全 文 ：第 13卷　第 10期 中华男科学杂志 Vo.l 13　No. 10
2007年 10月 National Jou rnal of Andro logy Oc.t 2007
论 著
鹿藿根 4种提取物抗雄性小鼠生育作用比较
王建刚1, 2 , 熊承良 1 , 王淑英 2 , 吴银萍 2 , 付银锋 2 , 张朝晖 2
(1.华中科技大学同济医学院计划生育研究所 , 湖北 武汉 430030;
2. 河南科技大学医学院药理学教研室 , 河南 洛阳 471003)
摘要:　目的:比较 4种鹿藿根提取物(乙醇提取物 、乙酸乙酯提取物 、正丁醇提取物及水溶物 )的抗生育作用。 　
方法:60只雄性昆明种小鼠分为生理盐水对照组 、雷公藤多苷对照组 、乙醇提取物组 、乙酸乙酯提取物组 、正丁醇
提取物组及水溶物组 , 每组 10只。各组药物浓度均为 1%, 雷公藤多苷为 0. 1%水溶液。每次 0. 1 m l /10 g, 灌胃 ,
1次 /d,连续给药 , 共 11周。在用药 10周后 , 一对一雌雄合笼交配 1周。分笼 10 d后处死雌鼠 , 观察妊娠率 、活胎
数 、死胎数。 11周后处死雄性小鼠观察附睾精子 、附睾及睾丸病理变化情况及血清睾酮含量测定。 　结果:连续
用药 11周 , 与生理盐水对照组相比 , 实验组小鼠妊娠率下降 ,其中水溶物组最为明显(P <0. 05)。雷公藤多苷对照
组和水溶组精子明显减少(P <0. 05)。组织学观察鹿藿根提取物对精原细胞 、初级精母细胞影响不显著。各提取
物组血清睾酮差异无显著性(P >0. 05)。生理盐水对照组 、雷公藤多苷对照组 、乙酸乙酯提取物组 、正丁醇提取物
组 、乙醇提取物组及水溶物组的抗精子发生效应积分分别 0、(5. 3±1. 5)、(2. 6±1. 7)、(2. 9 ±1. 2)、(2. 2±0. 9)、
(2. 1±1. 0)分。 　结论:4种鹿藿根提取物均有抗生育作用 , 但水溶物作用更强且对睾丸组织及睾丸生精能力影
响较小。
关键词:鹿藿;抗生育作用;睾丸;附睾
中图分类号:R169. 41;R287;R-332　　文献标识码:A　　文章编号:1009-3591 (2007) 10-0871-05①
Compar ison of theAnti-fertility Effects ofFour Extracts from theRoots ofRhynchosia volubilis Lour
WANG Jian-gang1, 2 , XIONG Cheng-liang1 , WANG Shu-y ing2 , WU Yin-ping2 , FU Y in-feng2 , ZHANG Zhao-hu i2
1. F am ily P lanning R esearch Institute, Tong jiMedicalCollege, HuazhongUniversity ofScienceand Technology, Wu-
han , Hubei 430030, China;2. Department of Pharmacology , Med ica l College of Henan Un iversity of Science and
Technology, Luoyang , Henan 471003, China
Correspondence to:X IONG Cheng-liang , E-ma il:clx iong@ma ils. tmj u. edu. cn
Abstrac t:　Objec tive:To com pare the anti-fe rtility effe cts of the four ex trac ts from the roo ts of Rhynchosia vo lubilis Lour on m a le
m ice, tha t is, e thano lic ex trac t, e thy l ace ta te extract, n-bu tanol ex trac t and aqueous extrac.t 　M ethods:Four ex tracts from the roots
o f Rhynchosia vo lub ilis Lour(1%, 0. 1 m l /10 g), we re adm iniste red o ra lly for 11 w eeks to adu ltm alem ice. The fe rtility and testicu lar
