全 文 ：HPLC法测定苎麻根中大黄素的含量
夏爱军①，韦少宣②，廖厚知③
［摘 要］ 目的 建立苎麻根中大黄素的含量测定方法。方法 采用 VP-ODS C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱。以
甲醇-0． 1%磷酸溶液(80∶ 20)为流动相;流速为 1． 0 ml·min －1;检测波长为 254 nm。结果 苎麻根中的大黄素含量在0． 1014 ～
0． 5070 μg范围内进样量与峰面积的线性关系良好(r = 0． 9999) ;平均回收率为 100． 11%，ＲSD为 1． 11%。结论 所建立的
方法准确、灵敏、重复性好，可用于苎麻根的质量控制。
［关键词］ 苎麻;大黄素;HPLC
［中图分类号］ Ｒ927． 2 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1008-9926(2013)06-0525-3
［DOI］ 10． 3969 / j． issn． 1008-9926． 2013． 06． 010
Determination of Hederagenin in roots of Boehmeria nivea(Linn．)Gaud．
XIA Ai-Jun①，WEI Shao-Xuan②，LIAO Hou-zhi③
①Department of Pharmacy，Hospital 303rd of PLA，Nanning 530021，China;②Department of Traditional Chinese
Medicine，Nanning 530021，China;③Guangxi Huike Institute of Materia Medica，Nanning 530007，China
［Abstrac］ Objective To establish a method of determining hederagenin content in roots of Boehmeria nivea
(Linn．)Gaud． ．Methods VP-ODS C18(4． 6 mm ×250 mm，5 μm)column was used． The mobile phase was methyl
alcohol-0． 1% phosphonic acid solution (80∶ 20)at a flow rate of 1． 0 ml·min －1 ． The detection wavelength was 254
nm． Ｒesults The linear relation of hyperin was good in the range from 0． 1014 to 0． 5070 μg． The average recovery
was 100． 11% ，and ＲSD was1． 11% ． Conclusion This method is accurate，sensitive and good in reproducibility．
It can be used for quality control of roots of Boehmeria nivea(Linn．)Gaud． ．
［Key words］ Boehmeria nivea(Linn．)Gaud．;hederagenin;HPLC
苎麻根来源为荨麻科植物苎麻(Boehmeria
nivea(Linn．)Gaud．)的根，又名苎根、野苎根、苎麻
茹。分布于我国河南、山东及陕西以南各地。具有凉
血止血，清热安胎，利尿，解毒之功。主治血热妄行所
致的咯血、吐血、衄血、血淋、崩漏、紫癜，胎动不安，胎
漏下血，小便淋沥，痈疮肿毒，虫蛇咬伤［1］。苎麻根在
广西民间主要用于月经过多，胎动不安，习惯性流产。
苎麻根的主要化学成分为甾醇类、黄酮类、蒽醌类、三
萜类化合物［2］。大黄素为苎麻根的有效成分之一［2］，
迄今为止，未见苎麻根有关大黄素含量测定的相关报
道。本研究建立了大黄素的含量测定方法，旨在为苎
麻的质量标准制定提供实验依据。
1 材料
1． 1 仪器 LC-2010A 高效液相色谱仪(日本岛津
作者简介:夏爱军，主任药师。研究方向:医院药学。Tel: (0771)
2870266;E-mail:singerxaj2002@ alijun． com
作者单位:① 530021 广西南宁，解放军 303 医院药剂科;
② 530021 广西南宁，广西中医学院药学院中药教研室;③ 530007
广西南宁，广西汇科药物研究所
制作所) ;检测器:SPD-M10Avp紫外检测器(日本岛
津制作所) ;十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(VP-
ODS 柱，250 mm × 4． 6 mm) ，保护柱:YWG C18(10
mm ×4． 6 mm) ;梅特勒-托利多电子天平 AB265-S;
UV-2450 分光光度计(日本岛津制作所) ;双频加热
型超声波清洗器(上海冠特超生仪器有限公司)。
1． 2 试药 大黄素对照品(中国药品生物制品检
定所，批号:110756-200110) ;甲醇为色谱纯、盐酸、
磷酸均为分析纯。苎麻根药材〔分别购于广西南宁
(20110301)、柳州(20110401)、桂林(20110801)、玉
林 (20111001 )、金 城 江 (20120101 )、梧 州
(20120301)、防城(20120501)、百色(20120601) ，由
广西汇科药物研究所廖厚知工程师鉴定为苎麻
Boehmeria nivea(Linn．)Gaud．的根〕。
2 方法和结果
2． 1 色谱条件 流动相为甲醇-0． 1% 磷酸溶液
