全 文 ：木姜叶柯总黄酮的质量控制方法研究
蒋珍藕， 邱宏聪， 韦宝伟， 李 茂， 陆国寿
(广西中医药研究院，广西 南宁 530022)
收稿日期:2011-11-18
基金项目:广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻 0718002-2-13)
作者简介:蒋珍藕(1964—)，女，硕士，副主任中药师，研究方向:中草药研究与开发。Tel(0771)5869102，E-mail:zhenou_jiang@ yahoo． com． cn．
摘要:目的 建立木姜叶柯总黄酮的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对总黄酮进行定性鉴别，采用高效液相色谱
法测定根皮苷，采用紫外分光光度法测定总黄酮。结果 薄层色谱法可检出木姜叶柯;高效液相色谱法和紫外分光光度
法分别测定根皮苷和总黄酮，线性关系均良好，平均加样回收率分别为 98． 74%、101． 49%，RSD 值分别为 1． 70%、
1． 37%。结论 所建立的质量控制方法简便易行，可用于木姜叶柯总黄酮的质量控制。
关键词:木姜叶柯;总黄酮;质量控制方法;薄层色谱法;高效液相色谱法;紫外分光光度法
中图分类号:R284． 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)05-0838-03
木姜叶柯总黄酮是木姜叶柯的干燥嫩叶经提取
分离纯化的有效部位。木姜叶柯为壳斗科柯属植物
Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun．［1］的干燥嫩叶，
具有清热解毒，化痰，祛风，降压的作用，主治湿热泻
痢，肺热咳嗽，痈疽疮疡，皮肤瘙痒，高血压［2］;现代
研究表明，木姜叶柯中的黄酮类成分具有降血糖，降
血压，降脂及抗过敏，抗炎等作用，尤其根皮苷在糖
尿病及其并发症的防治中具有独特的效果［3］，木姜
叶柯将可能是一种新型的预防和治疗糖尿病的新药
材。为了有效地控制木姜叶柯总黄酮的质量，本实
验对木姜叶柯有效部位总黄酮的质量控制方法进行
了研究。
1 仪器、试药与材料
LC-20A高效液相色谱仪、SPD-20A紫外检测器
(日本岛津公司)，威玛通用多媒体色谱数据工作
站;UV2550 紫外分光光度计(日本岛津公司)、
B2200S超声清洗机(上海必能信超声有限公司)、
LIBROR AEL-200 电子天平(日本岛津公司)。
根皮苷对照品:购买于 SIGMA 公司，批号为
083K7072，经高效液相色谱归一化法测定纯度在
98%以上。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均
为分析纯。薄层层析硅胶 G:化 学 纯，批 号
00081107，青岛海洋化工有限公司。
5 批木姜叶柯总黄酮由本课题组提取制备，分
别编号为 1#、2#、3#、4#、5#，其中 1# ～ 2#为小试样品、
3# ～ 5#为放大验证试制样品。用于制备总黄酮的木
姜叶柯药材采自广西苹果县海城乡荣芳村陆拥屯，
经广西中医药研究院中药资源所覃德海副研究员及
饶伟源副研究员鉴定为壳斗科柯属植物木姜叶柯
Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun．的干燥嫩叶。
2 方法与结果
2． 1 薄层鉴别
取本品细粉 0． 1 g，加甲醇 1 mL使溶解，作为供
试品溶液。另取根皮苷对照品适量，加甲醇制成每
1 mL含 0． 5 mg 的对照品溶液。再取木姜叶柯对照
药材 0． 5 g，加甲醇 10 mL超声处理 20 min，滤过，滤
液蒸干，残渣加甲醇 1 mL 使溶解，作为对照药材溶
液。吸取上述三种溶液各 2 ～ 5 μL，点于同一含
0． 4%乙酸钠的以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶
G薄层板上，以乙酸乙酯-2-丁酮-甲醇-水(10 ∶ 5 ∶ 1
∶ 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 2%三氯化铝
乙醇溶液，热风吹数分钟，置紫外光灯(365 nm)下
检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱
相应的位置上，有相同颜色的荧光斑点。经多批样
品试验，可作为木姜叶柯总黄酮的定性鉴别方法。
2． 2 根皮苷的测定方法研究
参照文献［4-5］并经试验调整，采用高效液相色
谱法对木姜叶柯总黄酮中的主要有效成分根皮苷进
行测定。
2． 2． 1 实验条件的选择
2． 2． 1． 1 色谱条件:Thermo HYPERSIL ODS-2(250
mm ×4． 6 mm，5 μm)色谱柱;流动相:乙腈-0． 1%磷
酸(21 ∶ 79);检测波长:280 nm;柱温:室温;进样量
为 5 μL。理论板数按根皮苷峰计算，应不低于
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2 000。在上述色谱条件下，供试品中根皮苷与其它
杂质达到基线分离，分离度大于 1． 5，可满足定量要
求。另吸取甲醇溶剂，注入高效液相色谱仪进行空
白试验，结果在根皮苷出峰处不出现色谱峰，表明溶
剂对根皮苷测定不产生干扰。见图 1。
图 1 高效液相色谱图
A．对照品 B．样品 C．空白溶剂 1．根皮苷
2． 2． 1． 2 对照品溶液的制备:取根皮苷对照品适
量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL 含 100 μg 的溶
