全 文 ：·药品检验· 中国医药导报 2014 年 5 月第 11 卷第 14 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 14 May 2014
[基金项目] 西藏自治区第二批科技计划项目（编号 201210）。
[作者简介] 顿珠（1967.8-），男，藏族，西藏自治区江孜人，硕
士，教授，博士生导师，西藏藏医学院科研处处长，主要从事
藏医药学研究。
[通讯作者] 米玛（1966.4-），男，藏族，西藏自治区日喀则人，
硕士，教授，博士生导师，西藏藏医学院校党委副院长（分管
教学、科研），主要从事藏医药学研究。
结血蒿 Artemisia vestita Wall. ex Bess.，藏语名普
尔芒嘎保、普尔芒、普尔那，是菊科蒿属植物毛莲蒿干
燥的地上部分，是西藏自治区常用植物藏药材之一。
《度母本草》云：“普尔那生于低处阴坡，花呈蓝色而透
黑，气臭而味苦。 其灰称达玛、达玛嘎。 ”《蓝琉璃》云：
“叶细而多，如坎巴，墨绿色，无毛，以植株丛生高大者
为佳。 ”《甘露本草明镜》云：“多年生草本植物，根呈土
灰色，状如坎巴之根，茎直立，细，基部分枝，其上多灰
白色厚短柔毛，叶正、背面均被稀疏的白色柔毛，柄
短，互生，气臭。 花呈紫灰色，头状花序小。 ”《晶珠本
草》云：“普尔那生低处阴坡，基生叶圆形，深裂，被绒
毛，花青紫色，气臭。 ”[1]《晶珠本草》又云：“普尔那茎
长，叶绿白色，搓揉如艾叶气清香，有花为雄，无花为
雌。 ”[2]《如意宝树》云：“普尔芒杀虫，治虫病，粉末撒疮
干黄水。 ”让穷多吉说：“普尔芒干脓水。 ”《图鉴》说：
“普尔芒分为黑、白、紫三种，生地各不同”[3]。主要生长
在海拔 2600～4300 m 的山麓草地、灌丛林缘、砾石草
滩[4]，分布于青藏高原及全国大部分省区（华南、东南
沿海地区除外）。藏药结血蒿味苦、辛，性寒，藏医临床
用于清热解毒，治虫病、温毒疔毒疮、皮肤病、咽喉病
等。该药材也用于治疗妇科疾病，如乳腺炎、慢性附件
炎、痛经等炎症[5]。
查阅文献，藏药结血蒿化学成分研究的相关报道
较少，已知成分有绿原酸[6]、柳穿鱼素、棕矢车菊素、中
国蓟醇、伞型花内酯和蓟黄素[7]。 2012年版《西藏自治
区藏药材标准》中未收录含量标准[8]。考虑到蒿属植物
的特征植物马鞭草、冀首草等中均含有熊果酸，故而
选择对结血蒿中熊果酸的含量测定为本实验的研究
内容。 根据近几年对熊果酸的研究表明，其具有清热
利湿 [9]、抗肿瘤 [10-11]、抗氧化 [12]、降低血糖 [13]、保肝 [14]、抗
肝炎[15]、镇静[16]、降血脂、抗动脉粥样硬化、抑制艾滋病
高效液相色谱法测定藏药结血蒿中熊果酸含量
顿 珠 米 玛 陈 静 泽仁达瓦
西藏藏医学院，西藏拉萨 850000
[摘要] 目的 建立藏药结血蒿药材中活性成分熊果酸的定量分析方法，测定熊果酸含量。 方法 采用高效液相色
谱法（HPLC 法），色谱柱为 Aglient XDB C18（4.6 mm × 150 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液，体积流量
1.0 mL/min，检测波长 210 nm。 结果 熊果酸在 60~190 μg的质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r = 0.9997）；
平均回收率为 93.22%，RSD 为 2.64%。 结论 所建立的 HPLC 法简便快捷、准确，可用于结血蒿药材成分的定量
测定及质量控制，为安全、合理、有效用药及制定藏药结血蒿的药材质量标准提供科学依据。
[关键词] 结血蒿；熊果酸；定量测定；质量控制；高效液相色谱法
[中图分类号] R284 [文献标识码] B [文章编号] 1673-7210（2014）05（b）-0096-04
Content determination of ursolic acid in Artemisia vestita Wall. ex Bess. by
HPLC method
Dunzhu Mima CHEN Jing Zerendawa
Tibetan Traditional Medical College, Tibet Autonomous Region, Lhasa 850000, China
[Abstract] Objective To establish a HPLC method for determining ursolic acid in different fractions of Artemisia
vestita Wall. ex Bess. Methods The separation was performed on Aglient XDB C18 (4.6 mm × 150 mm, 5 μm) by HPLC,
using methanol - 0.1 % phosphoric as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was
210 nm. Results The linear range of ursolic acid was 60-190 μg ( r = 0.9997). The average recoveries was 93.22%
with RSD of 2.64%. Conclusion This method is simple, rapid and sensitive, and it can be used for the quality control
of Artemisia vestita Wall. ex Bess..