(80∶ 20) ;流速为 1． 0 ml·min －1，柱温为 25 ℃;检测
波长为 254 nm，理论板数按大黄素计不低于 3000，
此条件下大黄素与其他成分分离度不低于 1． 5。
·525·解放军药学学报 2013 年 12 月 20 日 第 29 卷 第 6 期 Pharm J Chin PLA，Vol． 29，No． 6，Dec 20，2013
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 对照品溶液 精密称取大黄素对照品
10． 14 mg，加甲醇适量制成 1 ml 含 30． 42 μg 的溶
液，即得。
2． 2． 2 样品溶液 取本品粉末(批号:20110301)
过 4 号筛，约 0． 5 g，精密称定，加入乙醇 50． 0 ml甲
醇，称定质量，加热回流 2 h，放冷，再称定质量，用乙
醇补足减失的质量，滤过，精密量取续滤液 25 ml，置
烧瓶中，挥去溶剂，加 8%盐酸溶液 10 ml，超声处理
2 min，再加三氯甲烷 15 ml，加热回流 1 h，放冷，置
分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏
斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取 3
次，每次 15 ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至
干，残渣加甲醇使溶解，转移至 10 ml 量瓶中，加甲
醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2． 3 系统适用性试验 分别精密吸取对照品溶液、
样品溶液各 10 μl，注入高效液相色谱仪，按确定的
色谱条件测定，在此条件下样品中大黄素的理论塔
板数为 4700，分离度为 18 ＞ 1． 5，表明与其他成分分
离良好，见图 1。
A:对照品溶液;B:供试品溶液;1:大黄素
图 1 苎麻根 HPLC图
2． 4 线性关系的考察 精密称取大黄素对照品
10． 14 mg，置 10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，精密吸取 0． 1、0． 2、0． 3、0． 4、0． 5 ml，分别
置 10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，按
上述色谱条件，分别进样 10 μl，测定，以峰面积积分
(Y)对大黄素进样量(X，μg)进行回归分析，得回
归方程:
Y = 3 931 097 X － 1905，r = 0． 9999
表明大黄素进样量在 0． 1014 ～ 0． 5070 μg 范围
内线性关系良好。
2． 5 精密度试验 取大黄素对照品溶液(30． 42
μg·ml －1) ，按上述色谱条件，依法操作测定，重复进
样 5 次，测定色谱峰面积，计算 ＲSD值为 0． 25%，表
明仪器精密度良好。
2． 6 样品溶液稳定性试验 取同一样品溶液，分别
在放置 2、4、6、8、24、48、72 h 后，依法测定大黄素峰
面积，结果 ＲSD值为 1． 05%，表明样品溶液 72 h 内
稳定性较好。
2． 7 重复性试验 取同一批号样品 6 份(批号:
20110301) ，按 2． 2． 2 项制备样品溶液，依法测定，计
算大黄素的含量，结果平均含量为 1． 024 mg·g －1，
ＲSD为 1． 83%，表明本测定方法重复性好。
2． 8 加样回收率试验 取已知含量(1． 024
mg·g －1)的样品 6 份(批号:20110301) ，每份取 0． 25
g，精密称定，置 100 ml 锥形瓶中，精密加入 0． 2 ml
大黄素对照品溶液(1． 014 mg·ml －1) ，挥去甲醇，按
样品溶液制备方法制备，分别注入高效液相色谱仪，
按上述色谱条件下测定大黄素峰面积，计算回收率，
结果见表 1。表明本方法回收率良好。
表 1 苎麻根回收率试验结果
取样量 /
g
样品量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
珋x /
%
ＲSD /
%
0． 2503 0． 2563 0． 2028 0． 4609 100． 89
0． 2514 0． 2574 0． 2028 0． 4592 99． 51
0． 2511 0． 2571 0． 2028 0． 4588 99． 46 100． 11 1． 11
0． 2509 0． 2569 0． 2028 0． 4567 98． 52
0． 2506 0． 2566 0． 2028 0． 4611 100． 84
0． 2516 0． 2576 0． 2028 0． 4633 101． 43
2． 9 样品的含量测定 取苎麻 8 批，按上述方法测
定，表明不同产地的苎麻中大黄素的含量在
0． 062% ～0． 176%，平均含量为 0． 113%，结果见表
2。
表 2 样品含量测定结果
批号 含量 /mg·g － 1
20110301 1． 022 0． 102
20110401 0． 963 0． 096
20110801 1． 759 0． 176
20111001 1． 068 0． 107
20120101 0． 616 0． 062
20120301 1． 349 0． 135
20120501 1． 522 0． 152
20120601 0． 758 0． 076
·625· 解放军药学学报 2013 年 12 月 20 日 第 29 卷 第 6 期 Pharm J Chin PLA，Vol． 29，No． 6，Dec 20，2013