液，即得。
2． 2． 1． 3 供试品溶液的制备:取本品细粉 20 mg，
精密称定，精密加入甲醇 50 mL，称定质量，超声处
理(功率 80 W，频率 50 kHz)10 min，放冷，再称定质
量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，
即得。
2． 2． 2 方法学考察及样品的测定
2． 2． 2． 1 线性关系考察:精密称取根皮苷对照品
10． 5 mg，置 25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至
刻度，摇匀，精密量取 0． 5、1、2、5、10 mL，分别置 10
mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别作为对照
品溶液，按上述色谱条件分别进样 5 μL测定。以根
皮苷对照品进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积值为
纵坐标(Y)绘制标准曲线，得回归方程为:Y =
2 067 966X － 22 031． 903 7 (r = 0． 999 9)，线性范
围:0． 105 ～ 2． 100 μg。
2． 2． 2． 2 精密度试验:对同一供试品溶液(1 批)，
连续测定 5 次，记录根皮苷峰面积。结果 RSD 为
1． 67%(n = 5)。试验表明，精密度良好。
2． 2． 2． 3 稳定性试验:对同一供试品溶液(1 批)，
于 0、1、2、4、10、12 h依法测定，记录根皮苷峰面积，
结果 RSD为 1． 73%(n = 6)。试验表明，在 12 h 内
被测物稳定。
2． 2． 2． 4 重复性试验:对同一批样品(1 批)，平行
测定 6 份，计算根皮苷质量分数。结果平均质量分
数为 299． 40 mg /g，RSD 为 1． 96%(n = 6)。结果表
明，重复性较好。
2． 2． 2． 5 加样回收率测定:精密称取根皮苷对照品
33． 0 mg，置 500 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至
刻度，摇匀，作为对照品溶液。取重复性试验项下的
木姜叶柯总黄酮样品约 10 mg，平行取 6 份，精密称
定，分别精密加入上述根皮苷对照品溶液 50 mL，按
上述拟订的方法提取、测定，计算回收率，结果平均
加样回收率为 98． 74%，RSD 为 1． 70%(n = 6)，符
合定量分析的要求，详见表 1。
表 1 根皮苷回收率测定结果 (n =6)
序号
取样量
/ g
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1 0． 010 6 3． 173 6 3． 300 0 6． 445 0 99． 13
2 0． 010 8 3． 233 5 3． 300 0 6． 456 0 97． 65
3 0． 011 3 3． 383 2 3． 300 0 6． 643 0 98． 78 98． 74 1． 70
4 0． 010 1 3． 023 9 3． 300 0 6． 335 1 100． 34
5 0． 010 6 3． 173 6 3． 300 0 6． 489 7 100． 49
6 0． 011 5 3． 443 1 3． 300 0 6． 613 1 96． 06
2． 2． 2． 6 样品测定:取第 3、4、5 批木姜叶柯总黄酮
样品 20 mg，各 3 份，精密称定，依法制成供试品溶
液，依法测定根皮苷。结果见表 2。
表 2 根皮苷测定结果 (n =3)
样品 根皮苷 /% 平均量 /% RSD /%
3# 68． 11 66． 80 67． 79 67． 57 1． 01
4# 68． 94 70． 11 69． 73 69． 59 0． 86
5# 74． 84 75． 94 75． 19 75． 32 0． 75
2． 3 总黄酮测定方法研究
2． 3． 1 实验条件
2． 3． 1． 1 对照品溶液的制备:取根皮苷对照品适
量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL含 15 μg的溶液，
即得。
2． 3． 1． 2 供试品溶液的制备:取本品细粉 20 mg，
精密称定，精密加入甲醇 50 mL，称定质量，超声处
理(功率 80 W，频率 50 kHz)10 min，放冷，再称定质
量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续
滤液 0． 5 mL，置 10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，
摇匀，即得。
2． 3． 1． 3 测定波长的选择:吸取根皮苷对照品溶
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液及供试品溶液各适量，以甲醇做空白对照，在紫外
分光光度计 200 ～ 400 nm 波长下扫描，结果根皮苷
对照品及供试品均在 280 nm波长处有最大吸收，故
选择 280 nm作为测定波长。
2． 3． 2 方法学考察及样品的测定
2． 3． 2． 1 线性关系考察:精密称取根皮苷对照品
13． 01 mg，置 50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至
刻度，摇匀，精密量取 10 mL 置 50 mL 量瓶中，加甲
醇稀释至刻度，摇匀，精密量取 0． 5、1、2、5、7 mL，分