[Key words] Artemisia vestita Wall. ex Bess.; Ursolic acid; Assay; Quality control; HPLC
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中国医药导报 2014 年 5月第 11卷第 14期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 14 May 2014
·药品检验·
毒等功效。 目前，对结血蒿的熊果酸成分研究未见文
献报道。本文采用 HPLC法测定藏药结血蒿中熊果酸
的含量，深入研究该药材的活性成分，为该药材的质
量标准制定提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters 高效液相色谱仪 e2695（美国 Waters 公
司，UV 检测器）；PL202-L 型电子分析天平（Metteler
Tole Do）；K-Q-500DE 型数控超声波清洗器（昆山市
超声仪器有限公司）。
1.2 试剂
熊果酸对照品（成都普菲德生物技术有限公司，
批号：121118-77521）；含量测定用试剂：甲醇为色谱
纯（进口），水为去离子水，其他试剂均为分析纯。
1.3 药材
采摘药材：藏药结血蒿；采摘时间：2013 年 8 月
和 9 月；采摘地点：西藏自治区拉萨市夺底沟藏药材
基地和西藏自治区昌都地区；药材鉴定：经西藏自治
区级药材鉴定专家嘎务副教授（原西藏藏医学院实
验标本中心主任）鉴定，两地采摘药材均为菊科植物
毛莲蒿的全草。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Aglient XDB C18（4.6 mm × 150 mm， 5 μm）；
流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（9∶1）；流速：1.0 mL/min；
柱温：30℃；检测波长：210 nm；进样量：10 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取熊果酸对照品 0.0100 g，置 10 mL容量瓶
中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成 1.0 mg/mL
的对照品溶液，备用。
2.3 供试品溶液的制备
取不同产地的结血蒿粉末（40 目筛）约 0.5 g，精
密称定，加甲醇适量，超声提取 30 min，取出，放至室
温，加甲醇定容至 50 mL，摇匀，用 0.45 μm 微孔滤膜
过滤，作为供试品溶液。
2.4 空白溶液的制备
取甲醇适量，超声提取 30 min，取出，放至室温，
加甲醇定容至 50 mL，摇匀，用 0.45 μm微孔滤膜过滤，
作为空白溶液。
2.5 方法学考察
2.5.1 系统适应性试验 分别取对照品溶液、供试品溶
液，按确定的色谱条件进样测定。结果表明，检测效果
良好，熊果酸对照品峰与供试品的其他组分色谱可达
基线分离；理论塔板数按熊果酸峰计不低于 3000。 见
图 1。
A：对照品；B：供试品；C：空白（甲醇）
图 1 对照品熊果酸、供试品溶液及空白高效液相色谱图
2.5.2 精密度试验 精密吸取熊果酸对照品 10 μL，重
复进样 7次，按上述色谱条件测定峰面积，计算含量，
RSD为 2.32%，表明仪器精密度良好。
2.5.3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 10 μL，
分别于 0、4、8、12、18、24 h 注入高效液相色谱仪，测
定峰面积，计算含量，RSD 为 4.13%，表明样品中熊果
酸在 24 h内稳定性良好。
2.5.4 重现性试验 精密称取同一结血蒿样品 7 份，每
份 0.1 g，加甲醇适量，超声提取 30 min，取出，放至室
温，加甲醇定容至 50 mL，摇匀，用 0.45 μm 微孔滤膜
过滤，作为供试品溶液。进样量 10 μL，按“2.1”项下色
谱条件注入高效液相色谱仪，在 210 nm 处检测波长，
测定熊果酸含量，RSD = 3.55 %， 表明该方法的重现
性较好。
2.5.5 加样回收率试验 精密称取已知含量的结血蒿
样品 9 份，每份 0.2 g 左右，加入熊果酸对照品适量，
加甲醇适量，超声提取 30 min，取出，放至室温，加甲
醇定容至 50 mL，摇匀，用 0.45 μm 微孔滤膜过滤，作
B
C
A
时间（min）
时间（min）
时间（min）
响
应
值
（ A
U
）
响
应
值
（ A
U
）
响
应
值
（ A
U
）
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·药品检验· 中国医药导报 2014 年 5 月第 11 卷第 14 期
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为供试品溶液。 按“2.1”项下色谱条件注入高效液相
色谱仪，在 210 nm 处检测波长，测定熊果酸含量，平