3 讨论
3． 1 流动相的选择 参考文献［3-6］，预实验中选
择了 3 种流动相系统进行试验，甲醇∶ 0． 1%磷酸溶
液 = 85 ∶ 15;甲醇 ∶ 0． 1% 磷酸溶液 = 80 ∶ 20;
甲醇∶ 0． 1%冰乙酸溶液 = 70∶ 30，结果 3 种流动相均
能达到分离效果，后者出峰时间稍晚，前者的第一次
进样会对下一次进样的峰形有干扰，甲醇∶ 0． 1%磷
酸溶液 = 80∶ 20 则无此现象，故选择。
3． 2 水解时间的考察 对水解时间(0． 5、1、2 h)进
行了考察，结果提取 0． 5 h 未水解完全，水解 1 h 与
2 h基本无差异，为节省试验时间，故选择 1 h。
3． 3 检测波长的确定 采用甲醇作溶剂制备大黄
素对照品溶液，在 190 ～ 800 nm 波长下扫描其光谱
图，结果在 256 nm波长处有最大吸收，参照药典，选
择 254 nm为测定波长。
［参考文献］
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草(第二册)
［M］．上海:上海科学技术出版社，1999:538 － 540
［2］ 邵立军，王健农．中药苎麻根抗乙肝病毒活性及其化学成分研
究［D］．中国中医科学院，2007
［3］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典(一部) ［S］． 北京:中
国医药科技出版社，2010:22;164 － 165
［4］ 汪跃峰，刘劲松，钟文武，等．高效液相色谱法测定马兰中大黄
素的含量［J］．安徽医药，2013，17(3) :393 － 394
［5］ 黄爱芳，林崇良，蔡进章．高效液相色谱法测定酸模中大黄素
含量［J］．温州医学院学报，2012，42(1) :60 － 62
［6］ 巩丽丽，李 佳，蒋海强． ＲP-HPLC 法测定不同提取法首乌藤
中大黄素含量［J］．山东中医药大学学报，2012，36(3) :241 －
242
(收稿日期:2013-08-05;修回日期:2013-09-12)
(本文编辑 狄亚敏)
( 上接 524 页)
表 2 黄芩苷与欧前胡素加样回收率试验结果(n = 6)
成分
取样量 /
g
样品量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
珋x /
%
ＲSD /
%
黄芩苷 0． 5011 0． 2691 0． 1120 0． 3810 99． 91
0． 5037 0． 2705 0． 1120 0． 3822 99． 73
0． 5045 0． 2709 0． 2240 0． 4943 99． 73 99． 8 0． 1
0． 5028 0． 2700 0． 2240 0． 4936 99． 82
0． 5013 0． 2692 0． 4480 0． 7170 99． 96
0． 5019 0． 2695 0． 4480 0． 7168 99． 84
欧前胡素 0． 5011 0． 0536 0． 0262 0． 0794 98． 47
0． 5037 0． 0539 0． 0262 0． 0796 98． 09
0． 5045 0． 0540 0． 0524 0． 1060 99． 24 99． 0 0． 6
0． 5028 0． 0538 0． 0524 0． 1057 99． 05
0． 5013 0． 0536 0． 0786 0． 1317 99． 36
0． 5019 0． 0537 0． 0786 0． 1319 99． 49
表 3 鼻炎灵片中各成分含量测定结果
批号 黄芩苷 /mg 欧前胡素 /μg
20120503 0． 154 31． 2
20120508 0． 161 32． 1
20120522 0． 155 31． 9
3 讨论
3． 1 检测波长的选择 两种对照品，在 280 nm处
均有吸收峰。色谱考察在 280 nm处灵敏度高，杂质
干扰相对较小，色谱峰形分离较好。故选用 280 nm
为测定波长。
3． 2 提取方法的选择 超声提取 20 min 回流提取
1 h的提取方法与 SPE固相萃取前处理比较，结果表
明，超声提取后，进行 SPE 固相萃取杂质干扰少，故
选用固相萃取法。固相萃取溶剂选择用 100%、
80%、50%甲醇，结果 80%甲醇浓度，萃取适宜，杂质
干扰少，提取溶剂用量少。用 9 ml 80%甲醇洗脱能
够提取完全。
［参考文献］
［1］ 中华人民共和国药典委员会． 卫生部药品标准中药成方制剂
(第二册) ［M］．北京:化学工业出版社，2002:289
［2］ 陈 颖，马春娟，谷伟玲，等．高效液相色谱法测定鼻炎灵片中
黄芩苷的含量［J］．云南中医中药杂志，2005，26(01) :40
［3］ 赵春香，梁 英，王丽娜． HPLC 法测定鼻炎灵片中欧前胡素的
含量［J］．中草药，2004，35(06) :642 － 643
［4］ 郭怀忠，张 斌，王 配，等． SPE-HPLC 法测定藿香正气水中
厚朴酚与和厚朴酚的含量［J］． 药物分析杂志，2010，30(05) :
827 － 830
［5］ 汤迎爽，宋红儒，康阿龙．高效液相色谱法测定板草抗病毒颗粒
中牛蒡苷的含量［J］．解放军药学学报，2012，28(01) :65 － 68
［6］ 孙 艳，卞 俊，陈海飞． 愈骨疗伤胶囊的质量标准研究［J］．
解放军药学学报，2011，27(01) :55 － 56
(收稿日期:2012-09-25;修回日期:2012-10-31)
(本文编辑 魏 萍)
·725·解放军药学学报 2013 年 12 月 20 日 第 29 卷 第 6 期 Pharm J Chin PLA，Vol． 29，No． 6，Dec 20，2013