全 文 ：食品与发酵工业 FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES
82　 2009Vol.35 No.12(Total264)
紫藤花提取物的抗氧化作用
傅茂润 1 ,王晓1 ,陈庆敏 2 ,耿燕玲1
1(山东省科学院分析测试中心 , 山东 济南 , 250014)　2(山东营养源食品科技有限公司 , 山东 济南 , 250014)
摘　要　紫藤花是一种常见的可食性花卉。文中采用多个抗氧化评价体系 ,包括亚油酸氧化抑制作用 、超氧阴
离子清除能力 、还原能力和 DPPH自由基清除能力 ,评价了紫藤花 2种提取物的抗氧化能力。结果表明:在所有
的测定方法中 , 紫藤花提取物均表现出了较强的抗氧化能力 , 其中 70%甲醇提取物的抗氧化能力强于对应的水
提取物。紫藤花总酚和总黄酮含量与其抗氧化能力有正相关性。
关键词　紫藤花 , 抗氧化能力 ,总酚 , 黄酮
第一作者:博士 ,助理研究员。
收稿日期:2009-08-04,改回日期:2009-10-26
　　流行病学的研究表明 ,消费水果和蔬菜可以降低
很多疾病 ,比如心脏病 、癌症 、关节炎和衰老等的发病
率[ 1] 。这些保护作用来源于一些抗氧化物质 ,主要
包括多酚类和黄酮物质 [ 2] 。饮食和健康这种直接的
关系引起食品学家 、医学家等的高度重视 ,寻找高效 、
安全的阻断自由基反应的抗氧化剂已成为当今热门
的研究课题之一[ 3-4] 。
紫藤(Wisteriasinensis)又名朱藤 、藤罗 ,豆科紫藤
属落叶藤本树种 ,分布于我国西北 、华北及长江流域
诸省 。紫藤花性微温 、味甘 ,具有利水消肿 ,散风止痛
的功效 ,主治腹水浮肿 ,小便不利 ,关节肿痛及痛风等
症。紫藤花具有浓郁的香味 ,在民间具有多种食用方
法 ,如藤花粥 、藤萝馅饼 、番茄藤花炒鸡蛋 、藤花羊肉
煲 、藤萝汤 、花瓣糖渍糕点等 。研究发现 ,紫藤花精油
的主要成分是龙涎香精内酯 、里哪醇 、 α-松油醇
等[ 5-6] ;紫藤花对香瓜枯萎病菌和白菜软腐病菌具有
良好的抑制作用 [ 7] ;从其种子中提取所得的紫藤凝
集素 ,在临床免疫和细胞遗传研究中也有一定的应用
前景 [ 8] 。本研究采用多个抗氧化体系评价了紫藤花
的抗氧化能力 ,以为紫藤花的进一步研究和更好的开
发紫藤资源提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　试剂和仪器
硝基四唑氮兰 (NBT)、1, 1-二苯基-2-三硝基苯
肼(DPPH)、丁基化羟基茴香醚(BHA)、黄嘌呤 、黄嘌
呤氧化酶 、抗坏血酸均购自 Sigma公司 ,其他试剂为
分析纯。
水浴锅(上海博迅实业有限公司医疗设备厂),
FD-1C真空冷冻干燥机(北京德天佑科技发展有限公
司),烘箱(上海福玛实验设备有限公司),真空旋转
蒸发仪(上海来荣生化仪器厂),多功能水循环真空
泵(河南郑州长城科贸有限公司)。
1.2　材料与处理
紫藤花摘自山东省科学院院内 ,采后 30 min内
运回实验室 ,冷冻干燥 16h。干燥的紫藤花磨碎后过
100目筛 ,将得到的花粉装进聚酯瓶中 ,密封 , -20℃
下保存 。
1.3　提取
取冷冻干燥的紫藤花 2.0 g,加 40 mL水或体积
分数 70 %甲醇超声波提取 10 min,过滤后得到滤液
以待分析。
1.4　紫藤花提取液对亚油酸氧化的抑制能力的测定
紫藤花提取物对亚油酸的抗氧化实验参照文
献[ 9]的方法略有改动 。将 100μL紫藤花提取物加入
到 5mL反应液中(反应液在 5mL离心管中)。反应
液由 2.5 mL的磷酸缓冲液(0.04 mol/L, pH7.0)与
2.5mL亚油酸乳状液(每 50mL亚油酸乳状液含 350
