全 文 ：吸取 10. 0 μL 进样分析，测定黄芪甲苷质量分数。结果表
明，供试药材中黄芪甲苷的平均质量分数为 0. 54 mg /g。
3 讨论
3. 1 黄芪甲苷为末端紫外吸收物质［9］，采用紫外检测法进
行测定，一般具有灵敏度差等不足。蒸发光散射检测器虽然
能用于黄芪甲苷等紫外末端吸收物质的测定，但线性范围一
般低于 3 个数量级，且在灵敏度方面与紫外相比并未显示出
独特的优势。质谱法以气态离子为检测对象，检测灵敏度不
受待测对象紫外光吸收性质的限制，在紫外末端吸收物质的
测定方面具有独特的优势。因此，本试验以质谱法为手段，
进行黄芪药材中黄芪甲苷的测定。
3. 2 本试验采用多级反应模式即选择离子对法进行黄芪甲
苷的测定。该方法以黄芪甲苷的准分子离子 m/z807. 4 和二
级碎片离子 m/z 627. 2 为离子对对药材中的黄芪甲苷进行
定性，具有特异性强的特点。此外，由于选择离子对法能有
效排除复杂体系中的基质对待测对象的干扰，因此不仅能有
效缩短分析时间，而且灵敏度高。综上，本试验所建立的黄
芪药材中黄芪甲苷的测定方法，具有灵敏度高，重现性好和
快速的特点，可用于黄芪药材的质量评价，而且有望为生物
样品等复杂体系中黄芪甲苷的快速测定提供方法。
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水黄皮根总黄酮提取工艺的研究
赵映淑1， 朱 毅1* ， 董 志2， 陈国彪1
(1.海南省药品检验所，海南省药物质量研究重点实验室，海南 海口 570216;2.重庆医科大学，重庆 400016)
收稿日期:2010-03-12
基金项目:国家科技支撑计划课题(2007BAI27B06);海南省重点科技项目(070205)
作者简介:赵映淑(1982 －)，女，硕士研究生，研究方向:神经药理，中药药理和新药开发。Tel:13907689304，E-mail:zhaoysh2007@ sina. com
* 通信作者:朱 毅(1962 －)，男，博士，研究员，硕士生导师。Tel:(0898)66832901，E-mail:hnzhyi@ 126. com
摘要:目的 确定水黄皮根总黄酮的最佳提取工艺。方法 以总黄酮量为指标，采用单因素试验与正交设计试验优选水
黄皮根总黄酮最佳提取工艺条件;以水黄皮素为对照，用紫外分光光度法测定总黄酮量。结果 水黄皮总黄酮最佳提取
工艺为:每 1 g药材粗粉加入 20 倍量 60 %乙醇，于 80 ℃回流提取 3 次，每次 1. 0 h。结论 本实验设计合理、可行，实验
结果重复性较好。
关键词:水黄皮;总黄酮;提取工艺;单因素试验;正交设计试验
中图分类号:R 284. 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)04-0722-03
水黄皮 Pongamia pinnata(L.)Merr. 为豆科(Legumino-
sae)水黄皮属(Pongamia Vent.)的半红树植物，别名水流
豆［1］。水黄皮在民间具有广泛的应用，用于治疗疥癣、疱疹、
支气管炎、百日咳、风湿性关节炎、消渴病、白斑病、麻风病和
腰痛等疾病［2］。近年来，研究结果证明水黄皮具有巨大的药
用潜力，在抗炎镇痛、抗菌、抗消化性溃疡、抗病毒、抗氧化、
抗肿瘤、降糖以及镇静等方面具有明显的作用，且主要活性
成分为黄酮类化合物，其中呋喃黄酮为指标性成分［3-14］。本
实验采用单因素试验和正交设计试验法筛选醇提取水黄皮
根中总黄酮的最佳工艺条件，为深入研究水黄皮的药理作用
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和质量控制提供科学依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 BS210S型电子分析天平(北京赛多利斯天平有
限公司);HH-6 数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司);
R-502 旋转蒸发器(上海申胜生物技术有限公司);UV-2010
型紫外分光光度计(SHIMADZU)
1. 2 试药 水黄皮素(和光纯药株式会社，批号:WKR239，
纯度:95%);乙醇、石油醚、乙酸乙酯均为分析纯;水黄皮根
于 2008 年 6 月采集于海南省海口市，由海南省药品检验所
中药室鉴定。
2 方法与结果
2. 1 总黄酮测定
2. 1. 1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷真空干
燥 24 h的水黄皮素对照品 5. 42 mg，置于 100 mL量瓶中，加
甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得每 1 mL 含水黄皮素 51. 49
μg的对照品溶液。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 将正交设计试验下水黄皮根总
黄酮提取液回收适量乙醇后定容至 100 mL，再精密吸取 1 ～
2 mL用甲醇定容至 50mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2. 1. 3 测定波长的选择 取水黄皮对照品溶液，以甲醇为
