全 文 ：［收稿日期］ 20121122(010)
［基金项目］ 广西自然科学基金项目(2010GXNSFA013196) ，
广西中医药管理局中医药科技专项课题
(GZKZ09-12)。
［通讯作者］ * 秦祖杰，副教授，主要从事中医内科学教学与科
研，Tel:0771-3143812，E-mail:109741754@ qq． com
赪桐根中总黄酮的提取工艺优选
秦祖杰* ，梁洁，孙正伊
( 广西中医药大学，南宁 530001)
［摘要］ 目的:对广西产赪桐根中总黄酮的提取工艺进行研究，建立其含量测定方法。方法:以总黄酮含量为考查指标，
采用正交试验优选提取工艺;以芦丁为对照品，采用紫外-可见分光光度法测定，测定波长 506 nm。结果:总黄酮的线性范围
为 8. 584 ～ 51. 504 mg·L －1(r = 0. 999 4) ，平均加样回收率为 100. 11%，RSD 0. 24%(n = 6) ;最佳提取工艺为 15 倍量 50%乙醇
超声提取 1. 5 h。结论:建立了赪桐根中总黄酮最佳的提取工艺和含量测定的方法，所建立的体系精确可靠。
［关键词］ 赪桐根;总黄酮;紫外-可见分光光度法
［中图分类号］ R286． 3，R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)05-0060-03
Optimization of Extraction Technology of Total Flavones
from Roots of Clerodendrum japonicum
QIN Zu-jie* ，LIANG Jie，SUN Zheng-yi
(Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China)
［Abstract］ Objective:To optimize extraction technology of total flavones from the roots of Clerodendrum
japonicum in Guangxi and establish its content determination method． Method:Orthogonal experiments were used
to optimize extraction technology． Rutin was defined as the standard and UV method was adopted． The detective
wavelength was at 506 nm． Result:The linearity was in the range of 8. 584-51. 504 mg·L －1 (r = 0. 999 4)． The
average recovery rate was 100. 11% with RSD of 0. 24% ． Optimum conditions of ultrasonics extraction were as
follow:extracted with 15 times the amount of 50% ethanol in 1. 5 hour． Conclusion:High effciency extraction
method and accurate and reproducable content determination method of total flavones from the roots of C．
japonicum has been estabished，which paved the way for further exploitation．
［Key words］ Roots of Clerodendrum japonicum;total flavones;UV-Vis spectrophotometry
赪桐，又名红龙船、荷苞花、抽须红、木通莲、珍
珠梧桐［1］“个朋被”(广西壮族语)［2］。为广西、福建
等地民间传统用药。赪桐根主要含有鞣质、酚酸类、
黄酮类及挥发油等成分［3］。味甘，性凉，具有清肺
热、利小便、凉血止血之功效，主治肺热咳嗽、热淋小
便不利、咳血、尿血、痔疮出血、风湿骨痛等［1］。有
关赪桐根中总黄酮的含量测定方法尚未见报道，我
们对比了不同的显色方法，最后采用以芦丁为对照
品，NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色后，用紫外-可见分
光光度法测定赪桐根中总黄酮含量，为更好地开发
利用该药材资源提供了理论依据。
1 材料
1. 1 仪器 Agilent8453 紫外-可见分光光度度计
(美国安捷伦公司) ，SB3200T 型超声波清洗仪(上
海能信超声有限公司) ，BP211D 型电子天平分析天
平(德国赛多利斯公司)。
1. 2 试剂和药品 赪桐根采自广西南宁市武鸣县，
经广西中医学院中药鉴定教研室滕建北副教授鉴定
为 Clerodendrum japonicum (Thunb．)Sweet．的根，标
本存于广西中医学院药物分析教研室;芦丁对照品
