全 文 ：鸭儿芹(CryptotaeniajaponicaHassk)为伞形科植
物,又名三叶芹、鸭脚板草、野芹菜等,具有特殊的香
气。在中国、日本、朝鲜半岛等均有野生分布,是一种
常被采食山野菜 [1]。鸭儿芹的药用较广,具有消炎、
解毒、活血消肿的功效,主治肺炎、肺脓肿、淋病、感
冒咳嗽、跌打损伤,外用治皮肤瘙痒等病症[2]。近年
来,植物类黄酮(flavonoids)的开发利用越来越多,在
民间鸭儿芹被用来治疗急性黄疸肝炎,且资源丰富。
同时有研究表明,鸭儿芹总黄酮含量高达 4.47%[3]。
本研究观察了鸭儿芹总黄酮对四氯化碳致急性肝损
伤小鼠的影响,旨在寻找有效的保肝药。
1 材料及方法
1.1 材料
野生鸭儿芹,遵义市郊外采集;鸭儿芹总黄酮的提
鸭儿芹总黄酮对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用
田 琳 1,龚其海 2
(1.遵义医学院 机能学教研室,贵州 遵义 563000;2.遵义医学院药理学教研室,贵州 遵义 563000)
[摘要] 目的 观察鸭儿芹总黄酮对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用。方法 选用昆明种小鼠,鸭儿芹总黄酮
(40、80、160mg/kg)三种剂量连续灌胃给药 5d后,腹腔注射 0.1%CCl4(10ml/kg)致小鼠急性肝损伤,测定不同剂量的
鸭儿芹总黄酮对小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性,肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性及
丙二醛(MDA)含量。结果 3种剂量的鸭儿芹总黄酮均能显著地降低小鼠血清 ALT和 AST活性,升高小鼠肝脏 SOD
活性,降低肝脏MDA含量。结论 鸭儿芹总黄酮对由四氯化碳所致的急性肝脏损伤有保护作用,其机制与提高小鼠的
抗氧化能力有关。
[关键词] 鸭儿芹总黄酮;肝损伤;丙氨酸转氨酶;天冬氨酸转氨酶;超氧化物歧化酶;丙二醛
[中图分类号]R285.1 [文献标识码]A [文章编号]1000-2715(2008)01-0008-03
ProtectiveefectoftotalflavonoidsfromCryptotaeniajaponicaHasskon
CCl4-inducedacuteliverinjuryinmice
TIANLin1,GONGQi-Hai2
( 1.DepartmentofMedicalFunctionalExperiment,ZunyiMedicalColege,GuizhouZunyi
563003,China;2.DepartmentofPharmacology,ZunyiMedicalColege,GuizhouZunyi,
563000,China)
[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheprotectiveefectoftotalflavonoidsfromCryptotaeniajaponicaHasskonCCl4-
inducedacuteliverinjuryinmice.Methods Kunmingmicewereusedintheexperiment.Themicewereadministrated
bygavagewithtotalflavonoidsfromCryptotaeniajaponicaHasskatthedoseof(40,80,160mg/kg)respectively.Theliver
injurymodelwasestablishedbyinjectionofCCl4toabdominalcavity.Alaninetransaminase (ALT)andaspartate
transaminase(AST)inserum,activitiesofsuperoxidase(SOD)andmalondialdehyde(MDA)contentinhepatictissuewere
measured.ResultsTotalflavonoidsfromCryptotaeniajaponicaHasskatthediferentdosecoulddecreaseALT,AST
activitiesinserum,increaseSODactivity,anddecreaseMDAcontentinhepatictissue.Conclusion Totalflavonoids
fromCryptotaeniajaponicaHasskcanprotectCCl4-inducedacuteliverinjuryinmice,themechanismmayberelatedto
increaseanti-oxidationabilityofliver.