mg吐温-20、310μL亚油酸和 0.04 mol/L, pH7.0的
磷酸缓冲液)构成。将加入提取物的反应液放入
37℃生化培养箱 ,避光培养 。每 12 h取支管用于测
量过氧化水平 ,测定 120 h。用 BHA做阳性对照 ,以
未加提取物的反应液为空白。每个实验采用的都为
3次平行重复 。
抗亚油酸氧化公式为:
抑制率 /%=(1-A1A0)×100
其中:A1为加入提取物反应液的吸光值;A0为空
白反应液的吸光值。
DOI :10.13995/j.cnki.11-1802/t s.2009.12.043
生产与科研经验
2009年第 35卷第 12期(总第 264期) 83　
1.5　紫藤花提取液还原能力测定
紫藤花提取物的还原能力测定采用文献[ 10]的方
法。反应液体系为:2.5 mL的磷酸缓冲液(0.2 mol/
L, pH6.6)+2.5mLK3Fe(CN)6(0.03mol/L)。分
别取紫藤花提取物 20、50、100、200 μL加入反应体系
内 ,并在 50 ℃烘箱内培养 20min。随后加入 2.5 mL
10 %三氯醋酸 , 1 000 g离心 10min。上清液 2.5mL
加入到 2.5 mL蒸馏水和 0.5 mL0.006 mol/L的
FeCl3体系中反应 10min,在 700 nm下测吸光值 。阳
性对照为 BHA。
1.6　紫藤花提取液超氧阴离子清除能力测定
采用黄嘌呤氧化酶法 [ 11] 。反应体系为:每 1 mL
体系中含 0.4 mmol/L黄嘌呤和 0.24 mmol/LNBT,
体系的缓冲液为 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH8.0)。
将紫藤花提取物(终浓度为 40、80、160 μg/mL)配成
水溶液 ,并加入到反应体系内 ,再加入 1.0mL黄嘌呤
氧化酶液 (由 0.1mol/LpH 8.0磷酸缓冲液内含
0.049 U/mL)。在水浴 37℃中培养 40min。培养结
束后用 2 mL十二烷基硫酸钠(SDS)的水溶液(69
mmol/L)来终止反应 ,并在 560 nm下测定吸光度。
阳性对照为抗坏血酸。
去除超氧阴离子能力公式为:
去除能力 /%=(1-A1A0)×100
其中:A1为加入不同剂量不同提取物的吸光值 ,
A0为未加入提取物的空白对照吸光值。
1.7　紫藤花提取液对 DPPH自由基的清除能力
自由基清除能力的测定根据文献 [ 12]的 DPPH法
有所改动。阴性对照为将 2 mL提取液(终浓度为
25、 50、 100、 150 μg/mL)加入到 3 mLDPPH(0.04
mg/mL)溶液中 ,震荡摇匀 ,在 30 ℃的水浴锅中遮光
30 min, 517 nm测定吸光值。阳性对照为 2 mL抗坏
血酸溶液(0.05 mg/mL)和 3 mLDPPH溶液(0.04
mg/mL)的混合溶液。
提取物清除 DPPH自由基能力的计算公式为:
清除能力 /%=(1- A(-ve)-AsA(-ve)-A(+ve))×100
其中:As为样品的吸光值 , A(-ve)和 A(+ve)分别为
阴性和阳性对照的吸光值。
1.8　紫藤花提取液总酚 、总黄酮含量的测定
总酚含量测定采用 Folin酚法 [ 13] ,标准曲线 y=
0.007 6x-0.000 7(R=0.999 8),其中 x为提取液中
的总酚含量 (μg/mL), y为吸光度值 。检测波长为
765nm,以没食子酸来计算。
总黄酮含量的测定参照文献 [ 14]的方法 ,标准曲
线为 y=0.004 2x+0.021 3(R=0.997 2),其中 x
为提取液中的总黄酮含量 (μg/mL), y为吸光度值。
检测波长为 510nm,以芦丁来计算。
1.9　数据分析