(中国药品生物制品检定所，批号 100080-200707，
·06·
第 19 卷第 5 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 5
Mar．，2013
供含量测定用) ;其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取 105 ℃干燥至
恒重的芦丁对照品 5. 365 mg，置于 25 mL 量瓶中，
用 50%乙醇稀释至刻度，摇匀，配制成0. 214 6 g·
L －1的芦丁对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的制备 取赪桐根粗粉约 1. 0 g，
精密称定，加入 50% 乙醇 15 mL，称重，超声提取
1. 5 h，放冷，用 50%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续
滤液作为赪桐根供试品溶液。
2. 3 测定方法及测定波长选择
2. 3. 1 直接紫外-可见分光亮度法［4］ 精密量取供
试品溶液 1 mL，置于 25 mL 容量瓶中，用 50%乙醇
定容。以相应试剂作空白，照紫外-可见分光光度度
法，在 200 ～ 800 nm 测定吸收光谱图，其在 203，
280，487 nm有最大吸收，但由于含量较低其吸收度
较小且不稳定，不利于计算。故不采用此法测定赪
桐中总黄酮含量。
2. 3. 2 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法 精密量取
对照品和供试品溶液各 2 mL，分别置于 25 mL量瓶
中，分别加入 50%乙醇 6 mL，再加入 5%亚硝酸钠
溶液 1 mL，摇匀，放置 6 min;加入 10% 硝酸铝 1
mL，摇匀，放置 6 min;再加入 4%氢氧化钠 10 mL，
用 50%乙醇定容至刻度，摇匀，放置 15 min。以相
应试剂作空白，照紫外-可见分光光度法［5］，在400 ～
800 nm扫描，芦丁对照品溶液和赪桐根供试品溶液
的最大吸收波长为 506 nm，故将 506 nm 作为测定
波长。
2. 3. 3 AlCl3 显色法
［6］ 精密量取供试品溶液 0. 4
mL，置于 25 mL 容量瓶中，加 1% AlCl3 醇溶液 0. 5
mL，用乙醇溶液定容至刻度，摇匀，静置 40 min。以
相应试剂做空白，在 200 ～ 800 nm 扫描，在 281，
325，487 nm处有最大吸收，带Ⅰ红移，但峰形平缓
且吸收度没有明显增大。
2. 3. 4 HCl-Mg显色法［7］ 精密量取供试品溶液 2
mL，置于加有 200 mg 镁粉的 50 mL具塞比色管中，
加入 1 mL 70%乙醇，摇匀，将比色管置于冷水浴中，
缓慢滴加 2 mL浓盐酸并不时振摇，摇匀，沸水浴中
加热 1 h，迅速冷却至室温，加 70%乙醇至 25 mL刻
度线，摇匀，静置 20 min，以相应试剂做空白，在
200 ～ 800 nm 扫描，在 487 nm 处有最大吸收峰，但
吸收度极弱。
综上所述，只有 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色
法比较适合赪桐根的总黄酮含量测定。
2. 4 标准曲线的绘制 精密吸取芦丁对照品溶液
1，2，3，4，5，6 mL，分别置于 25 mL 容量瓶中，按
2. 3. 2 项下“加入 50%乙醇 6 mL”起同法操作，以相
应试剂为空白，在 506 nm 波长处测定吸收度，以对
照品溶液吸收度为纵坐标，浓度(g·L －1)为横坐标，
绘制标准曲线，并求出回归方程为 Y = 12. 04X －
0. 087，(r = 0. 9994)。结果表明，芦丁对照品在
8. 584 ～ 51. 504 mg·L －1呈良好的线性关系。
2. 5 提取工艺单因素考察
2. 5. 1 提取方法的考察 比较了浸渍提取、回流提
取和超声提取 3 种提取方法对赪桐根总黄酮的提取
效果。称取赪桐根粗粉 3 份，每份约 1. 0g，精密称
定，分别加入 50%乙醇 10 mL，采用以上 3 种提取方
法分别提取 1 h，取续滤液 1 mL，置于 25 mL容量瓶
中，按 2. 3. 2 项下“加入 50%乙醇 6 mL”起同法操
作，计算赪桐根总黄酮含量。结果浸渍提取、回流提
取和超声提取总黄酮的含量分别为 0. 35%，
0. 38%，0. 66%。试验结果表明超声提取对赪桐根
总黄酮的提取率最高。
2. 5. 2 提取溶剂浓度的考察 分别比较了 30%，
50%，75%，95%乙醇对赪桐根总黄酮的提取效果。
称取赪桐根粗粉 4 份，每份约 1. 0 g，精密称定，置具
塞锥形瓶中，分别加入上述不同的溶剂各 10 mL，称
重，超声处理 1 h，放冷，分别用上述不同的溶剂补足
重量，摇匀，滤过，取续滤液 1 mL，置于 25 mL 容量
瓶中，加入 6 mL 相应溶剂，再按 2. 3. 2 项下“加入
5%亚硝酸钠溶液 1 mL”起同法操作，计算赪桐根总
黄酮含量。结果 30%，50%，75%，95%乙醇提取总