均回收率为 93.22%，RSD = 2.64%。 见表 1。
表 1 熊果酸成分测试平均回收率试验结果
2.5.6 样品含量测定 取不同产地的结血蒿粉末（40
目筛 ）约 0.5 g，精密称定 ，加甲醇适量 ，超声提取
30 min，取出，放至室温，加甲醇定容至 50 mL，摇匀，
用 0.45 μm 微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。 精密吸
取制备好的不同产地的结血蒿供试品溶液各 10 μL，
分别注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件在
210 nm 处检测波长，测定熊果酸含量，计算不同产地
的 2个样品中熊果酸含量。 见表 2。
表 2 不同产地结血蒿中熊果酸的测定结果
3 讨论
3.1 提取条件的选择
查阅文献 [17-20]，近年来的研究多采用乙醇溶液或
甲醇溶液超声提取熊果酸。本实验比较了不同超声提
取及加热回流提取的效果，发现甲醇超声提取结果最
好，且操作简便。对熊果酸不同的提取时间进行考察，
以甲醇为提取溶剂，分别超声提取 20、30、40 min，结果
发现 20 min 提取不完全，30 min 与 40 min 的提取效
果基本一致，故选择超声提取 30 min。
3.2 色谱条件的选择
熊果酸在紫外区只有末端吸收，结合试验选择
210 nm为本实验的测定波长。
3.3 流动相的选择
本实验仅检测熊果酸成分，故选用等度洗脱。 对
不同流动相进行考察，分别选择甲醇-水、甲醇-0.1%
磷酸为流动相进行测定，结果发现，甲醇-水作为流动
相时的分离效果不好，甲醇-0.1%磷酸为流动相时的分
离效果好，且与样品其他成分分离较好，能够满足实
验要求。
藏药结血蒿为蒿属植物，是西藏地区常用药物之
一，为藏医临床广泛使用，主要用于清热解毒、消炎，
治疗眼病。 结血蒿药材临床使用的历史久远，临床用
药普遍，但查阅文献，对该药材的成分研究报道较少。
为深入研究藏药结血蒿药材的成分，明确药材的有效
成分和道地药材而开展本实验，实验方法科学、有效，
实验数据具有科学性，能够为安全、合理、有效用药及
制定藏药结血蒿的药材质量标准提供科学依据。
综上，本研究采用 HPLC 法对藏药结血蒿药材中
熊果酸进行测定。 根据结果可知，西藏地区不同产地
结血蒿药材中熊果酸含量差异较大，产自昌都地区的
结血蒿药材中熊果酸含量明显高于产自拉萨夺底沟
藏药材基地的结血蒿药材中的含量。
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1
2
拉萨
昌都
8.02
8.48
8.31
16.85
17.53
17.21
8.27±0.23
17.20±0.34
2.81
1.98
编号 产地 含量（mg/g） 平均含量（mg/g，x±s） RSD（%）
0.2371
0.2985
0.2333
0.2104
0.2993
0.2311
0.2049
0.2507
0.2674
2.0013
2.3974
1.9256
1.8761
2.4692
1.9065
1.6904
2.0683
2.2060
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
3.7324
4.0504
3.7839
3.4873
4.2529
3.5287
3.3715
3.8356
4.0104
93.28
92.11
96.39
89.97
95.16
90.33
91.36
94.28
96.07
93.22 2.64
取样量
（g）
样品中含量
（mg）
加入量
（mg）
测得量
（mg）
回收率
（%）
平均回收
率（%）
RSD
（%）
（下转第 101页）
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CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 14 May 2014
·制剂与技术·
取 10 倍处方量的药材，按优选的工艺条件制备 3 批
样品，按“2.1.6”项下方法，测定苦参碱的含量分别为
0.8120、0.8043、0.8139 mg/mL，测得值与正交表中的试
验结果较为一致，表明该工艺合理可行，稳定可靠，具
有可操作性和重现性。
3 讨论
本试验采用正交试验法，以苦参碱含量为指标，
对参菊洗剂的提取工艺进行了优选，确定最佳工艺参
数，即加水量为 8倍，浸泡时间 2 h，提取 2次，每次 2 h，
并进行了验证试验，提高了药材的利用程度和参菊洗
剂中苦参碱的含量。
中药制剂的疗效是多种活性成分共同作用的结
果，仅对其中的一个或几个成分加以控制，难以全面
把握制剂的质量、疗效和稳定性。苦参为本方主药，本
试验仅对参菊洗剂中的苦参碱含量进行测定，可作为
其质量控制指标之一，其他活性成分的控制还有待进
一步探讨。
药材在提取前应浸泡 2 h，使其吸水完全，组织浸
润疏松，有利于有效成分的溶出，否则，药材中的淀
粉、蛋白质等受热凝固，阻碍有效成分的溶出。
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