全 文 ：℃;载气为高纯氮气，流速:1 mL /min;进样量为 1 μL;分流
比 40 ∶ 1;理论板数按丁香酚峰计算不低于 50 000。
按上述色谱条件，分别取供试品溶液、混合对照品溶液、
阴性对照溶液 1μL 进样测定，采用相对保留值法进行色谱
峰的指认。从结果可以看出，各指标峰之间分离良好，供试
品溶液相对保留时间与对照品溶液相对保留时间出现相应
特征峰，阴性对照无干扰。色谱图见图 4 ～图 6。
图 4 供试品溶液色谱图
图 5 混合对照品溶液色谱图
3 讨论
3. 1 按 2005 版《中国药典》收载大黄药材薄层鉴别项目，
365 nm紫外光下应检视到五个暗红色斑点，按 Rf 值从小到
大依次为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚、大黄酚。
图 6 阴性对照溶液色谱图
而跌打止痛巴布剂所采用超临界二氧化碳萃取技术主要是
针对极性较小成分进行萃取，薄层色谱图中虽未发现大黄酚
以外大黄成分，但鉴别结果并无干扰，且试验结果与采用《中
国药典》大黄鉴别方法所得结果一致，因此采用上述方法鉴
别方中大黄成分还是可行的。
3. 2 在挥发性成分气相色谱鉴别过程中，供试品溶液制备
曾采用甲醇冷浸法提取，提取液经 0. 45 μm微孔滤膜过滤后
直接作为供试品溶液。但这种浸提方法所得供试液体积大，
杂质成分多，巴布剂基质中甘油也被一并提出，影响色谱柱
寿命，给气相分离带来很大困难，故未予采用。
3. 3 内标物的选择，曾尝试用正十六烷、环己酮作内标，由
于色谱峰分离效果和保留时间差异等原因未予采用。
本研究不仅在同一气相色谱条件下鉴别出跌打止痛巴
布剂中多个挥发性成分，更重要是为外用膏贴剂中挥发性成
分含量测定提供合适的内标物和方法学的参考。
参考文献:
［1］ 中国药典［S］. 一部. 2005:附录 57.
［2］ 孟 舒，陈再兴，姜 泓，等. 玄丹巴布剂质量标准研究［J］.
中国现代应用药学杂志，2007，24(5):394-396.
对藏药四味雪莲花颗粒中含量测定方法的改进
张秀峰
(青海省药品检验所，青海 西宁 810000)
收稿日期:2010-03-30
作者简介:张秀峰(1957 －)，女，药师，研究方向:药物分析。Tel:13997385256 E-mail:344671295@ qq. com
关键词:四味雪莲花颗粒;大黄素;大黄酚;RP-HPLC
摘要:目的:建立四味雪莲花颗粒中大黄素、大黄酚的含量测定方法。方法:采用 RP-HPLC 法，用 Hypersil-ODS C18(250
mm ×4. 6 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇 － 0. 1 %磷酸溶液(80∶ 20)为流动相，检测波长:254 nm，流速:1 mL /min。结果:在
此色谱试验条件下，大黄素进样量在 0. 003 176 ～ 0. 031 76 μg范围内与峰面积呈线性关系，平均加样回收率为 98. 1%，
RSD = 2. 1%(n = 9)。大黄酚进样量在 0. 004 41 ～ 0. 044 1 μg范围内与峰面积呈线性关系。平均加样回收率为 98. 9%，
RSD = 2. 3%(n = 9)。结论:方法简单，准确，灵敏，能有效控制四味雪莲花颗粒的质量。
中图分类号:R927. 2 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2010)12-2188-03
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December 2010
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四味雪莲花颗粒收载于《国家中成药标准汇编》(中成
药地方标准上升国家标准部分)内科心系合成分册［1］。由
红景天、雪莲花、大黄、蕨麻四味藏族传统用药组成。藏医用
于三大因素平衡紊乱，隆，培根功能失调，气血上升，血瘀痰
阻所致的高脂血症［1］。原标准中含量测定为高效液相色谱
法测定大黄素含量，本实验用高效液相色谱法同时测定大黄
素、大黄酚的总量。此法简便、稳定、重现性好，能够更好的
控制四味雪莲花颗粒的质量。
1 仪器与试药
Agilent1100 高效液相色谱仪，Agilent G1314 VWD 紫外
检测器，HP化学工作站(美国 Agilent 公司);电子天平(Sar-
toriusBT224S，北京赛多力斯仪器公司);电子天平(Sarto-
riusR200-D，北京赛多力斯仪器公司);电子天平(METTLER
PB1502-S，瑞士 METTLER 公司);超声波清洗器(B2500s-
MT，上海必能信超声波清洗仪有限公司)。
大黄 素 对 照 品 (110756-200110)，大 黄 酚 对 照 品
(110796-200412)均由中国药品生物制品检定所提供，为含
量测定用。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸
馏水;四味雪莲花颗粒样品与阴性药材由青海金诃藏药药业
有限责任公司提供，样品批号分别为:081101、081102、
081103。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:依利特 Hyper-
