全 文 ：中　国　药　科　大　学　学　报
Journal o f China Pharmaceutical Univ ersi ty　 2002, 33( 1): 42～ 44
RP-HPLC法测定黄花倒水莲中两种口山酮的含量

李　丽 , 朱丹妮* , 严永清
(中国药科大学中药复方研究室 , 南京 210038)
摘　要　目的: 建立反相高效液相色谱法测定黄花倒水莲中两种口山酮的含量。方法: 采用 Dikma Diamonsil
C18柱 ,甲醇 -水 ( 65∶ 35)为流动相 ,流速 0. 9 m l /min, 996二极管阵列检测器 ( DAD) ,检测波长为 245 nm,对黄花
倒水莲中两种口山酮含量进行测定。 结果: 口山酮 1, 2, 3-三甲氧基口山酮和 1-甲氧基 -2, 3-亚甲二氧基口山酮的重复性
试验 RSD分别为 0. 96%和 2. 6% ;平均回收率分别为 99. 40%和 100. 8%。结论: 该方法操作简便 ,易行 ,线性关
系良好。
关键词　黄花倒水莲 ; 口山酮 ; 反相高效液相色谱 ; 二级管阵列检测器
中图分类号: TQ460. 7+ 2　　文献标识码: A　　文章编号: 1000-5048( 2002) 01-0042-03
　　黄花倒水莲为远志科远志属植物黄花倒水莲
( Polygala f al lax Hemsl. )的干燥根 ,该药在民间
尤其是少数民族地区应用很广 ,著名老中医祝湛予
称之为“补药之长” ,据古文献记载具有补益气血 ,
健脾利湿 ,活血调经等功效 [1-3 ]。黄花倒水莲具有广
泛的药理作用 ,对乙肝病毒 E抗原有体外抑制作
用 [4 ] ,可以提高小鼠血液红细胞 SOD的活力 ,在一
定程度上有抗疲劳作用 [5 ] ,对小鼠的免疫功能有增
强作用 [6 ]。 黄花倒水莲中含有的多种口山酮成分具
有抑制醛糖还原酶活性的作用 [ 7]。
近年来本研究室对黄花倒水莲进行了资源调
查、化学成分、药理活性、质量标准等方面的系统研
究。本文报道黄花倒水莲中的两种口山酮的含量测
定方法 ,为黄花倒水莲的质量标准提供实验依据。
1　实验部分
1. 1　仪器与试药
黄花倒水莲:产自广西的本实验室自采 ,产自
海南的由海南三叶公司提供 ,经江苏省中国科学院
植物所徐曾莱博士鉴定。 对照品: 口山酮 (本实验室
自提 ,经 1H谱 , 13 C 谱 , DEPT 谱 , HMQC谱和
HMBC谱鉴定分别为: 1, 2, 3-三甲氧基口山酮 ,代号
为 F1 ; 1-甲氧基 -2, 3-亚甲二氧基口山酮 ,代号为
F2 )。甲醇:色谱纯 ,淮阴汉邦公司 ;水:纯净水 ;其它
试剂均为分析纯。
高 效液 相色 谱仪: 美 国 Waters-600E型
( Waters-600E泵 , 25μl微量进样器 , 996二级阵列
检测器 , Millennium 32色谱管理系统 ) ;十万分之
一天平: 梅特勒 -托利多仪器 (上海 )有限公司
AE240。
1. 2　样品制备
1. 2. 1　样品提取　精称 60℃下干燥恒重的黄花
倒水莲 (产自海南 )药材粉末约 3 g,加入 60 m l石
油醚 -乙酸乙酯 ( 5∶ 1, v /v )的混合溶剂 ,热回流 5
h ,过滤 ,将滤液用旋转蒸发仪挥干 ,残留物加甲醇
定容至 2 ml,通过 0. 45μm微孔滤膜过滤 ,作为供
试 ,按下述色谱条件进行 HPLC测定。
1. 2. 2　对照品溶液制备　精称口山酮 F1和 F2适
量 ,用甲醇溶解 ,制成 6 mg /m l的对照品溶液。
1. 3　色谱条件选择和系统适应性试验
1. 3. 1　色谱条件　色谱柱 Dikma Diamonsi l C18
( 150× 4. 6 mm , 5μm)柱 ,柱温 25℃ ,流动相
CH3OH-H2O ( 65∶ 35 ( v /v ) ) ,流速: 0. 9 m l /min;
进样量: 20μl。
1. 3. 2　系统适用性　理论塔板数 ( N )按口山酮 F1
计算为 4000,与相邻峰 (即 F2峰 )分离度为 2. 8,拖
尾因子为 1. 11;按口山酮 F2计算 N为 4000,拖尾因
子 1. 16。
42
收稿日期　 2001-09-10　* 通讯作者 Tel: 025-5391042　 E-mail: s hliagao@ jlonlion. com
1. 3. 3　 DAD鉴定口山酮 F1和 F2色谱峰纯度　取
口山酮 F1和 F2对照品溶液适量 ,进样 ,色谱分离图
与 DAD鉴定色谱图如图 1,通过 Millennium32
wo rkstation处理 ,得到口山酮 F1的纯度角 0. 072,
纯度基线 0. 706;口山酮 F2的纯度角 0. 261,纯度基
线 0. 769,两个口山酮对照品均为纯净的。
Fig 1. Ch romatograms of Polyg ala f allax Hems l.