[Keywords]Totalflavonoids;CryptotaeniajaponicaHassk;liverinjury;ALT;AST;SOD;MDA
________________________________
[收稿日期]2008-01-15
[基金项目] 国家自然科学基金资助项目(30572353)。
[通讯作者] 龚其海,男,硕士,讲师。
遵 义 医 学 院 学 报
ACTAACADEMIAEMEDICINAEZUNYI
第31卷第1期
2008年2月
Vo1.31No.1
Feb.2008
8· ·
组别 ALT(U/L) ASTALT(U/L)
正常组 46.1±3.5 150±32
模型组 260.0±43** 276±59**
阳性药组 59.3±11## 161±41##
低剂量受试药组 170.0±23# 220±21##
中剂量受试药组 96.0±34## 191±45##
高剂量受试药组 63.0±18## 169±51##
表 1鸭儿芹总黄酮对小鼠血清 ALT和 AST活性的影
响(n=10,x±s)
注:与正常组比较,**P<0.01;与模型组比较,#P<0.05,
##P<0.01
取,按参考文献进行[3];标准品为芦丁(纯度99.99%),中
国药品及生物制品检定所提供;齐墩果酸由长沙中
药一厂生产;四氯化碳为南京化学试剂厂产品;ALT
(批号 20061201)、AST(批号 20061207)、MDA(批号
20061205)、SOD(批号20061203)试剂盒均由南京建
成生物工程研究所提供。所用其它试剂均为国产分
析纯。昆明种小鼠,雌雄各半,体重20g±2g,由遵义
医学院实验动物中心提供。BP211D电子天平(德国
Saftarius生产);722S分光光度仪(上海精密科学仪器
公司);TGL216H高速离心机 (珠海黑马医学仪器有
限公司);XW280A旋涡振荡器(上海精科实业有限公
司);DL25M低速冷冻离心机 (长沙湘仪离心机仪器
有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 动物分组、给药及造模[4] 60只小鼠,随机分
成 6组,每组 10只,分别为正常组、模型组、鸭儿芹
总黄酮组(低、中、高剂量组分别为 40、80、160mg/
kg)、联苯双酯组(150mg/kg)。各给药组按0.2ml/(10
g/d)剂量灌胃给药,正常对照组和模型组予以相应体
积的溶媒,连续灌胃给药5d。于末次给药后1h,除正
常对照组腹腔注射(ip)等量生理盐水外,其余各组均
ip0.1%CCl4花生油溶液10mg/kg。禁食16h后,所
有小鼠眼球采血,分离血清,测定丙氨酸转氨酶(ALT)/
天门冬氨酸转氨酶(AST)活性。同时,断头处死小鼠后
取肝脏同一部位,用冷生理盐水制备10%肝匀浆,测
定肝组织匀浆中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化
酶(SOD)活性。
1.2.2 指标检测方法 赖氏法测定血清 ALT、AST
活性,硫代巴比妥酸法测定肝匀浆中 MDA含量,考
马斯亮兰法测定肝匀浆中蛋白质含量,黄嘌呤氧化
酶法测定 SOD活力。具体操作按试剂盒说明书进
行。
1.3 统计学处理 各项数据采取x±s表示,组间比
较采用方差分析检验。所有资料的统计分析均用
SPSS11.10软件包完成。P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 鸭儿芹总黄酮对小鼠血清转氨酶的影响 小鼠
腹腔注射CCl4诱导后24h,模型对照组小鼠血清中
ALT和AST活性明显高于正常组。与模型对照组比
较,鸭儿芹总黄酮各剂量组与联苯双酯阳性对照组
明显降低血清中ALT和AST活性,并且有剂量依赖
性(见表1)。
2.2 鸭儿芹总黄酮对小鼠肝脏匀浆中 SOD活性及
MDA含量的影响 小鼠眼眶静脉取血结束后,处死
小鼠,取肝脏同一部位匀浆,测定其 SOD活性及
MDA含量。结果显示,小鼠腹腔注射CCl4诱导后24
h,模型组小鼠肝脏中SOD活性明显低于正常对照
组,MDA含量明显高于正常对照组水平。鸭儿芹总
黄酮各剂量组与阳性药组可明显升高 SOD活性,并
使肝脏中MDA水平明显低于模型组(见表2)。
3 讨论
我国卫生部颁布的《中药药理实验指导原则》中
指定应用四氯化碳和氨基半乳糖肝损伤动物模型进
行保肝降酶新药的药理实验。本模型条件要求低,技
术易于掌握,可靠性强,重复性好,目前常用于研究肝
损伤的保护剂[5]。肝损伤是多因素参与的复杂病理生
理过程,在其病变过程中多种酶、自由基以及脂质过
氧化反应均发生着较大的变化。CCl4在经肝微粒体
cytP450激活后产生了自由基,引发脂质过氧化反应,
导致能量代谢障碍,使肝细胞膜通透性增加,细胞内
转氨酶因巨大的浓度梯度而释放入血液[6]。在本研究
中,腹腔注射 0.1%CCl4花生油溶液后,小鼠血清中
ALT和AST活性高于正常组约6倍,这表明本模型
组别 SOD[U/(g·ww)] MDA[nmol/(g·ww)]
正常组 132±5 5.1±0.7
模型组 104±5** 13.6±0.6**
阳性药组 139±6## 6.8±0.4##
低剂量受试药组 110±11# 12.1±1.1
中剂量受试药组 123±9## 8.9±0.5##
高剂量受试药组 136±13## 7.1±0.7##
表 2 鸭儿芹总黄酮对小鼠肝脏匀浆中 SOD活性及
MDA含量的影响(n=10,x±s)
注:与正常组比较,**P<0.01;与模型组比较,#P<0.05,
##P<0.01
遵 义 医 学 院 学 报 31卷
9· ·
(上接第 7页) 进行病原菌检查和药物敏感实验,
尽早采用经济、敏感的抗生素进行治疗以免引起整
个养殖场的感染。且应进行有计划地药物预防,可以
每半个月定期对养殖池用消毒剂消毒一次,以杀灭水
体中的病原体[8]。
对于致病菌分离鉴定和药敏试验,常规方法较
为全面,但存在反应时间较长的缺点。本实验采用法
国梅里埃全自动微生物分析系统进行实验,在短时
间内即可得到可靠结果。
本实验药敏实验结果提示温和气单胞菌对左旋
氧氟沙星、氨曲南、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、
头孢曲松等抗生素敏感,这与文献报告结果一致,但
对哌拉西林、复方新诺明、头孢唑啉也敏感,该结果
与文献报告有所差别[9,10]。
[参考文献]
[1] 敖鑫如.大鲵疾病的发生及防治[J].江西水产科技,1999,4:
21-22.
