全 文 ：胆木叶抗 MRS活性研究
苏 奎 1, 2 ,龚 敏1 ,周 静1 ,邓世明 2　(1.石河子大学食品学院 ,新疆石河子 832000;2.海南大学海洋学院 ,海南海口 570228)
摘要　以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRS)、大肠杆菌 、普通金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌为供试菌种 ,采用滤纸片
琼脂扩散法研究胆木叶提取物的体外抑菌活性。结果表明 ,以 40%以上体积分数乙醇为提取剂时 ,胆木叶提取物对 MRS具有抑菌活
性 ,且乙醇的体积分数越大 ,提取物的抑菌活性越强;胆木叶乙醇提取物中的中高极性溶剂萃取段抑菌活性最强。胆木叶水煮液对大肠
杆菌具有抑菌活性 ,醇提液对大肠杆菌只有极弱的抑菌活性。胆木叶醇提液和水煮液对普通金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌 、枯草芽孢
杆菌只有极弱的抑菌活性。
关键词　胆木;MRS;抑菌活性
中图分类号　S567.1+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)25-12014-03
StudyonAnti-MRSActivityofNaucleaoficinalisLeaves
SUKuietal　(FoodColegeofShiheziUniversity, Shihezi, Xinjiang832000)
Abstract　Withmethicilin-resistantstaphylococcusaureus(MRS), escherichiacoli, staphylococcusarureus, proteusvulgaris, bacilussub-
tilisasthetestedstrains, thevitroantibacterialactivityofextractsfromNaucleaofficeinalisleaveswasdeterminedbyfilterpaperagardifusion
method.TheresultsshowedthattheextractfromN.oficeinalisleaveshadantibacterialactivityonMRSwhenethanolwhichvolumefraction
wasmorethan40%wastakenasextractant, andthebiggerthevolumefractionofethanolwasthestrongertheantibacterialactivityoftheex-
tractwas.TheantibacterialactivityofmiddleandhighpolarsolventextractionsectionofethanolextractfromN.oficeinalisleaveswasthe
strongest.ThedecoctionofN.oficeinalisleaveshadantibacterialactivityonescherichiacoli, whilethealcoholextractonlyhadexceedingly
weakantibacterialactivityonescherichiacoli.ThealcoholextractanddecoctionofN.oficeinalisleavesonlyhadexceedinglyweakantibacte-
rialactivitiesonstaphylococcusarureus, proteusvulgarisandbacilussubtilis.
Keywords　Naucleaofficinalis;MRS;Antibacterialactivity
基金项目　国家科技支撑计划(2007BAI27B05)。