function of the m ice we re assessed by ma ting tests and analy ses o f spe rm mo tility in cauda epididym ides and biochem ica l and histologi-
ca l indexes in the blood sam ples and reproduc tive o rgans. 　Resu lts:The fou r extracts, espec ially aqueous ex tract, g radually dec reased
the pregnancy ra te o f the experimenta lm ice from the 77th day of the treatm ent, w ith an obvious reduction in the num be r o f sperm a to-
zoa. M o rpho logica l obse rvation of the reproduc tive org ans by ligh tm ic roscopy showed that the num be rs of the secondary sperm atocytes
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① 收稿日期:2007-04-20;修回日期:2007-04-10
基金项目:湖北省计划生育委员会资助项目(Js2003. 01)
作者简介:王建刚(1960-),男 ,河南三门峡市人 ,教授 ,博士研究生 ,从事生殖药理学及生殖毒理学研究。 E-m ai l:y lw jg@163. com
通讯作者:熊承良 , E-m ail:clxiong@m ails. t jmu. edu. cn
DOI牶牨牥牣牨牫牪牰牫牤j牣cnki牣nja牣牪牥牥牱牣牨牥牣牥牥牬
and sperm a tids we re decrea sed in va ried degree s, and the sem inife rous tubules we re disarranged, w hile the numbers and shapes of
spe rma togonia, Ser to li ce lls and Leyd ig ce lls rem a ined unchanged. 　Conclusion:The four extracts from the roots of Rhynchosia volubilis
Lour all have anti-fertility effects on ma le m ice, and that of the aqueous ex tract ism ore obvious. 　Natl J Androl, 2007 , 13(10):871-875
K ey words:Rhynchosia volubilis Lour;anti-fertility;testis;epid idym is
　　鹿藿 (Rhyncho sia vo lubilis Lour)是我国避孕经
验方中的一味主药。徐慧敏等 [ 1]用鹿藿根水煎液对
大鼠灌胃进行实验 ,发现对雄性大鼠有抗生育及抗
菌作用 。其特点是显著降低附睾尾部精子存活率 ,
抑制雄性大鼠的生育力;与正常对照组相比 ,交配成
功率无差异 ,但雌鼠的妊娠率显著降低;不改变内源
性睾酮 、卵泡刺激素和黄体生成素的分泌水平;不影
响附属性腺的分泌功能;主要作用于中晚期的生精
细胞 ,对精原细胞的超微结构和增殖功能无明显影
响 ,停药后可恢复生精功能[ 1, 2] 。因此 ,中药鹿藿是
一个具有开发潜力的新型避孕药物 。本实验的目的
是比较鹿藿根 4种溶剂提取物(乙醇提取物 、乙酸乙
酯提取物 、正丁醇提取物及水溶物)的抗生育作用。
1　材料与方法
1. 1　药品与试剂　鹿藿根 (购于湖北京山 ,由中国
科学院武汉植物所鉴定 );雷公藤多苷 (上海复旦复
华药业有限公司 ,批号:050104 );乙酸乙酯 、甲醇 、
正丁醇 、薄层层析硅胶 GF254、碘 、氯化钠 、氯化钾 、
氯化钙 、碳酸氢钠 、氯化镁 、磷酸二氢钠 、葡萄糖等均
为国产分析纯;睾酮试剂盒 (美国雅培公司 )。
1. 2　仪器　旋转蒸发仪 (RE52CS)、循环水真空泵
(SHZ-DA)、恒温水浴锅 (HH5-11)、三用紫外分析
仪 (ZF-I)、显微镜 (O lympus)、超纯水系统(M illi-Qbio-
ce l)、美国雅培全自动免疫分析系统(AXSYM M icropar-
tic le Enzyme Immunoassay Sy stem , ABBOTT, USA)。