A. s tandards; B. sample
peak 1: 1, 2, 3-trim ethoxyxanthone; peak 2: 1-methox y-2, 3m ethylenedioxyxanth one
1. 4　黄花倒水莲中两种口山酮含量测定
1. 4. 1　标准曲线　取以上对照品溶液 ,分别进样
4, 8, 12, 16, 20和 24μL,制作两种口山酮的标准曲
线 , 按 上 述 色 谱 条 件 进 行 分 析 测 定 , 由
Millennium32色谱工作站数据处理系统给出峰面
积 ,以对照品溶液进样量 (X )为横坐标 ,峰面积值
( Y )为纵坐标进行回归 ,线性关系良好 ,回归方程
为 peak 1 ( F2 ) : Y1= 1. 834771e8X 1- 2. 178922e5 ,
r= 0. 9998,线性范围: 0. 0244～ 0. 1464 mg /ml;
Peak 2 ( F2 ) : Y2= 1. 635475e8X 2- 1. 906566e5 , r=
0. 9998,线性范围: 0. 0218～ 0. 1308 mg /ml。
1. 4. 2　稳定性试验　将同一供试品溶液在 1天内
分别在 0, 2, 4, 6, 8 h,进样 5次 ,测得口山酮 F1的峰
面积 RSD为 0. 90% ,口山酮 F2的峰面积 RSD为
1. 6% ,结果表明供试品溶液在 8 h内稳定。
1. 4. 3　进样精密度试验　取一定浓度的对照品溶
液 20μL,重复进样 5次 ,口山酮 F1的峰面积 RSD
为 0. 30% ,口山酮 F2的峰面积 RSD为 1. 1%。
1. 4. 4　重复性试验　取 6份同一批次供试品溶
液 ,分别测定口山酮 F1和口山酮 F2的含量 ,结果表明
重复性较好 ,口山酮 F1和口山酮 F2的 RSD分别为
0. 96%和 2. 6% 。
1. 4. 5　加样回收率试验　取同一批海南产样品 5
份 ,每份约 1. 5 g ,精密称定 ,分别精密加入口山酮 F1
和 F2对照品按“ 1. 2. 1”项下步骤操作 ,定容 2 ml ,
进样 20μl测定 ,计算回收率 ,求得口山酮 F1和 F2的
平均回收率为 99. 40%和 100. 8% ; RSD值分别为
2. 8%和 1. 8% (n= 5)。
1. 4. 6　样品测定结果　不同采收地及不同部位的
黄花倒水莲按“ 1. 2. 1”项下步骤操作 ,制备供试品 ,
进行 HPLC测定 ,结果见表 2,对照品及样品色谱
图见图 1。
2　讨　论
2. 1　样品提取方法考察
实验分别对超声提取 ,索氏提取 ,热回流进行
考察 ,实验表明 ,热回流的提取效率最好 ,进一步对
热回流的提取时间进行考察 ,发现热回流 5 h两种
口山酮提取效率最高。
2. 2　提取溶剂考察
热回流时发现单一溶剂如石油醚其提取率较
低 ,且提取不完全 ,乙酸乙酯及甲醇提取时提出的
杂质过多 ,杂质干扰样品分离 ,不能达到基线分离 ,
而且随时间变化大。经多次实验 ,同时根据两种口山
酮的溶解性 ,最后确定了石油醚和乙酸乙酯混合
5∶ 1为提取溶剂。
2. 3　两种口山酮的含量测定结果
不同采收地及不同部位黄花倒水莲中两种口山
酮的含量测定结果表明 ,主要是根中含有此两种
口山酮 ,茎中不含有 ,这与黄花倒水莲药用部位为其
根是吻合的 ,同时发现采收地不同 ,该植物中两种
口山酮的含量不同 ,这说明不同来源的药材有地区
性差异 ,也表明中药的复杂性 ,这在研究中应引起
431期　 李　丽等: RP-HPLC法测定黄花倒水莲中两种口山酮的含量
　　　　 Tab 1. Recovery of Xanth one F1 and Xan thon e F2
No.
