全 文 ：第 31卷　第 6期 四 川 林 业 科 技　 Vo1.31, 　No.6
2010年 12月 JournalofSichuanForestryScienceandTechnology　 Dec., 　2010
　
　
　
　
　　收稿日期:2010-07-05
　　基金项目:西南科技大学博士点建设基金。
　　作者简介:林琦(1981-),男 ,四川绵竹人 ,在读硕士 ,助理农艺师.主要从事真菌分类及系统发育研究 , E-mail:linjingxi07@ 126.com
　　＊通讯作者:贺新生(1965-),男 ,四川金堂人 ,教授.主要从事食用 、药用蕈菌资源研究.E-mail:hexinsheng@swust.edu.cn
菩提树一种新病原真菌的分离与鉴定
林　琦 ,贺新生＊ ,郑俊娟 ,刘超洋
(西南科技大学生命科学与工程学院 ,四川 绵阳　621010)
摘　要:本文报道了菩提树的一种新病原真菌 Ag09, 经分离鉴定该病原菌为柱状田头菇的一个双孢菌株。该真菌
子实体可在菩提树树干上发生 , 导致植株早衰 、死亡。根据所采集的标本对其形态特征 、菌丝体 、担子梗数 、细胞核
数进行了详细的描述。
关键词:菩提树;病原菌;柱状田头菇
中图分类号:S718.81　　　文献标识码:A　　　文章编号:1003-5508(2010)06-0075-03
IsolationandIndentificationofaNewPathogenicFungus
ofFicusreligiosaL.
LINQi　HEXin-sheng＊　ZHENGJun-juan　LIUChao-yang
(SchoolofLifeScienceandEngineering, SouthwestUniversityofScienceandTechnology, SichuanMianyang　621010, China)
Abstract:Inthispaper, aAg09 strainisreportedasanewpathogenoftheFicusreligiosaL..Byisolation
andindentification, thisfungushasbeenidentifiedasabisporicstrainofAgrocybecylindracea(DC.)
Maire.ThefruitingbodyofAg09cangrowonthestemofFicusreligiosaL., whichwilcausethesenilism
ordeathofthetree.Accordingtothecolectedsamples, adetaileddescriptionisgivenofthemorphologi-
calfeature, mycelium, thenumberoftheconidiumandthecelnucleusofAg09.
Keywords:FicusreligiosaL., Pathogen, Agrocybecylindracea(DC.)Maire
　　菩提树(FicusreligiosaL.)是一种名贵的园林
观赏树木。目前对于榕属菩提树病原菌的报道中主
要有有害拟木层孔菌(Phelinidiumnoxium(Corner)
BoudartsevaetS.Herrera)、桑生小冠孢霉(Cristulari-
elamoricolaRedhead)、盘长孢状刺盘孢 (Coletotri-
chumgloeosporioidesPenz)等[ 1] 。笔者在西南科技大
学校内的一株菩提树上发现该真菌子实体 [如图 1
(a～ d)] ,该真菌着生于树干 ,逐渐造成树干干朽 ,
树木早衰 ,最终导致死亡 。采集其子实体并分离纯
化 ,对其生物学特性进行了初步的研究。
1　试验材料与方法
1.1　试验材料
标本采集地点:西南科技大学校园内 。采集时
间:2007年 ～ 2009年 ,共 7次。新鲜子实体经组织
分离 、纯化后得到纯培养物 ,共获得 10个菌株。选
择其中的 Ag09菌株进行试验 ,菌株保存在中国科
学院微生物研究所中国普通微生物菌种保藏管理中
心(CGMCCNo.3235)。
1.2　实验方法
1.2.1　危害树木症状考察