1. 3　动物　昆明种小鼠雌雄各 60只(由华中科技大
学同济医学院动物实验中心提供 , SCXK鄂 2004-0007)。
1. 4　溶剂提取及实验用药的配制　干燥鹿藿根
6. 2 kg,粉碎 , 70%乙醇 20 L浸泡 1周 ,提取 3次。
旋转蒸发仪进行减压蒸馏 (温度 40 ～ 60 ℃,压力
- 0. 09M Pa)制得乙醇浸膏 480 g。 311 g浸膏加水
混悬 ,依次用石油醚 、乙酸乙酯 、正丁醇萃取 ,分别得
到相应提取物 ,减压蒸馏制得乙酸乙酯 (25. 5 g)、正
丁醇(18. 0 g)及水浸膏 (267. 5 g)。实验时用生理
盐水稀释成 1%的溶液。
1. 5　抗生育实验　雄性小鼠 60只 ,体重 (28. 1±
2. 9) g。分 6组 ,每组 10只 ,即生理盐水对照组 ,雷
公藤多苷(0. 1%水溶液 )对照组 , 乙醇提取物组 ,乙
酸乙酯提取物组 ,正丁醇提取物组及水溶物组 。每
次 0. 1m l /10 g,灌胃 , 1次 /d,连续给药 ,记录体重及
生长情况。小鼠喂食颗粒饲料 (华中科技大学动物
实验中心提供)及自由饮水 ,实验室温度 22 ～ 25 ℃、
相对湿度 50% ～ 55%。
1. 5. 1　妊娠率和妊娠抑制率　在雄鼠灌药的 10周
后与雌性小鼠合笼 (1∶1),合笼期间雄鼠继续给药 ,
检查阴栓情况并记录阴栓出现日期 ,以阴栓出现日
为妊娠第 1 d;1周后分笼 , 10 d后解剖雌鼠 ,计算妊
娠率 、妊娠抑制率和平均活胎数;雄鼠的生育率以雌
鼠妊娠百分率来表示 [ 3] 。
1. 5. 2　对附睾中精子计数及活动力的影响　给药
11周后将雄性小鼠颈椎脱臼处死。取一侧附睾置
无菌小烧杯中 , 生理盐水冲洗后 ,加入精子营养液
(泰氏营养液 ,新鲜配制)2 m l,剪碎附睾尾部 , 37 ℃
孵育 30 m in后 ,轻轻震荡 ,可以得到含精子的乳液。
用移液器精确取 20 μl,滴于血细胞计数板 ,在 O lym-
pus显微镜 (×100)下计数并观察精子运动情况 。 a
级精子:快速前向运动;b级精子:慢速或呆滞的前
向运动;c级精子:非前向运动;d级精子:不活动[ 4] 。
1. 5. 3　形态学检查　按文献 [ 5]介绍用双固定法固
定一侧附睾和睾丸 ,石蜡包埋 、HE染色。根据睾丸
形态学改变及精子发生效应情况计算积分 ,判定抗
生育程度:0分 ,精子发生正常;1分 , 15%以下生精
小管有精子发生障碍;2分 , 15% ～ 30%生精小管有
精子发生障碍;3分 , 30% ～ 45%生精小管有精子发
生障碍;4分 , 45% ～ 60%生精小管有精子发生障
碍;5分 , 60% ～ 75%生精小管有精子发生障碍;6
分 , 75% ～ 90%生精小管有精子发生障碍;7分 ,
90%以上生精小管有精子发生障碍;8分 , 90%以上
生精小管仅有少量精原细胞[ 6] 。
1. 5. 4　睾酮测定　11周后小鼠处死前 ,每只小鼠由
眼眶取血 0. 5m l,取血清用 AXSYM检测睾酮浓度。
1. 6　统计学分析　结果用 SPSS 12. 0软件统计分
析 。数据用 x ±s表示 ,用方差分析进行显著性检
验 。P <0. 05为差异有显著性。
2　结果
2. 1　抗生育结果　连续用鹿藿根提取物 11周 ,各
组小鼠妊娠率都有不同程度下降 ,尤其水溶物组下
降尤为明显 (表 1)。实验对小鼠附睾精子数量及活
872 中华男科学杂志 2007年 10月　第 13卷
动力的影响见表 2。用药 11周后各组雄性小鼠血清
的睾酮含量分析表明 ,雷公藤多苷对照组明显增高 ,
而 4种提取物组与生理盐水对照组差异无显著性 ,
见表 3。各组小鼠体重变化情况 ,除雷公藤多苷影
响动物体重外 , 各组间体重增量差异无显著性 ,见
表 4。
表 1　用药 11周对小鼠妊娠率的影响(n =10)
Table 1. E ffec ts of the fou r ex trac ts from the roo ts o f Rhyncho sia vo lub ilis Lou r on the proc rea tion o f the m ale m ice after 11 w eeks of
treatment(n=10)
G roup P regn ancy rate(%) Rate of p regnan cy
inh ib ition(%)
Rate of corrected
pregnan cy inh ib ition(%)
M ean number of
living fetuses
NS con trol 80 20 7. 6