作者简介　苏奎 (1983-),男 ,安徽阜阳人 ,硕士研究生 , 研究方向:
食品化学。
收稿日期　 2009-05-04
　　胆木别名乌檀 、熊胆树 、树黄柏 ,为茜草科乌檀属乔木 。
高达 10 m以上 ,木材鲜黄色 ,坚硬 ,喜生于低海拔至中海拔
的山谷疏密林中。在我国主要分布于广东 、广西 、云南等省
区 。其药用枝条 、树干和根全年可采 。性味苦 、寒 ,具有清热
泻火之功效 ,可用于治疗外感发热 ,急性扁桃体炎 ,咽喉炎 ,
支气管炎 ,肺炎 ,肠炎 ,痢疾 ,急性黄疸 ,胃痛等 [ 1] 。胆木的传
统药用部位为茎 、皮 [ 2] 。目前 ,开发应用的胆木产品有 “胆木
注射液 ”和 “胆木浸膏片 ”中药制剂 ,临床用于治疗急性扁桃
腺炎 ,急性咽喉炎 ,急性结膜炎及上呼吸道感染 。符健等 [ 3]
用毛细血管通透性 、耳肿胀 、跖肿胀 、慢性肉芽肿 、解搏等方
法对胆木浸膏片进行了药理研究 ,结果表明 ,胆木浸膏片对
冰醋酸引起的小鼠腹部毛细血管通透性增加 、二甲苯所致的
小鼠耳肿胀 、大鼠蛋清性足跖肿和棉球肉芽组织增生均具有
抑制作用。同时 ,该药品对伤寒 vi多糖菌苗引起的家兔体温
升高具有明显的抑制作用 。笔者采用生物活性追踪法 ,以耐
甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRS)、大肠杆菌 、普通金黄色葡
萄球菌 、普通变形杆菌 、枯草芽孢杆菌为供试菌 ,对胆木叶提
取物的体外抑菌活性及其作用机制进行了研究 ,以期为胆木
新药的开发提供理论依据 。
1　材料与方法
1.1　材料　①胆木叶 、胆木材(包括茎 、皮),于 2005年 7月
采自海南省琼中地区。所采样品于阴凉通风处自然风干后
粗粉碎 ,置室温下保存备用;胆木浸膏片 、硫酸庆大霉素购自
药品超市;硫酸卡那霉素由中国热带农业科学院热带生物技
术研究所提供 。②抑菌活性供试菌:耐甲氧西林金黄色葡萄
球菌(Methicilinresistantstaphylococcus, MRS),由中国热带
农业科学院热带生物技术研究所提供;大肠杆菌(E.coli)、普
通金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、普通变形杆菌
(P.Vulgaris)、枯草芽孢杆菌(Bacilsubtilis)由海南大学公共
实验中心微生物实验室提供 。③培养基:牛肉膏蛋白胨培养
基 [ 4] 。
1.2　方法
1.2.1　抑菌活性初步评价。分别定量称取胆木叶 、胆木材 ,
按料液比 1∶2用体积分数 95%的乙醇恒温水浴摇床辅助浸
提 , 50℃,提取 24h,连续提取 3次(每次提取后用滤纸过滤 ,
滤渣加入提取溶剂再次提取),合并 3次浸提液 ,减压浓缩蒸
出溶剂得样品。
分别定量称取胆木叶 、胆木材 ,按料液比 1∶5加入蒸馏
水 ,水蒸汽回流提取 3次 ,第 1次提取 2.0h,第 2、3次均提取
1.5h。每次提取后用滤纸过滤 ,滤渣加入提取溶剂再次提
取 ,合并各次浸提液 ,减压浓缩蒸出溶剂得样品。
采用纸片扩散法 [ 5] ,吸取 0.1 ml适宜浓度的菌悬液 ,加
入备用的平板培养基上 ,涂布均匀 。无菌条件下将待测样品
稀释后滴加在滤纸片(6.0 cm)上 ,每片载药量为 2.5 mg,滤
纸片自然风干后帖于平板培养基上 ,每皿(d=9 cm)4片 ,每
皿中央为阳性对照 , MRS的阳性对照为硫酸卡那霉素 、其他
菌种的阳性对照为硫酸庆大霉素 , 37 ℃培养 24 h,测定抑菌
圈大小 。
1.2.2　不同体积分数乙醇提取物抑菌活性的比较。分别以
体积分数为 0、20%、40%、60%、80%、95%的乙醇为浸提溶
剂 ,按 “1.2.1”的方法制备样品并测定其抑菌活性。
1.2.3　乙醇提取物的系统溶剂分离及活性跟踪 。称取胆木
叶粗干粉 ,以前述方法制得胆木叶 95%乙醇提取液 ,减压浓