通过定期观察 ,记录其对树木危害的症状和危
害 ,并对其出现新鲜子实体时拍照 。
1.2.2　室内鉴定
取成熟野生子实体 ,切取一部分菌盖 ,沿菌褶的
横面做徒手切片。在 NikonTE300倒置显微镜下观
察单孢萌发 、菌丝结构 ,担子形状 、担孢子梗数量 ,孢
子形状 、颜色 、大小 、表面光滑或有纹饰 ,并做好记
录 。
1.2.3　细胞核染色观察
收集 Ag09成熟子实体孢子 ,在载玻片上滴一
滴荧光染色液 , 荧光染料双苯并咪唑 Hoeshst
33258, 5 μg·mL-1[ 2] 。取少许孢子置于其中 , 5 min
后置荧光显微镜(LeikaDM2500)下观察孢子中的
核数并做记录。
1.2.4　单孢分离及单孢出菇
无菌条件下收集 Ag09纯培养子实体的孢子 ,
注入无菌水摇匀 ,连续稀释到在低倍镜下一个视野
内只有 1个孢子时 , 将孢子液接种于 PDA培养基
上 ,待孢子萌发后转接到 PDA斜面培养基上 。将接
种好的试管放在温度为 25℃的恒温培养箱中培养 ,
观察菌丝生长和单孢出菇情况。
图 1　
2　结果分析
2.1　对树木的危害症状
我校新区同时移栽两株菩提树 ,其胸径大小为
30.5cm～ 31.8 cm,高度约 20 m,两树树龄基本相
当 。但其中一株由于感染病菌 ,导致心材干朽 ,生长
势弱于正常生长的植株。感病症状如图 1(a～ c),
两树春季发芽 、新叶萌发时间相同 ,但新叶片生长不
会转成深绿色 ,很快转为浅绿带黄色 。在相同的生
长季节染菌植株树叶提前 50d～ 60 d变黄 ,提前 30
d～ 40 d全部落叶 。染菌植株整体树叶泛黄 、凋敝 ,
生长势明显弱于正常植株 ,由此可以看出此菌可以
导致植株生活力降低 ,引起早衰 ,最终导致其死亡 。
76 　　 四　川　林　业　科　技 31卷
在树上发生子实体的时间:7月 ～ 11月 ,每年发
生 2次 ～ 3次 ,每次可采集到鲜子实体 1 kg～ 2 kg,
子实体丛数 5丛 ～ 14丛。连续 5 d以上阴雨后发
生 。
发生子实体的树干部位:整树树干均可发生 ,干
朽和鲜活组织均有发生。
2.2　学名与分类地位
分离物经培养鉴定 ,其学名为:Agrocybecylin-
dracea(DC.)Maire, Mém.Soc.Sci.Nat.Maroc.
45:106(1938),中文名称为:柱状田头菇。该菌典
型的特征是每个担子上只有 2孢 ,应该是该种内的
一个特殊的双孢菌株。分类地位为:担子菌门 Ba-
sidiomycota,伞菌纲 Agaricomycetes,伞菌亚纲 Agari-
co-mycetidae, 伞菌目 Agaricales, 球盖菇科 Stro-
phariaceae,田头菇属 Agrocybe。
2.3　形态特征
子实体:单生 、丛生 ,中到大型 。有浓郁的菇香
味 。菌盖幼时半球形 ,后渐伸展至扁平 ,少浅裂 ,中
央稍突起 ,直径 3 cm～ 10 cm,初期深褐色 、茶褐色 ,
后渐变为淡褐色 ,至淡土黄色 ,平滑或中部有较多条
纹 。菌肉白色 ,厚 1 mm～ 20 mm,伤不变色 。菌褶
直生 ,中密 ,不等长 ,无分叉 ,宽 2 mm～ 7 mm,初白
色 ,成熟后呈污黄锈色至咖啡色。有内菌膜 ,白色 ,
开伞后形成菌环 ,厚 0.5-1.5mm,上位 ,不易脱落 ,
有明显条纹 。菌柄中生或偏生 ,圆柱形长 3 cm～ 12
cm,粗 0.3 cm～ 2.3 cm。内实 ,纤维质脆嫩 ,污白
色 ,老时基部色稍深 ,有皱纹及膜质鳞片。子实体采
摘后基部流出或滴出大量水珠(如图 1(e))。
孢子印暗褐色。孢子淡黄褐色 ,光滑 ,卵圆形或
椭圆形或不规则形 ,大小 11.0 μm～ 12.8μm×6.0
μm～ 7.8μm。大多数担子上有 2个孢子 ,有部分出
现 3孢 ,少见 1孢 、4孢(如图 1(j))。
菌丝在平皿培养基上 ,颜色为白色 ,生长浓密 ,
有同心圆环纹 ,气生菌丝不发达。在试管内菌丝有
爬壁现象。容易在琼脂培养基上形成形态完整的子
实体 ,并大量弹射孢子 。
菌丝透明 ,明显分枝 ,有明显的锁状联合(如图
1(f))。菌丝直径 2 μm～ 2.5 μm。
2.4　显微观察结果
在显微镜下观察 ,能很清晰的观察到 Ag09的