Xanthone F1 Xanthone F2
Added
μg
Found
μg
Recovery
(% )
Average
(% )
RSD
(% )
Added
μg
Found
μg
Recov ery
(% )
Av erage
(% )
RSD
(% )
1 112. 9 226. 5 100. 4 75. 3 152. 3 102. 5
2 115. 4 231. 7 101. 8 76. 1 152. 4 100. 8
3 112. 1 220. 6 96. 6 99. 40 2. 8 75. 2 151. 2 101. 9 100. 8 1. 8
4 112. 3 220. 7 96. 3 75. 1 150. 7 101. 2
5 113. 6 228. 5 101. 9 76. 9 150. 0 97. 8
Tab 2. Resul t of s am ple tes t
Collecteded area
Xanthone F1
(μg /g)
Xanthone F2
(μg /g)
Nanning, Guangxi　 ( roo t) — 5. 33
(s tem ) — —
Nalin, Guangxi ( roo t) 2. 74 —
( s tem ) — —
Wantian, Guangxi ( roo t) — 2. 22
(s tem ) — —
Bobai, Guangxi ( roo t) 8. 86 6. 75
(s tem ) — —
Pubei , Guangxi ( roo t) — 29. 4
(s tem ) — —
Longsh eng, Guangxi( roo t) 28. 6 12. 0
( s tem ) — —
Jingxi , Guangxi ( roo t) 2. 32 3. 36
(s tem ) - -
Hainan provided
by Sanye Co. ( roo t) 72. 7 50. 1
( s tem ) - -
重视。实验同时对同属药材远志进行两种口山酮的
测定 ,远志中不含有这两种口山酮 ,说明草本远志和
木本远志的化学成分各有特点 ,远志属药用植物草
本植物和木本植物化学成分、药理活性和植物亲缘
学相关性有待进一步研究。
参 考 文 献
[1 ]　《全国中草药汇编》编写组编 . 全国中草药汇编 ,上册 ,北京:
人民卫生出版社 , 1975. 765.
[2 ]　江苏新医学院编 . 中药大词典 ,下册 ,上海:上海科学技术出
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[3 ]　秦华珍 ( Qin HZ) ,夏新华 ( Xia X H) ,李钟文 ( Li ZW ) .黄花倒
水莲多糖的抗应激作用 [ J ].广西中医药 ( Guangx i J of
TCM ) , 1996, 19( 3): 52-54.
[4 ]　李梨平 ( Li LP) ,王伟华 ( Wang W H) .黄花倒水莲对乙肝病
毒 E抗原体外抑制作用的初步观察 [ J] .湖南中医药导报
( Hunan Guigin g Journal of TCM P ) , 1998, 4( 10): 32-33 .
[ 5 ]　李　萍 ( Li P) ,钟　鸣 ( Zh ong M) ,邱翠娥 ( Qiu CE) .黄花参
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Trad Chin Med and Mat ) , 1995, 16( 4): 13-15.
[6 ]　秦华珍 ( Qin HZ) ,夏新华 ( Xia X H) ,李钟文 ( Li ZW ) .黄花倒
水莲对正常小鼠免疫功能的影响 [ J ].中药材 ( J Chin Med
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[7 ]　毛士龙 ( Mao SL) ,廖时萱 ( Liao SX) ,吴久鸿 ( Wu JH)等 .黄
花远志根化学成分的分离和结构鉴定 [ J] .药学学报 ( Acta
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RP -HPLC Determination of Two Different Xanthone
in Polygala Fallax Hemsl .
LI Li, ZHU Dan-Ni
*
, Y AN Yong-Qin
Department of Chinese Prescription , China Pharmaceutical University , Nanjing 210038
ABSTRACT　 AIM　 The purpo se is to develop a method fo r determining the contents of two dif ferent
x anthone in Polygala fallax Hemsl. METHOD　 The method used Dikma Diamonsil C18 column with
MeOH-H2O( 65∶ 35) as mobile phase, 0. 9m l /min as f low-rate and 996-pho todiode array detecto r at 245
nm. RESULTS　 The relative standa rd deviation of the repeatability w ere 0. 96% and 2. 6% respectiv ely
and the average recovery w ere 99. 40% and 100. 8% respectiv ely. CONCLUSION　 The method w as
simple and had good liner rela tionship.
KEY WORDS　 Polygala fallax Hemsl. ; Xanthone; RP-HPLC; DAD
44 　 　 中 国 药 科 大 学 学 报 　 　 33卷