sil-ODS2 柱(250 mm × 4. 6 mm，粒径 5 μm);柱温:室温;流
动相:甲醇 － 0. 1%磷酸溶液(80 ∶ 20);检测波长:254 nm;
理论板数按大黄素峰计算，大于 10 000(应不低于 3 000)。
在上述色谱条件下，得到四味雪莲花颗粒供试品及大黄
素、大黄酚对照品色谱图，大黄素的保留时间在 8. 5 min 左
右，大黄酚的保留时间在 11. 3 min左右。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品 9. 93 mg，
大黄酚对照品 27. 55 mg分别置 250 mL量瓶中，加甲醇溶解
并稀释至刻度，摇匀;分别精密量取上述大黄素对照品溶液
4 mL，大黄酚对照品溶液 2 mL置 100 mL量瓶中，加甲醇稀
释置刻度，摇匀即得混合对照品溶液(大黄素对照品溶液浓
度为 1. 588 μg /mL，大黄酚对照品溶液浓度为 2. 204 μg /
mL)。
2. 3 供试品溶液制备 取本品装量差异下内容物约 0. 5 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL ，称定重
量，加热回流 45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的
重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液 10 mL，置 100 mL 锥形
瓶中，挥去溶剂，加 8%盐酸液 10 mL，超声处理 2 min(50
Hz，120 W)，再加三氯甲烷 10 mL，加热回流 1 h，放冷，移至
分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分
取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取 3 次，每次约 10 mL，
合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转
移至 10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作
为供试品溶液。
2. 4 阴性对照溶液的制备 按照处方的组成，取除大黄外
的其余药味，按制备工艺要求制成不含大黄的制剂，按供试
品溶液制备项下的方法制备阴性对照溶液。在上述色谱条
件下，精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各
10 μL，分别注入液相色谱仪。供试品色谱图中，在与大黄
素、大黄酚对照品色谱图相应保留时间上，分别有相同的色
谱峰，而阴性对照在此无干扰。
2. 5 线性考察 分别精密吸取上述已配制好的大黄素(浓
度为 1. 588 μg /mL)与大黄酚(浓度为 2. 204 μg /mL)对照品
混合溶液 2、4、8、12、16、20 μL，按上述条件分别注入色谱仪
测定，以对照品溶液进样量(μg)为横坐标，以峰面积积分值
为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程得:大黄素 Y =
6. 081 1X － 0. 104 7，r = 0. 999 9，大黄素进样量在 0. 003 176
～ 0. 031 76 μg 范围内与峰面积呈线性关系;大黄酚 Y =
11. 883X － 0. 957 8，r = 0. 999 9，大黄酚进样量在 0. 004 41 ～
0. 044 1 μg范围内与峰面积呈线性关系。
2. 6 精密度考察 精密吸取上述已配制好的大黄素对照溶
液(浓度为 1. 588 μg /mL)，大黄酚对照溶液(浓度为 2. 204
μg /mL)，连续进样 5 次，每次进样量为 10 μL，按色谱条件操
作进行，测峰面积，以峰面积计算大黄素 RSD = 0. 3%，大黄
酚 RSD = 0. 9%，结果表明:大黄素、大黄酚测定方法精密度
良好。
2. 7 稳定性试验 取供试品溶液(批号:081103)，按上述色
谱条件分别于 0、2、4、6、8、12 h进样量 10 μL，测定峰面积的
大黄素 RSD = 3. 0%，大黄酚 RSD = 1. 3%，说明供试品溶液
在 12 h内稳定。
2. 8 重复性试验 按照上述含量测定方法对相同批号
(081103)样品制备 5 份供试液，分别进样 10 μL，测定峰面
积，结果大黄素 RSD = 1. 6%，大黄酚 RSD = 1. 4%，说明本方
法重现性良好。
2. 9 加样回收率试验 精密称取大黄素 2. 55 mg，大黄酚
4. 28 mg置 250 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，配
制成每 1 mL含大黄素为 0. 010 2 mg，大黄酚为 0. 017 10 mg
的混合溶液。取已知含量的四味雪莲花颗粒样品(批号
081103，大黄素含量为 0. 064 2 mg /g，大黄酚含量为 0. 102 9
mg /g)0. 25 g，称取 9 份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入混