缩得浸膏。采用系统溶剂法分离得到各有机溶剂段:石油醚
段 、二氯甲烷段 、乙酸乙酯段 、正丁醇段 、水段。将各有机溶
剂段减压浓缩后制得浸膏 ,为进一步明确乙醇提取物中的抑
责任编辑　常俊香　责任校对　况玲玲安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(25):12014-12016
菌成分 ,按 “1.2.1”的方法进行抑菌活性跟踪试验。
1.2.3.1　石油醚段的柱层析 、活性跟踪。以 “1.2.3”的方法
得石油醚段。经处理后定量取样 ,上 7.9cm×100.0 cm硅胶
柱 ,用石油醚∶乙酸乙酯 =9∶1的洗脱剂洗脱(掏柱洗脱),薄
层检测合并相近成分 , 3段减压浓缩得浸膏。为进一步明确
石油醚段中的抑菌物质 ,以 “1.2.1”的方法进行抑菌活性跟
踪试验。
1.2.3.2　二氯甲烷段的柱层析分离 、活性跟踪 。以 “1.2.3”
的方法得二氯甲烷段 。经处理后定量取样 ,上 6 cm×33 cm
减压硅胶柱 ,用二氯甲烷∶乙酸乙酯 =20∶1 ～0∶20 6种不同洗
脱剂梯度洗脱 ,薄层检测相近成分不明显 ,故得 6段柱层析
分离部分 ,减压浓缩制浸膏。为进一步明确二氯甲烷段中的
抑菌物质 ,以 “1.2.1”的方法进行抑菌活性跟踪试验。
1.2.3.3　水层大孔吸附树脂不同浓度乙醇洗脱的抑菌活性
比较。以 “1.2.3”的方法得水层 ,经大孔吸附树脂吸附后分
别用体积分数为 0、5%、30%、95%的乙醇梯度洗脱 ,得 4部
分洗脱物。为进一步明确水段中的抑菌物质 ,以 “1.2.1”的
方法进行抑菌活性跟踪试验。
2　结果与分析
2.1　胆木叶抑菌活性的初步评价　以 95%乙醇和蒸馏水
为提取溶剂 ,所得浸提液对 MRS和 E(大肠杆菌)的抑制效
力如图 1所示。由图 1可知 ,水提液对 MRS只有极弱的抑菌
活性 , 95%乙醇提取液具有较强的抑菌活性 ,水煮液具有较
弱的抑菌活性;胆木叶醇提物对 E只有极弱的抑菌活性 ,胆
木叶水煮液对 E具有较弱的抑菌活性 、胆木材水煮液和 95%
乙醇提取液及胆木浸膏片对 E均具有很强的抑菌活性 。各
样品对 S(普通金黄色葡萄球菌)、P(普通变形杆菌)、B(枯
草芽孢杆菌)只有极弱的抑菌活性 。
图 1　胆木各溶剂提取物的抑菌效力
Fig.1　TheantibacterialeffectofextractsfromNaucleaofficina-
lisbydiferentsolvents
2.2　不同体积分数乙醇浸提物的抑菌效力　由图 2可知 ,
胆木叶乙醇提取液的抑菌活性与乙醇的体积分数呈正相关 。
乙醇体积分数 40%以下的提取液均未表现出明显的抑菌活
性 ,乙醇体积分数 60%以上的提取液均具有较强的抑菌活
性 。因此 ,应采用高体积分数的乙醇提取胆木叶中的抑菌活
性物质;不同体积分数乙醇提取液对 E、S、P、B只有极弱的抑
菌活性 ,与初步评价结果相符。
图 2　不同体积分数乙醇浸提物的抑菌效力
Fig.2　Theantibacterialefectofethanolextractswithdiferent
volumefraction
2.3　乙醇提取物的系统溶剂分离及活性跟踪　由图 3可
知 ,乙醇提取物的有机溶剂萃取部分对 MRS均具有抑菌活
力 ,其中 ,中高极性萃取部分的活力最强。除水层对 S、P、B
无明显抑菌活性外 ,其余各萃取部分对 E、S、P、B均具有极弱
的抑制活力。
注:PE.石油醚 petroleum;MC.二氯甲烷 methylenechloride;EA.乙
酸乙脂 ethylacetate;NB.正丁醇 n-butylalcohol;Wa.蒸馏水
water;CK.硫酸卡那霉素 resistomycin。
Note:PE, Petroleum;MC, Methylenechloride;EA, Ethylacetate;
NB, n-butylalcohol;Wa, water;CK, Resistomycin.