数据统计分析采用 SPSS11.0(StatisticalProduct
andServiceSolutions)软件进行方差分析 ,数据以平
均值 ±SD(标准偏离度)表示。
2　结果与讨论
2.1　紫藤花提取液对亚油酸过氧化的抑制能力
在生物系统中 ,脂质过氧化会产生许多退行性产
物 ,如丙二醛(MDA),研究发现它是引起细胞壁破损
和细胞损伤的重要原因 [ 15] 。图 1显示的是 2种紫藤
花提取液对亚油酸过氧化反应的抑制作用(37 ℃)。
12-120h内空白的过氧化反应急剧增加;与之相比 ,
紫藤花提取液和 BHA在所有的测定时期内均有较低
的过氧化反应水平 ,这说明它们可使亚油酸的过氧化
进程减缓 ,其中体积分数 70%甲醇提取液对亚油酸
体系氧化的抑制能力强于相应的水提取液;反应终止
时 , 2种提取液对亚油酸氧化的抑制率分别为
90.75%(70%甲醇)和 82.88%(水),但均显著低于
BHA(97.18%)的效果(P<0.05);而且水提取液的
抗氧化能力低于 70%甲醇提取液 ,且有较显著的差
异(P<0.05)。
图 1　不同紫藤花提取液和 BHA对
亚油酸过氧化的抑制能力
2.2　紫藤花提取液的还原能力
有很多机制 ,包括还原力 、阻止链式反应的起始 、
捆绑金属离子的转换 、分解过氧化氢 、阻止氢的持续
置换和自由基的清除都可以用来解释物质的抗氧化
能力。因此 ,某种物质的还原力可作为其潜在抗氧化
能力的重要信号 。本试验以 Fe3+-Fe2+的转换来衡量
提取物的还原力 。紫藤花提取液的还原能力随着浓
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度的增加而增加 ,还原能力大小为 70%甲醇提取液
>水提取液(图 2)。
图 2　不同紫藤花提取物和 BHA的还原能力
由图 1、图 2可以看出 ,黄花菜提取物的还原力
与亚油酸氧化的抑制能力有正相关性 ,说明还原力和
亚油酸氧化的抑制能力是相关的 ,这与 Yen等 [ 16]的
报道是一致的 。
2.3　紫藤花提取液超氧阴离子清除能力测定
超氧阴离子自由基的清除对于保护早期的氧化
伤害是至关重要的 [ 17] 。随着紫藤花提取物浓度的增
加 ,超氧阴离子自由基的清除能力也在增强(图 3),
VC和这 2种提取物的能力大小分别为 VC>70 %甲
醇提取液 >水提取液 ,体积为 150μL时的清除能力
分别为 95.68%, 80.38%和 55.27 %,其中 70 %甲
醇提取液和水提取液对超氧阴离子的清除能力具有
显著差异(P<0.05)。
图 3　不同紫藤花提取物及 VC的超氧阴离子清除能力
2.4　紫藤花提取液对 DPPH自由基的清除能力
体内产生的活性氧自由基(ROS)包括过氧化物 、
氢过氧化物和次氯酸 ,过氧化物 、氢过氧化物可以和
一些可跃迁的金属离子相互反应 ,生成高活性氧 -羟
基自由基 。抗氧化物质可以和稳定态的 DPPH自由
基(深紫色)反应 ,转化为无色的 1, 1-二苯基-2-三硝
基苯胺[ 18] 。图 4显示的是紫藤花提取液对 DPPH自
由基的清除能力 。紫藤花提取液对 DPPH自由基的
清除能力与加入提取液的体积相关 ,对于所有的品
种 ,加入量越大 ,清除能力越强 。清除能力顺序为
70%甲醇提取液 >水提取液;当体积为 100 μL时 ,
紫藤花提取液对 DPPH自由基的清除能力分别为
85.48%和 54.66 %。与紫藤花 70 %甲醇提取液相
比 ,水提取液显著较低(P<0.05)。
图 4　不同紫藤花提取液对 DPPH自由基的清除能力
2.5　紫藤花提取液的总酚和总黄酮含量
酚类物质 、黄酮类化合物不仅能清除氧化反应链
反应引发阶段的自由基 ,而且可以直接捕捉自由基反