Triperyg ium w ilford ii 0* 100 100 0
E thano lic extract 30* 70 62. 5 10. 0
E thyl acetate extract 20* 80 75 7. 7
n-bu tano l extract 20* 80 75 9. 3
A queous extract 10* 90 87. 5 9. 0
与 NS组比较 , *:P <0. 05
Com pa red w ith the NS g roup, *:P <0. 05
表 2　用药 11周对小鼠附睾尾精子活动力的影响(n =10)
Table 2. E ffec ts of the fou r ex trac ts from the roo ts o f Rhyncho sia vo lub ilis Lou r on the ac tivity o f sperm a tozoa in the cauda epididym is
o f them ice afte r 11 weeks o f treatment(n=10)
G roup G rade a(%) G rade b(%) G rade c(%) G rade d(%) Total num ber, x±s, ×106 /m l
NS con trol 20. 7 9. 5 47. 1 22. 7 242±97
Triperyg ium w ilford ii 10. 6 10. 6 20. 2 58. 5 94±42*
E thano lic extract 15. 2 17. 5 55. 1 32. 7 263±88
E thyl acetate extract 20. 8 12. 3 28. 4 38. 4 211±72
n-bu tano l extract 22. 3 21. 5 36. 1 20. 1 219±81
A queous extract 16. 3 21. 7 27. 9 34. 1 129±58*
与 NS组比较 , *:P <0. 05
Com pa red w ith the NS g roup, *:P <0. 05
表 3　用药对小鼠血清睾酮的影响(×10- 3 nm o l /L, x±s, n =
10)
Table 3. E ffec ts of the four ex trac ts from the roo ts of Rhynchosia
vo lubilis Lour on the te stosterone level in the serum o f the m a le
m ice (×10 -3 nm ol /L, x±s, n =10)
G roup Serum testos terone　　
NS con trol 　 5. 55±4. 86
Trip erygium w ilford ii 128. 04±157. 54**
E thanolic extract 　 3. 82±1. 04
E thy l acetate extract 　 3. 82±2. 78
n-Bu tano l extract 　 9. 02±6. 25
Aqu eou s extract 　 8. 22±12. 49
与 NS组比较 , **:P <0. 01
Com pa red w ith the NS g roup, **:P <0. 01
2. 2　组织学改变　睾丸组织学改变见图 1。生理
盐水对照组 (图 1A):生精小管结构完整 ,各级生精
细胞排列整齐有序 ,多为 5 ～ 7层 ,由基膜至腔内依
次为:精原细胞 ,初级精母细胞 ,精子细胞 ,精子。管
腔内见较多精子生成 。支持细胞:轮廓不清 ,核呈不
规则形 ,染色浅 ,核仁明显 。间质细胞:成群分布 ,圆
形或多边形 , 核圆偏位 。雷公藤多苷对照组 (图
1B):生精小管生精细胞层次变薄 ,数量减少 ,排列
紊乱 ,疏松 。管腔内精子数量明显减少 ,部分管腔内
无精子生成 ,见较多坏死 、脱落的生精细胞 。其中以
精子细胞和精子数量减少较为显著 ,而精原细胞及
初级精母细胞结构及数量改变不甚明显。支持细
胞 、间质细胞无明显病变。乙酸乙酯提取物组 (图
1C):部分生精小管结构改变 ,生精细胞层次变薄 ,
873 第 10期　　王建刚 等　鹿藿根 4种提取物抗雄性小鼠生育作用比较
表 4　用药前后小鼠体重的改变(g, x±s, n =10)
Table 4. E ffec ts of the fou r ex trac ts from the roo ts o f Rhyncho sia vo lub ilis Lou r on the body w eigh t of the m ice (g, x±s, n =10)
