 处测定其吸光度 。 根据下式计算样品的
OH·清除率：
OH·清除率＝［（A1－A2） ／ （A0－A2）］×100％
其中，A1 为加入提取液及 H2O2 时测得的吸光
度；A2 为加 H2O2 而不加提取液时测得的吸光度；
A0 为不加提取液及 H2O2时测得的吸光度。
1．2．5 DPPH·清除率测定 DPPH·清除率的测定方
法参照文献［5］，其简要流程为：在 25 mL 比色管中
依次加入 2 mL 2×10－4mol ／ L DPPH·溶液和 2 mL 不
同浓度的提取液，摇匀，并在暗室中放置 30 min，以
无水乙醇为参比液，在 517 nm 下测定其吸光度 A3，
同时测定 2 mL 2×10－4mol ／ L DPPH·溶液与 2 mL 无
水乙醇混合液的吸光度 A4。 根据下式计算样品提取
液对 DPPH·的清除率：
DPPH·的清除率＝（1－A3 ／A4）×100％
2 结果与分析
2．1 甜草多酚含量的测定结果
甜草不同试剂提取物中多酚含量见表 1。 由表
1 可知， 甜草总多酚在各提取剂中的分布特征为：
80％乙醇＞石油醚＞二氯甲烷，甜草总多酚在以 80％
乙醇为提取剂的含量为 51．25 mg GAE ／ g。
2．2 甜草总多酚的总抗氧化能力
经相关分析表明，甜草总多酚对总抗氧化能力
的相关系数为 0．982 3，维生素 C（VC）对总抗氧化能
力的相关系数为 0．994 9，这表明总多酚和 VC 含量
与总抗氧化能力之间呈明显正相关关系。 差异分析
表明， 甜草总多酚和 VC 浓度对总抗氧化能力的影
响显著，这表明甜草醇提物的抗氧化能力是由多
酚成分决定的。国外学者研究也表明，含有高水平总
多酚的植物表现出很好的体外抗氧化活性 ［6］。由图
1可知， 随着浓度的增加甜草总多酚以及 VC 总抗
氧化能力增加，但甜草总多酚总抗氧化能力略低于
VC。
2．3 甜草总多酚对 OH·的清除率
经相关分析表明，甜草总多酚对 OH·的清除率
的相关系数为 0．984 0，VC 对 OH·清除率的相关系
数为 0．891 6，这表明总多酚和 VC 含量与 OH·的清
除率之间呈明显正相关关系。 差异分析表明，甜草
总多酚浓度与 OH·清除率之间存在显著差异 ，这
表 1 甜草不同提取剂中总多酚含量
样品
甜草
提取剂
石油醚
二氯甲烷
80%乙醇
总多酚含量//mg GAE/g
2.84
1.75
51.25
取样量//g
2.254 4
948
第 4 期
图 1 甜草总多酚、VC 对总抗氧能力的影响
0.0 0.5 1.0 1.5
浓度//mg/mL
4.5
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
ΔA
甜草
VC
表明甜草醇提物清除 OH·的活性是由多酚成分决
定的。由图 2可知，随着浓度的增加，甜草总多酚清除
OH·效率明显增加。 然而，VC对 OH·的清除效率影
响较小，且明显低于甜草多酚对 OH·的清除效率。
2．4 甜草总多酚对 DPPH·的清除率
经相关分析表明，甜草总多酚对 DPPH·的清除
率的相关系数为 0．995 5，VC 对 DPPH·的清除率的
相关系数为 0．998 7。 差异分析表明，甜草总多酚浓
度与 DPPH·的清除率之间存在显著差异，这表明甜
草醇提物清除 DPPH·的活性是由多酚成分决定的。
由图 3 可知，随着甜草总多酚和 VC 浓度的增加，其
清除 DPPH·的活性增加，但是甜草总多酚对 DPPH·
的清除率略低于 VC。 以甜草总多酚和 VC 浓度对
DPPH·的清除率作回归分析。 甜草总多酚对 DPPH·
的清除率的回归方程为：Y＝1．862 6X＋8．732 1 （r＝
0．995 5）。 VC 对 DPPH·的清除率的回归方程为 Y＝
2．595 7X＋8．365 2（r＝0．998 7）。 当 DPPH·的清除率
为50％时对应甜草总多酚和 VC的浓度即为 IC50。经
计算甜草总多酚和 VC 的 IC50 分别为 22．2 μg ／ mL
和 16．0 μg ／ mL。
3 小结
1） 甜草总多酚在各提取剂中的分布特征为：
80％乙醇＞石油醚＞二氯甲烷， 且甜草总多酚在以
80％乙醇为提取剂的含量为 51．25 mgGAE ／ g。
2）甜草总多酚总抗氧化能力略低于 VC，具有
一定的还原能力。
3） 甜草总多酚对 OH·的清除效率明显高于
VC，是良好的 OH·清除剂。
4）甜草总多酚对 DPPH·的 IC50（22．2 μg ／ mL）与
VC相近（16．0 μg ／ mL），表明甜草总多酚具有较好的
抗氧化活性，是天然的抗氧化活性剂。
参考文献：
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total phenolic content of aqueous leaf extract of Stevia rebau-
diana Bert［J］． Experimental and Toxicological Pathology，2012，
64：807－811．
60
50
40
30
20
10
0
OH
·
清
除
率
//%
甜草
VC
0.0 0.5 1.0 1.5
浓度//mg/mL
图 2 甜草总多酚、VC 对 OH·清除率的影响
图 3 甜草总多酚、VC 对 DPPH·清除率的影响
2 4 6 8 10 12
深度//μg ／ mL
50
40
30
20
10
0
DP
PH
·
清
除
率
//%
甜草
VC
（责任编辑 龙小玲）
苟体忠等：甜草总多酚体外抗氧化活性研究 949