黄酮 的 含 量 分 别 为 0. 43%，0. 65%，0. 55%，
0. 17%。试验结果表明 50%乙醇提取赪桐根总黄
酮的提取率最高。
2. 5. 3 物料比的考察 分别比较了物料比为 1 ∶
10，1∶ 20，1∶ 50 的 50%乙醇对赪桐根总黄酮的提取
效果。称取赪桐根粗粉 3 份，每份约 1. 0 g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，分别加入 50%乙醇 10，20，50
mL，称重，超声处理 1 h，放冷，用 50%乙醇补足重
量，摇匀，滤过，取续滤液 1 mL，置于 25 mL 容量瓶
中，按 2. 3. 2 项下“加入 50%乙醇 6 mL”起同法操
作，计算赪桐根总黄酮含量。结果物料比为1∶ 10，1∶
20，1∶ 50 的 50% 乙醇提取总黄酮的含量分别为
0. 65%，0. 64%，0. 63%。试验结果表明物料比为1∶
10 的 50%乙醇提取赪桐根总黄酮的提取率最高。
2. 6. 2 正交试验 采用正交实验法优化提取方法，
考察了乙醇浓度、物料比、提取时间对提取结果的影
·16·
秦祖杰，等:赪桐根中总黄酮的提取工艺优选
响，各因素取 3 水平，进行 L9(3
4)正交试验，正交设
计表及分析结果见表 1 ～ 3。
表 1 赪桐根中总黄酮的提取工艺正交设计因素水平
水平
A乙醇积分数
/%
B物料比
/ g∶ mL
C提取时间
/h
1 50 1∶ 5 0. 5
2 60 1∶ 10 1
3 70 1∶ 15 1. 5
表 2 赪桐根中总黄酮的提取工艺正交试验安排
No． A B C D
总黄酮
/%
1 1 1 1 1 0. 51
2 1 2 2 2 0. 65
3 1 3 3 3 0. 67
4 2 1 2 3 0. 50
5 2 2 3 1 0. 55
6 2 3 1 2 0. 50
7 3 1 3 2 0. 38
8 3 2 1 3 0. 32
9 3 3 2 1 0. 39
K1 0. 610 0. 463 0. 443 0. 483
K2 0. 517 0. 507 0. 513 0. 510
K3 0. 363 0. 520 0. 533 0. 497
R 0. 247 0. 057 0. 090 0. 027
表 3 总黄酮含量方差分析
方差来源 SS f MS P
A 0. 093 2 93 ＜ 0. 05
B 0. 005 2 5 ＞ 0. 05
C 0. 013 2 13 ＞ 0. 05
误差 0. 00 2
注:F0. 05(2，2)= 19。
因素极差 R 越大，说明因素的水平改变对试验
结果影响也越大。由试验结果的直观分析及方差分
析可知，影响赪桐根总黄酮提取效果的因素大小顺
序为 A ＞ C ＞ B，乙醇体积分数对试验结果有显著性
影响，其差异有统计学意义。确定最佳提取方法为
A1B3C3:即用 50%乙醇按照 1 ∶ 15 的物料比超声提
取 1. 5 h。
2. 7 验证试验 为了进一步考察优选工艺的可靠
性和稳定性，取 3 份药材按上述最优工艺条件
A1B3C3 进行验证试验，按 2. 3. 2 项下所述方法进行
测定，结 果 其 总 黄 酮 提 取 量 为 0. 670 6%，
0. 674 5%，0. 667 7%。平均含量 0. 670 9%，RSD
0. 50%。与正交试验方案中的最高值同，说明优化
是成功的。
2. 8 方法学考察 按 2. 3. 2 项下所述方法进行测
定，连续测定 6 次，芦丁对照品吸收度的 RSD
0. 35%，表明精密度良好。重复性试验表明赪桐根
总黄酮平均含量0. 671 6%，RSD 0. 38% (n = 6)。
稳定性试验表明在 30 min 内显色基本稳定。加样
回收试验结果表明，平均回收率为 100. 11%，RSD
0. 24%，表明该方法可靠，准确度高。
2. 9 样品的测定 精密称取 3 批赪桐根药材粉末
样品 1 g，精密量取供试品溶液 2 mL，按 2. 3. 2 项下
所述方法进行测定，连续测定 3 次，并计算赪桐根中
总黄酮的平均质量分数为 0. 66%。
4 讨论
从单因素的考察结果来看，提取方法与提取浓
度单因素处理差异比较显著，而物料比单因素处理
差异不显著。采用超声辅助 50%乙醇提取优于其
他提取方法，提取率较高。而正交试验优化并验证
了最好的提取工艺为用 50%乙醇按照 1∶ 15 的物料
比超声提取 1. 5 h。
总黄酮的含量测定还受到多方面因素的影响，
如吸收波长的选择、仪器的选择等，其测定条件的
确定与控制尚有待进一步试验。此方法简便、快速，
准确度好，精密度高，可用于赪桐根药材中总黄酮的
质量控制，为建立其科学的质量评价方法有一定的
指导意义。
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［责任编辑 李玉洁］
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第 19 卷第 5 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 5
Mar．，2013