G roup Body w t before treatm en t Body w t b efore death Body w t increase
NS con trol 28. 6±1. 7 36. 6±6. 7 7. 7±6. 7
Triperyg ium w ilford ii 28. 0±1. 9 32. 2±4. 4 4. 0±4. 8*
E thano lic extract 26. 2±2. 6 36. 2±6. 3 10. 2±8. 4
E thyl acetate extract 27. 7±2. 2 37. 2±6. 7 7. 0±6. 2
n-Butanol extract 27. 4±2. 5 37. 8±4. 6 10. 0±5. 2
A queous extract 26. 1±2. 4 35. 1±3. 8 8. 5±4. 3
与 NS组比较 , *:P <0. 05
Com pa red w ith the NS g roup, *:P <0. 05
　　图 1　实验各组睾丸形态学变化(HE, ×200)
　　A:生理盐水对照组;B:雷公藤多苷组;C:乙酸乙酯提取物组;D:正丁醇提取物组;E:乙醇提取物组;F:水溶物组
　　F igu re 1. M orpho log ical changes of the testis in the experim ental and contro l g roups unde r the ligh tm icro scope (HE, ×200)
　　A:NS contro l;B:Triperygium w i lford ii;C:ethyl acetate extract;D:n-bu tano l extract;E:ethanolic ex tract;F:aqu eous extract
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数量减少 ,排列紊乱 ,疏松 。管腔内精子数量明显减
少 ,见较多坏死 、脱落的生精细胞 。其中以精子细胞
和精子数量减少较为明显 ,而精原细胞及初级精母
细胞结构及数量变化不明显 。支持细胞 、间质细胞
结构改变不明显 。与生理盐水对照组相比 ,生精小
管结构已有明显改变 ,但不如雷公藤多苷对照组破
坏严重 。其他实验组结果与乙酸乙酯提取物组相
似 ,但正丁醇提取物组 (图 1D)对睾丸作用稍强 , 而
乙醇提取物组(图 1E)和水溶物组 (图 1F)作用弱 。
生理盐水对照组 、雷公藤多苷对照组 、乙酸乙酯
提取物组 、正丁醇提取物组 、乙醇提取物组及水溶物
组的抗精子发生效应积分分别 0、(5. 3±1. 5)、(2. 6
±1. 7)、(2. 9±1. 2)、(2. 2 ±0. 9)、(2. 1±1. 0)分。
雷公藤多苷对照组附睾管精子数量少 ,见较多坏死 、
脱落的上皮细胞 。鹿藿根提取物各组附睾管结构未
发现改变。
3　讨论
从对抑制妊娠率的结果看 ,鹿藿根 4种提取物
均有抗生育作用 ,但水溶物作用更强 ,且病理学结果
显示水溶物对睾丸组织及睾丸生精功能影响较小。
本文结果也表明附睾管精子计数多少及活力与小鼠
的生育能力并非完全一致 [ 7] 。鹿藿根提取物对小鼠
的雄激素水平没有明显影响。根据溶剂提取的特性
及初步化学分析结果 ,鹿藿根乙酸乙酯提取物主要
含糖苷类 、醇和酚类化合物等 ,正丁醇提取物主要含
糖苷类 、酚类及生物碱类等 ,水溶物主要含糖 、黄酮
类 、可溶性鞣质等 。
精子的发生在睾丸 ,而成熟在附睾 。棉酚抗生
育在睾丸 ,对各类生精细胞有明显抑制作用且可导
致绝育 [ 8] ;雷公藤多苷在睾丸主要影响次级精母细
胞及精子细胞 ,在附睾影响精子的成熟[ 9, 10] ;生物碱
类的鸭嘴化碱临床有抗生育作用;皂苷类的果篱樵
皂甙能使顶体酶释放提前 ,而影响生育;三叶草 、苜
蓿 、羽扇豆等含异黄酮类成分 ,抗绵羊生育亦得到证
实 。鹿藿根提取物含有以上相似成分 ,因此可能有
相似的抗生育作用。
综合分析实验结果 ,认为鹿藿根提取物有抗雄
性小鼠生育的化学成分 ,且作用较强 、毒性较小的成
分可能存在于水溶物中 ,同时推测鹿藿根提取物的
抗生育作用在于抑制睾丸精子的产生及干扰附睾精
子的成熟。对于鹿藿根提取物抗生育作用的深入研
究及化学成分的进一步分析 ,有可能发现比较理想
的男性避孕药。
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(夏欣一　编发)
875 第 10期　　王建刚 等　鹿藿根 4种提取物抗雄性小鼠生育作用比较