别置 10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别
作为对照品溶液，于 280 nm 处测定吸光度(A 值)。
以根皮苷浓度(μg /mL)为横坐标(X)，A 值为纵坐
标(Y)绘制标准曲线，得回归方程为:Y = 0． 0399X-
0． 0007 (r = 0． 999 9)，线性范围:2． 602 ～ 36． 428
μg /mL。
2． 3． 2． 2 精密度试验:对同一份供试品溶液(2
批)，连续测定 6 次吸光度，结果 RSD 为 0． 38%(n
= 6)。结果表明，精密度良好。
2． 3． 2． 3 稳定性试验:对同一供试品溶液(2 批)，
于 0、1、2、4、8、12 h 依法测定吸光度，结果 RSD 为
0． 69%(n = 6)。结果表明，在 12 h 内测定保持稳
定。
2． 3． 2． 4 重复性试验:对同一批样品(2 批)，平行
测定 6 份样品的总黄酮，结果平均质量分数为
70． 67%，RSD为 1． 65%(n = 6)。结果表明，重复性
较好。
2． 3． 2． 5 加样回收率测定:取重复性试验项下的木
姜叶柯总黄酮样品约 10 mg，平行取 6 份，精密称
定，分别精密加入根皮苷对照品 7 mg，按上述拟订
的方法提取、测定，计算回收率，结果平均回收率为
101． 49%，RSD为 1． 37%(n = 6)，符合定量分析的
要求，详见表 3。
表 3 回收率测定结果
序号
取样量
/ g
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1 0． 010 4 7． 349 6 7． 3 14． 897 7 103． 40
2 0． 009 9 6． 996 3 7． 5 14． 566 1 100． 93
3 0． 010 6 7． 491 0 7． 2 14． 872 2 102． 52 101． 49 1． 37
4 0． 010 2 7． 208 3 7． 4 14． 591 6 99． 77
5 0． 010 3 7． 279 0 7． 4 14． 700 1 100． 28
6 0． 009 8 6． 925 7 7． 3 14． 372 8 102． 02
2． 3． 2． 6 样品测定:精密称取 3、4、5 批木姜叶柯总
黄酮样品 20 mg，各 3 份，依法制成供试品溶液，依
法测定，计算结果见表 4。
表 4 总黄酮测定结果(n =3)
样品 总黄酮量 /% 平均量 /% RSD /%
3# 84． 31 85． 95 85． 67 85． 31 1． 02
4# 87． 31 86． 16 85． 43 86． 30 1． 10
5# 89． 23 88． 31 88． 19 88． 57 0． 64
3 讨论
3． 1 供试品溶液提取时间的选择 分别对超声
10、20、30 min的供试品溶液进行测定，结果随着时
间的增加，总黄酮增加不明显，说明超声处理 10 min
已能将被测成分基本提取完全，同时考虑到实验效
率和成本，故采用超声处理 10 min作为提取时间。
3． 2 总黄酮的测定经典的方法是以芦丁为对照品
比色测定［6-8］，为此，本实验也曾以芦丁为对照品，通
过络合比色法测定木姜叶柯中总黄酮，但针对性不
强，测定结果不理想。这可能是由于芦丁属于黄酮
醇类化合物(结构为 5、7、3＇、4＇－四羟基黄酮 － 3 －芸
香糖苷)，木姜叶柯中黄酮成分主要为二氢查耳酮
类化合物，与芦丁在结构上差异较大，因此芦丁不适
合用于木姜叶柯总黄酮成分测定。之后，本实验选
择木姜叶柯中主要成分根皮苷为对照品，采用直接
紫外测定法测定总黄酮，结果可靠。
3． 3 本实验除了建立薄层色谱定性鉴别外，还采用
高效液相色谱法对主要有效成分根皮苷进行测定，
同时还采用紫外分光光度法测定总黄酮。因此，本
文所建立的质量控制方法能比较全面地、有效地控
制木姜叶柯总黄酮质量。
参考文献:
［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志:22 卷［M］．
北京:科学出版社，1998:201．
［2］ 国家中医药管理局中华本草编委会．中华本草:2 卷［M］． 上
海:上海科学技术出版社，1999:431．
［3］ Joel R L，Ehrenkranz，Norman G L，Kahn C R． et al． Phlori-
zin:a review［J］． Diabetes Metab Res Rev，2005，21:31-38．
［4］ 陈 磊，杨建荣，黄雪松．高效液相色谱法快速测定红富士苹
果渣中的 6 种多酚［J］． 食品与发酵工业，2008，34(8):158-
160．
［5］ 方 荣，杨 茜，李 莉，等． 湖北海棠中根皮苷含量测定
［J］．食品科技，2008，33(6):195-196．
［6］ 郑杭生，李计萍，韩 炜，等． 紫外-可见分光光度法测定总黄
酮含量的方法学考察要点［J］． 中成药，2008，30(9):1364-
1365．
［7］ 魏 艳，陈晓青，马志祥，等． 红蓼不同提取部位花旗松素和
总黄酮含量的测定［J］．中成药，2008，30(12):1853-1855．
［8］ 杨少军，孟陆亮，靳子明． 慈菇消脂丸的质量标准研究和总黄
酮含量测定［J］． 中成药，2009，31(5):749-753．
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第 33 卷 第 5 期
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