担子梗以及担孢子 , 见图 1(i)。通过照片可以看
出 , Ag09的担子梗数为 2,上面着生 2个担孢子 。但
也出现有极少的 3孢 、4孢现象。在显微镜下选取
不同视野对担孢子数目进行统计发现 ,共统计担子
总数为 2 000个 ,双孢比例为 93.8%, 3孢 3.65%、1
孢为 2.4%、4孢低于 0.15%。双孢比例占绝对优
势 ,可以判定 Ag09是田头菇属中孢子数目为 2的物
种。
荧光染色的观察结果见图 1(l),细胞核经染色
后可以清晰的看到孢子内细胞核数为 4,有部分为 3
个细胞核 。产生这种双孢四核可以解释为减数分裂
生成的 4个单倍体核 ,在孢子梗或孢子中又各自进
行了一次有丝分裂 ,形成两个同性的核 ,这两个同性
核如果同时进入或保留在担孢子中 ,形成双核担孢
子[ 3] 。减数分裂的不正常 ,核分配不均衡可导致多
核现象的出现 。
表 1 Ag09的担子细胞的担子梗数
　项目 担子总数 单孢 双孢 三孢 四孢
数量数 2 000 48 1 876 73 3
% 100 2.4 93.8 3.65 0.15
2.5　单孢出菇
单孢培养的菌丝在显微镜下观察 ,均有明显的
锁状联合结构 。说明其菌丝是双核菌丝体 ,并且是
通过锁状联合的方式将核物质平均分配给子细胞
的。经过 30 d左右的培养 ,分离得到的 30个单孢
菌株均能出菇 ,图 1(h)为较有典型的单孢出菇照
片。
3　讨论
Ag09是一种菩提树新致病菌 ,根据其形态学和
孢子特征可以确定其属于柱状田头菇的一个特殊的
双孢菌株 。对于田头菇属真菌其有性生殖类型国内
外学者研究得出的结果差异较大 。国外研究者认为
Agrocybeaegetita的性遗传模式是典型的多等位基因
四极性交配型 [ 4] ,在国内却认为其属于具锁状联合
的次级同宗交配型 [ 5] 。同时 ,国内也有学者对茶树
菇(Agrocybechaxingu)进行的研究认为其性遗传模
式为四极性异宗结合 [ 6] 。分离得到的 Ag09单孢出
菇的特性表明其有性生殖为同宗结合 ,它有 2个担
孢子梗 ,此特征与双孢蘑菇次级同宗结合的有性生
殖方式比较接近 ,但 Ag09菌株的大多数担孢子都
是 4个核 。Ag09菌株菌丝具锁状联合 ,与大多数异
宗结合真菌的遗传模式相似 。该种的细胞核染色结
果与鲍大鹏等[ 7]报道的对来自贵州的 Agrocybeae-
getita菌株研究结果一致 ,他推测了此菌株的性遗传
(下转第 92页)
776期 林　琦 ,等:菩提树一种新病原真菌的分离与鉴定 　　
约 250km。
4　讨论
在螺髻山自然保护区 ,对野生动物最常见的干
扰类型是农业活动 ,彝族同胞世代居住于此 ,保护区
周边人类活动历史长 ,许多沟谷内分布有村落 ,在中
低山地带分布着成片的农耕地 ,无疑对保护区内的
动物的扩散具有抑制作用 。其次保护区周边的公路
如西(昌)—攀(枝花)公路 、西昌—普格 —宁南公路
和河流如安宁河 、则木河等对螺髻山自然保护区野
生动物的基因交流具有一定的阻隔作用。
旅游 、水电开发 、放牧 、放套 、打猎等会造成对野
生动物干扰以及野生动物种群数量的降低 。在我们
调查的一些区域 ,大型兽类痕迹少见 。因此 ,保护区
在原有面积大幅度缩小的情况下 ,加强对野生动物
的保护显得十分重要 。
在该保护区中低海拔地带 ,有大面积紫茎泽兰
入侵现象 ,外来植物物种的入侵 ,破坏了底层草本植
物的结构 ,形成了林下层外来植物占优势地位的局
面 ,造成了小型兽类多样性的降低。外来物种入侵
已经对保护区生物多样性保护造成了一定的影响 ,
应采取及时有效措施进行控制 。
5　保护建议
保护区目前最为重要的是明确保护区管理机构
主体 ,保护区原管理主体———螺髻山种畜场已改制
为西昌市下属的一个建制镇 ,由镇政府出面管理跨
县域的保护区已不合适 ,亟待由政府明确保护区的
管理机构 。其次 ,应加强对保护区工作人员进行野
生动物保护方面的知识和技能培训 ,提高他们的业
务水平和保护责任感。
致谢:调查期间得到了西昌市建设局 、德昌县林
业局 、螺髻山保护区管理处的大力支持 ,在此特此致
谢。
参考文献:
[ 1] 　AlenM, 1938, 1940.TheMammalsofChinaandMongolia, Part.