应链中的自由基 ,阻断自由基链反应起到预防和断链
的双重作用 [ 13] ;另外还具有氧化还原能力 ,可作为还
原剂 、氢受体和单线态氧淬灭剂[ 19] 。由表 1可以看
出 , 70%甲醇提取液中的酚类物质和黄酮含量显著高
于水提取液(P<0.05),说明 70 %的甲醇溶液更适
于紫藤花中总酚和黄酮的提取 。
表 1　紫藤花提取物中总酚 、总黄酮含量
含量 /(mg· g-1)干重 水提取物 70%甲醇提取物
总酚　 29.08±2.23a 42.77±3.24b
总黄酮 3.61±0.33a 7.77±0.43b
　　注:表 1所有数值均表示为平均值 ±SD(n=3),同行的不同字母
代表有显著差异(P< 0.05)。
　　已有许多文献报道 ,总酚 、黄酮和抗氧化能力之
间具有较高的正相关性 [ 20-21]或线性关系[ 10, 22] 。本
研究的发现与上述观点相似 ,紫藤花 70 %甲醇提取
液总酚和总黄酮含量高于水提取液 ,相应地 ,紫藤花
70%甲醇提取液的抗氧化能力均高于水提取液。但
对单个酚类或黄酮物质的分离和鉴定有必要做进一
步研究 ,特别是体内抗氧化试验 ,以更好的理解紫藤
花的抗氧化作用 。
3　结论
采用多个抗氧化体系评价了紫藤花的抗氧化作
用 ,结果表明紫藤花的 2种提取物具有较好的抗氧化
能力 ,其中体积分数 70 %甲醇提取液的抗氧化能力
强于水提取液。紫藤花中总酚 、黄酮与抗氧化能力有
生产与科研经验
2009年第 35卷第 12期(总第 264期) 85　
正相关性 。
参 考 文 献
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AntioxidantPropertiesofExtractsfromFlowersofWisteriasinensis
FuMaorun1 , WangXiao1 , ChenQingmin2 , GengYanling1
1(ShandongAnalysisandTestCenter, ShandongAcademyofSciences, Jinan250014, China)
2(ShandongYingyangyuanFoodTechnologyCo., Ltd., Jinan250014, China)
ABSTRACT　FlowersofWisteriasinensisisacommonedibleflower.Inthisstudy, theantioxidantactivityof70 %
methanolorwaterextractfromwisteriasinensisflowerswasdeterminedbyvariousantioxidantassays, includingtotal
antioxidant, freeradicalscavenging, superoxideanionradicalscavengingandreducingpowers.Theextractsshowed
strongantioxidantactivityinaltestedmethods.Amongthetwomethods, 70% methanolextractswerefoundtopos-
sessthehigherantioxidantactivitythanthatofwaterextracts.Apositivecorrelationbetweentheantioxidantactivity
andtotalphenoliccontentandflavonoidcontentwasobserved.
Keywords　Wisteriasinensisflower, antioxidantactivities, phenolic, flavonoid