空白，于 200 nm ～ 400 nm波长范围内记录吸收光谱，由光谱
图表明，水黄皮素在波长 260 nm 和 304 nm 处有最大吸收。
另取供试品溶液，在相同条件下经紫外扫描，发现在 260 nm
处有最大吸收峰，故确定检测波长为 260 nm。
2. 1. 4 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液 1、2、3、4、5、
6、7 mL，分别置于 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。
以甲醇为空白，于 260 nm波长处测定各吸收度，以吸收度为
纵坐标，水黄皮素浓度为横坐标作图回归，得回归方程为:Y
= 94. 415 81X + 0. 008 17，r = 0. 999 6。结果表明，浓度在
5. 149 ～ 36. 040 μg /mL范围内线性关系良好。
2. 2 提取工艺筛选
2. 2. 1 单因素试验 根据预实验结果，我们考察了乙醇浓
度(40 %、50 %、60 %、70 %、80 %和 90 %，n = 3)、提取温
度(50、60、70、80、90 ℃，n = 3)、提取时间(0. 5、1. 0、1. 5、2. 0
h和 2. 5 h，n = 3)、提取次数(1 次、2 次、3 次，n = 3)以及固
液比(10 倍、15 倍、20 倍和 25 倍，n = 3)对水黄皮根总黄酮
提取效果的影响。每次固定准确称取 5 g 水黄皮根样品进
行试验，所得提取液滤过后定容，测定吸光度，根据回归方程
计算提取液中总黄酮浓度，再计算提取液中总黄酮的量(总
黄酮量 = 提取溶液中的总黄酮质量 /提取时药材质量 ×
100%)。结果见图 1。
图 1 单因素试验结果
单因素试验结果表明:乙醇浓度、固液比以及提取次数
对提取效果的影响较大;提取温度在 80 ℃ ～ 90 ℃时相差不
大，同时提取次数越多提取越完全。综合考虑各因素，本试
验固定提取温度为 80 ℃，提取次数为 3 次。选择乙醇浓度、
提取时间和固液比作为正交设计试验考察的指标。
2. 2. 2 正交设计试验 根据单因素试验结果，选取乙醇浓
度(%)、提取时间(h)、和固液比(m/v)为影响因素，以总黄
酮量为考察指标，采用正交试验筛选最佳提取工艺。因素水
平见表 1，正交试验结果见表 2。
表 1 因素水平表
水平
因素
A乙醇浓度 /% B提取时间 /h C固液比 /(m/v)
1 40 0. 5 1 ∶ 10
2 60 1. 5 1 ∶ 15
3 80 2. 5 1 ∶ 20
由正交试验结果直观分析和方差分析(表 3)可知，影响
水黄皮根总黄酮提取效果的因素顺序为:A > B > C，A、B 两
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因素的影响具有显著性，C不具显著性。得最佳工艺组合为
A2B2C3，即每 1 g 药材用 20 倍量 60 %乙醇提取 3 次，每次
1. 0 h。
表 2 L9(3
4)正交设计
实验号 A B C D 总黄酮 /%
1 1 1 1 0. 42
2 1 2 2 0. 62
3 1 3 3 0. 66
4 2 1 2 0. 79
5 2 2 3 0. 95
6 2 3 1 0. 91
7 3 1 3 0. 62
8 3 2 1 0. 67
9 3 3 2 0. 65
K1 0. 567 0. 610 0. 667 0. 673
K2 0. 883 0. 747 0. 687 0. 717
K3 0. 647 0. 740 0. 743 0. 707
极差 0. 316 0. 137 0. 076 0. 044
表 3 方差分析结果
因素 离差平方和 自由度 均方 F 显著性
A 0. 163 2 0. 081 5 54. 333 P < 0. 05
B 0. 036 2 0. 018 0 12. 000 P < 0. 10
C 0. 009 2 0. 004 5 3. 000
误差(D) 0. 00 2 0. 00
F0. 1(2，2)= 9. 00，F0. 05(2，2)= 19. 00
2. 3 最佳提取工艺的验证试验 准确称取 3 份干燥的水黄
皮根粉 5 g，按最佳工艺条件平行操作测吸光度，根据回归方
程得出水黄皮根中总黄酮量，结果见表 4。
表 4 最佳工艺验证结果
实验号 总黄酮 /% RSD /%
1 1. 10
2 1. 06 0. 95
3 1. 02
验证试验结果表明:采用最佳工艺条件提取时，水黄皮
根总黄酮提取率均高于其他正交试验提取率，说明本试验筛
选的最佳提取工艺条件比较合理，同时具有较好的稳定性。
3 讨论
3. 1 水黄皮根中含有的黄酮类化合物主要是水黄皮素、水
黄皮黄素等呋喃黄酮类［15］，易溶于乙醇、甲醇、乙酸乙酯和
三氯甲烷等有机溶剂，不溶于水。为了建立适应工业化生产
的提取方法，本试验选择乙醇溶液作为水黄皮根总黄酮的提
取溶剂，采用单因素试验和正交设计试验筛选了最佳提取工
艺条件。验证试验结果表明，60 %乙醇溶液可作为水黄皮
根总黄酮的最佳提取溶剂。
3. 2 本实验对水黄皮根总黄酮的提取方法进行了初步探
讨，旨在为近一步研究提供实验基础。
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