图 3　乙醇提取物系统溶剂分离段的抑菌效力
Fig.3　Theantibacterialeffectofsystematicsolventseparationof
theethanolextractsfromNaucleaofficinalis
2.3.1　石油醚段的柱层析分离 、活性跟踪 。由图 4可知 ,各
图 4　石油醚段柱层析后各小段抑菌活性的比较
Fig.4　Theantibacterialactivitycomparisonofdifferentparts
frompetroleumethersolublefractionaftercolumnchro-
matography
1201537卷 25期　　　　　　　　　　　　　　　　苏奎等　胆木叶抗 MRS活性研究
石油醚段对 MRS均具有较弱的抑制活力 ,说明作用成分比
较分散;石油醚 1、2段对 E、S、P、B无明显抑制活力 , 3段对
E、S、P、B均具有极弱的抑制活力。
2.3.2　二氯甲烷可溶部分的柱层析分离 、活性跟踪。由图 5
可知 ,除 5外 ,各段对 MRS均具有抑制活力 , 6对 MRS的作
用最强 ,与中高极性溶剂洗脱物的抑菌活力较强相一致;各
段对 E、S、P、B只有极弱的抑制活力。
图 5　二氯甲烷段柱层析后各小段抑菌活性的比较
Fig.5　Theantibacterialactivitycomparisonofdiferentparts
frommethylenechloridesolublefraction
2.3.3　水层大孔吸附树脂不同浓度乙醇洗脱物的抑菌活性
比较。由图 6可知 ,乙醇浓度越高洗脱物的抑菌活性越明
显 ,说明抑菌活性物质主要存在于高浓度乙醇洗脱物中 ,但
各小段的抑菌活性均无划段前强;各段对 E、S、P、B只有极弱
的抑制活力。
3　讨论
MRS[ 6] (Methicilinresistantstaphylococcus)被称为 “超级
病菌 ”,所有 β-内酰胺类抗菌药物对 MRS临床治疗均无效;
图 6　不同体积分数乙醇洗脱物的抑菌效力
Fig.6　Theantibacterialefectofethanoleluateswithdiferent
concentration
同时 , MRS对氟喹诺酮类 、氨基糖甙类 、大环内酯类等抗菌药
物的耐药性也不断升高。胆木叶 95%乙醇提取物中中高极
性有机溶剂萃取成分对 MRS菌株具有很好的抑菌效果 ,为
开发抑制 MRS菌株的中药提供了理论依据。胆木浸膏片大
肠杆菌具有一定的抑菌活性;胆木叶醇提液和水煮液对普通
金黄色葡萄球菌 、普通变形杆菌 、枯草芽孢杆菌只有极弱的
抑菌活性。
参考文献
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(上接第 11963页)
表 3　不同处理对高羊茅经济性状的影响
Table3　TheefectsofdifferenttreatmentsontheeconomiccharactersofFestucaarundinaceaSchreb
处理Treat-ments
株高∥mmPlantheight
叶片数片 /株Bladecount
鲜草质量mg/株Massoffreshgrass
干草质量mg/株Haymass
密度株 /cm2Density
根系长mmRootlength
根系数量条/株Rootamount
根系鲜重mg/株Freshweightofroot
根系干重mg/株Dryweightofroot
1 138.42aA 3.18aA 27.56aA 9.65aA 14.28aA 26.38aA 4.76aA 6.23aA 2.19aA
2 117.16cC 2.88cBC 23.33cC 8.16cC 12.07cA 22.33cC 4.29cA 5.27cC 1.85cC
3 127.35bB 3.03abA 25.35bB 8.87bB 13.13bA 24.27bB 4.52abA 5.73bB 2.01bB
4(CK) 107.78dD 2.73cdC 21.46dD 7.52dD 11.12dA 20.54dD 4.08dA 4.85dD 1.69dD
3　结论
混合基质以糠醛渣∶稻壳∶粉煤灰∶鸡粪∶容积为 0.25∶0.15
∶0.50∶0.10的组合效果最佳 ,与有土栽培相比 ,容重 、pH值降
低 ,总孔度 、通气孔度 、水分 、有机质 、速效 N、速效 P、速效 K、
阳离子交换量增大 ,为无土草毯人工栽培创造了良好的环境
条件和营养条件 ,也为糠醛渣废弃物合理利用找到了一条行
之有效的途径 。
参考文献
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12016 　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2009年