合对照品溶液 1、1. 5、2. 5 mL 各 3 份，按上述供试品溶液的
制备方法制备，按上述色谱条件测定大黄素与大黄酚的含
量，计算回收率。结果平均回收率大黄素为 98. 1%，RSD =
2. 1%;大黄酚为 98. 9%，RSD = 2. 3%。结果表明本方法加
样回收较好，结果见表 1、2。
2. 10 样品测定 按上述含量测定方法，对 3 批样品中所含
大黄素、大黄酚的总量进行含量测定，结果见表 3。
2. 11 原方法测定结果与改进后方法测定结果比较 原标
准测定结果与改进后的方法测定结果见表 4。
测定结果表明，原标准中大黄素含量低于万分之一，改
进后测定结果及数据均高于万分之一，对于制剂质量的控制
更有意义。建议将原标准中单测定大黄素含量改进为同时
测定大黄素、大黄酚的含量。
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表 1 大黄素回收率测定结果
样品称样量
/ g
样品中大黄素
含量 /mg
加入大黄
素量 /mg
测出总
含量 /mg
回收率 /%
平均回收率
/%
RSD /%
0. 253 4 0. 016 52 0. 010 20 0. 026 60 98. 81
0. 255 7 0. 016 67 0. 010 20 0. 026 50 96. 36
0. 256 3 0. 016 71 0. 010 20 0. 026 60 96. 95
0. 268 9 0. 017 53 0. 015 30 0. 032 70 99. 14
0. 276 1 0. 018 00 0. 015 30 0. 033 20 99. 33 98. 1 2. 1
0. 279 6 0. 018 23 0. 015 30 0. 033 90 102. 42
0. 250 2 0. 016 31 0. 025 50 0. 040 80 96. 03
0. 245 7 0. 016 02 0. 025 50 0. 040 50 96. 00
0. 242 4 0. 015 80 0. 025 50 0. 040 70 97. 63
表 2 大黄酚回收率测定结果
样品称样量
/ g
样品中大黄酚
含量 /mg
加入大黄
酚量 /mg
测出总
含量 /mg
回收率 /%
平均回收率
/%
RSD /%
0. 253 4 0. 027 77 0. 017 10 0. 044 90 100. 2
0. 255 7 0. 028 02 0. 017 10 0. 044 80 98. 10
0. 256 3 0. 028 09 0. 017 10 0. 044 90 98. 30
0. 268 9 0. 029 47 0. 025 65 0. 055 60 101. 9
0. 276 1 0. 030 26 0. 025 65 0. 056 40 101. 9 98. 9 2. 3
0. 279 6 0. 030 64 0. 025 65 0. 056 50 100. 8
0. 240 2 0. 026 32 0. 042 75 0. 067 70 96. 78
0. 245 7 0. 026 93 0. 042 75 0. 068 00 96. 07
0. 242 4 0. 026 57 0. 042 75 0. 067 80 96. 45
表 3 样品测定结果
批号 含量 /(mg /袋)
081103 1. 69
081101 1. 76
081102 1. 74
表 4 2 种测定方法结果比较
批号
原方法
大黄素
/(mg /g)
改进后方法
大黄素
/(mg /g)
大黄酚
/(mg /g)
总量
/(mg /g)
081103 0. 064 0. 065 0. 104 0. 169
081101 0. 061 0. 061 0. 115 0. 176
081102 0. 053 0. 052 0. 122 0. 174
3 讨论
3. 1 本次试验对大黄素和大黄酚进行紫外全波长扫描，大
黄素、大黄酚在 254 nm 和 436 nm 处都有最大吸收，参照
2005 版《中国药典》一部［2］大黄药材的含量测定项，选择波
长为 254 nm进行检测，样品主峰分离度较好，且阴性对照无
干扰。
3. 2 参照 2005 版《中国药典》［2］一部中大黄药材含量测定
方法测定四味雪莲花颗粒样品，色谱峰分离度和峰形并不理
想，后改用甲醇 － 0. 1%磷酸溶液(80 ∶ 20)作为流动相，20
min内出峰完成，且分离度较好。
3. 3 在试验过程中，我们考察了超声 30、45、60、75 min和回
流 30、45、60、75 min提取样品中大黄素和大黄酚的含量，发
现回流的样品含量总体高于超声提取，且 45 min 和 60 min，
75 min大黄素、大黄酚的含量相差不大，所以本研究回流 45
min作为本次样品的提取方式。
参考文献:
［1］ 国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分)内
科心系分册［S］. 2002:156-159.
［2］ 中国药典［S］.一部. 2005:17-18.
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