[2] 欧东升.人工养殖条件下大鲵病害防治初探[J].内陆水产,
2005,8:17-18.
[3] 周煜华,陈武恒,何成伟等.进境柬埔寨暹罗鳄温和气单
胞菌疫病诊断及防治[J].广西畜牧兽医,2003,19(2):82-
84.
[4] 蔡完其,孙佩芳.罗非鱼温和气单胞菌病的病原研究和药
敏试验[J].中国水产科学,2002,9(3):223-246.
[5] 叶雪平,顾金华,杨广智,等.牛蛙温和气单胞菌病病原及防
治[J].上海水产大学学报,2000,9(1):78-80.
[6] 王永坤,李志健,朱国强,等.温和气单胞菌和嗜水气单胞菌
致病力的比较研究[J].鱼类病害研究,1997,19(1-2):18-
24.
[7] 孙佩芳,蔡完其.中华鳖温和气单胞菌病的病原研究[J].淡
水渔业,1998,2(4):3-5.
[8] 欧东升.人工养殖条件下大鲵病害防治初探[J].内陆水产,
2005,8:17-18.
[9] GhengheshKS,El-GhodbanA,DkakniR,etal.Prevalence,
speciesdiferentiation,haem olyticactivity,andantibiotic
susceptibilityofAeromonadsinuntreatedwelwater[J].M
emInstOsw-aldoCruz,2001,96(2):169-173.
[10]KoWC,YuKW,LiuCR,etal.Increasingantibioticresis-
tanceinclinicalisolatesAeromonasstrainsinTaiwan[J].
AntimicrobAgentsChemother,1996,40(5):1260-1262.
[责任编辑:李 勇]
是成功的。鸭儿芹总黄酮各剂量组明显降低血清中
ALT和AST活性,并且有剂量依赖性。同时,值得注
意的是鸭儿芹总黄酮高剂量组的 ALT和 AST活性
与阳性药联苯双酯相当,提示鸭儿芹总黄酮在防治
急性肝损伤方面的有效性。
CCl4造成的肝损伤是典型的自由基损伤,可显
著降低肝脏SOD活性,升高MDA含量。在本研究中,
模型组SOD活性明显降低,MDA含量明显增加。然
而,鸭儿芹总黄酮各剂量组与阳性药组可明显升高
肝脏中SOD活性,降低肝脏中MDA含量,且鸭儿芹
总黄酮高剂量组的SOD活性、MDA含量与阳性药相
当。SOD是氧自由基的清除剂,可抑制自由基启动的
脂质过氧化反应,肝细胞受到自由基攻击时,SOD可
因其过度消耗而减少。MDA是脂质过氧化的最终产
物,可严重破坏细胞膜的结构,导致细胞肿胀、坏死,
其含量反映了组织过氧化的损伤程度[7]。体内SOD
活性越高,自由基清除的速度越快。本研究结果表明
鸭儿芹总黄酮可能通过稳定肝细胞膜正常结构,加
强组织修复,清除自由基,抑制脂质过氧化而减轻肝
细胞损害。结合文献报道的鸭儿芹的低毒性[8],表明
了鸭儿芹总黄酮在防治急性肝损伤方面的良好前
景。鸭儿芹总黄酮是否对其它类型的肝损伤是否有
保护作用有待研究。
[参考文献]
[1] 中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴(第二册)[M].
北京:科学出版社,1985.406.
[2] 江苏新医学院.中药大辞典 (下册)[M].上海:上海科学技
术出版社,1977.1842-1843.
[3] 李长生,朱 笃,邓 娟,等.鸭儿芹总黄酮提取及含量测定
研究[J].食品科学.2006.27(11):357-360.
[4] 徐淑云主编.药理实验方法学[M].第 2版.北京:人民卫
生出版社,1991.506.
[5] 刘彦双,朱淑霞,王永利.急性肝损伤模型的研究进展[J].
河北医药,2007,29(6):613-4.
[6] 陈梁,朱锦善,任建平.柴胡疏肝散对四氯化碳所致大鼠急
性肝损伤的防治作用[J].中西医结合肝病杂志,2004,14
(1):42-3.
[7] 张秀明,陈科力,李翰明,等.蛇葡萄根的抗肝降酶及抗自
由基损伤作用[J].中国药师,1999,2(5):225-228.
[8] 高敏,刘佳,俞红,等.野生鸭儿芹毒性及致突变性研究
[J].预防医学情报杂志,2005,21(4):505-505.
[责任编辑:李 勇]
田琳等·鸭儿芹总黄酮对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用
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