1～ 2, NewYork:Amer.Mus.(Nat.List.), 1350pp.
[ 2] 　SmithA, XieY.AGuidetotheMammalsofChina, 544, Princeton
UniversityPres, Princeton, 2008.
[ 3] 　《四川资源动物志 》编辑委员会主编.四川资源动物志(第一
卷 总论)[M].成都:四川人民出版社 , 1982.
[ 4] 　“四川资源动物志 ”编委会主编.四川资源动物志(第二卷 兽
类)[ M] .成都:四川科学技术出版社 , 1985.
[ 5] 　张荣祖 m等.中国哺乳动物分布 [ M] .北京:中国林业出版社 ,
1997.
[ 6] 　张荣祖.中国动物地理 [ M].北京:科学出版社 , 1999.
[ 7] 　罗泽询 ,陈卫 ,高武 ,等.中国动物志(兽纲第六卷)[ M] .北京:
科学出版社 , 2000.
[ 8] 　汪松 ,解焱.中国物种红色名录(第一卷红色名录)[ M] .高等
教育出版社.
[ 9] 　中华人民共和国濒危物种进出口管理办公室 , 中华人民共和
国濒危物种科学委员会.濒危野生动植物种国际贸易公约
(CITES)[ M] .2003.
[ 10] 　王酉之 ,胡锦矗主编.四川兽类原色图鉴 [ M].北京:中国林
业出版社 , 1999.
[ 11] 　王应祥.中国哺乳动物种和亚种分类名录与分布大全 [ M].
中国林业出版社 , 2003.
[ 12] 　刘洋 ,孙治宇 ,赵杰 ,等.四川毛寨自然保护区兽类资源调查
[ J] .四川动物, 2007, 26(3):613 ～ 617.
(上接第 77页)
模式可能具有介于次级同宗和异宗结合之间的类
型 。在真菌传统的分类系统中 ,担孢子的形态和数
目常作为判断其分类地位的依据之一。而 Ag09具
有双孢四核的现象在大型真菌中是一个独特的现
象 ,该菌株在田头菇属中是否是一个新种或者是新
的变种 ?为准确划分该菌株的分类地位 ,将进一步
对该菌株进行分子系统学研究 。
参考文献:
[ 1] 　徐梅卿 ,何平勋.中国木本植物病原菌总汇 [ M] .哈尔滨:东北
林业大学出版社 , 2008.
[ 2] 　康振生 ,李振岐等.植物病原真菌细胞核的荧光染色技术 [ J].
植物保护 , 1992, 2:43.
[ 3] 　戴芳澜.真菌的形态和分类 [ M] .北京:科学出版社 , 1987:264
～ 265.
[ 4] 　MeinhardtF, JohnFL.MatingtypesofAgrocybeaegerita[ J].
CurGenet, 1982, (5):65～ 68.
[ 5] 　丁文奇.柳环菌及人工栽培 [ J].食用菌 , 1984, 2(3):4 ～ 5.
[ 6] 　郑元忠 ,蔡衍山.茶新菇性遗传模式和育种工艺研究 [ J] .安徽
农学报 , 2007, 13(4):32～ 33.
[ 7] 　鲍大鹏 ,王南 ,谭琦等.用荧光染色法对柱状田头菇(Agrocybe
aegerita)子实体担子和担孢子的观察 [ J].南京农业大学学报 ,
2000, 23(3):57～ 60.
92 　　 四　川　林　业　科　技 31卷