全 文 ：ＨＰＬＣ法测定黄皮叶醇提取物中芦丁的含量
丁　莹１，陈莎莉２，曾湘达１
（１．广东药科大学，广东 中山５２８４５８；２．长治医学院附属和平医院，山西 长治０４６０００）
摘　要：目的：建立黄皮叶醇提取物中芦丁的含量测定方法，为黄皮叶的开利用发提供参考。方法：采用
十八烷基硅烷键合硅胶柱（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），甲醇－水－乙腈－冰乙酸（２０∶６０∶１０∶１）为流动
相，流速１ｍＬ／ｍｉｎ，柱温２５℃，检测波长３６０ｎｍ。结果：芦丁在０．８０１　６～４．００　８０μｇ范围内与峰面积呈
良好的线性关系（ｒ＝０．９９９　９），平均回收率为９７．６％，ＲＳＤ为１．５％（ｎ＝６）。结论：该方法结果准确度
高，精密度好，可用于黄皮叶醇提取物中芦丁的含量测定。
关键词：黄皮叶；芦丁；高效液相
中图分类号：Ｒ２８４．２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１６）０９－００３３－０２
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１６０９０１４
收稿日期：２０１５－１１－２７
作者简介：丁莹（１９７８－），女，广东药科大学实验师，研究方向为药剂学。
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＣｌａｕｓｅｎａ　ｌａｎｓｉｕｍ（Ｌｏｕｒ．）Ｓｋｅｅｌｓ　ｌｅａｆ　ｂｙ　ＨＰＬＣ
Ｄｉｎｇ　Ｙｉｎｇ１，Ｃｈｅｎ　Ｓｈａｌｉ　２，Ｚｅｎｇ　Ｘｉａｎｇｄａ１
（１．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　５３８４５８，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，
Ｈｅｐｉｎｇ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｃｈａｎｇｚｈｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｃｈａｎｇｚｈｉ，０４６０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｌａｕｓｅｎａ　ｌａｎｓｉｕｍ（Ｌｏｕｒ．）Ｓｋｅｅｌｓ　ｌｅａｆ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　ａ　Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　ｇｏｌｄ　Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）．ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｗａｔｅｒ－ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ａｃｅｔｉｃ
ａｃｉｄ（２０∶６０∶１０∶１）ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ａｔ　３６０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：
Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ（ｎ＝６）ｗａｓ　０．８０１　６～４．００　８μｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９　９）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ（ｎ＝６）ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　９７．６％（ＲＳＤ＝
１．５％，ｎ＝６）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｌａｕｓｅｎａ　ｌａｎｓｉｕｍ
（Ｌｏｕｒ．）Ｓｋｅｅｌｓ　ｌｅａｆ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｌａｕｓｅｎａ　ｌａｎｓｉｕｍ（Ｌｏｕｒ．）Ｓｋｅｅｌｓ　Ｌｅａｆ；Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ＨＰＬＣ
　　黄皮Ｃｌａｕｓｅｎａ　ｌａｎｓｉｕｍ（Ｌｏｕｒ．）Ｓｋｅｅｌｓ是芸香科（Ｒｕｔａ－
ｃｅａｅ）黄皮属（Ｃｌａｕｓｅｎａ）植物，主要产于我国南部，如福建、
广东、广西、云南等地。黄皮叶性味属辛凉（陆川本草），在
《本草求原》中记载黄皮叶有“解秽除垢，退黄肿”之功用。
民间用其叶煮水洗浴治疗疥癫、消风肿等［１，２］，可见它具有
良好的药用价值。黄皮叶拥有广阔的市场空间和良好的发
展前景，但目前尚缺乏黄皮叶的质量标准研究。本研究采
用高效液相色谱法，测定黄皮叶醇提取物中芦丁的含量，以
期为黄皮叶的质量标准研究提供一定的依据。
１　仪器与试药
１．１　仪器
依利特２３０高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有
限公司）；ＵＶ２３０紫外可见检测器（大连依利特分析仪器有
限公司）；ＳＡＲＴＯＲＩＵＳＣＰ２２５Ｄ十万分之一电子天平（德国
赛多利斯）；ＫＱ－５００型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限
公司）。
１．２　试药
黄皮叶采自中山市金钟水库阴干后粉碎；芦丁对照品
（圻明生物科技有限公司，批号：Ｋ１４０１）；甲醇、乙腈均为色
谱纯，其他试剂均为分析纯。
２　方法
２．１　色谱条件
色谱柱：Ｂｏｓｔｏｎ　Ｇｒｅｅｎ　ＯＤＳ　Ｃ１８色谱柱（１５０ｍｍ×４．６
ｍｍ，５μｍ）；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温为室
温；以甲醇－水－乙腈－冰乙酸（２０∶６０∶１０∶１）为流动
相；流速为１ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为３６０ｎｍ；进样量为２０μＬ。
２．２　对照品溶液制备
精密称取芦丁对照品５ｍｇ，甲醇定容至１０ｍＬ，再从中
取出２ｍＬ置于５ｍＬ容量瓶中定容，制成含量为０．２００　４ｍｇ／
ｍＬ的对照品溶液。
２．３　供试品溶液制备
取一定量黄皮叶阴干，粉碎，过４０目筛，称取黄皮叶粉
末２ｇ，加入５０ｍＬ　６０％的乙醇，于６０℃水浴器中超声波９０Ｗ
提取７０ｍｉｎ，过滤，定容至１００ｍＬ，精密移取样品液１ｍＬ于
２５ｍＬ容量瓶，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品
溶液。
２．４　测定方法
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各２０μＬ，注入
—３３—
高效液相色谱仪，测定峰面积，记录色谱，见图１，用外标法 计算芦丁的含量。
图１　黄皮叶高效液相色谱
３　结果
３．１　精密度试验
精密吸取对照品溶液２０μＬ，连续进样６次，测定样品峰
面积。结果表明其平均峰面积为３　０１８　０５０，ＲＳＤ 为０．
３４％，表明机器精密度良好。
３．２　线性关系考察
精密吸取０．２００　４ｍｇ／ｍＬ芦丁对照品溶液４、８、１２、１６、
２０μＬ，注入液相色谱仪，按“２．１”色谱条件测定峰面积。以
峰面积为纵坐标，芦丁对照品进样量为横坐标作回归方程，
可得标准曲线：ｙ＝１　２４１　５６８．１６ｘ＋１６９　２３９．８５，ｒ＝０．９９９　９
（ｎ＝６）。表明芦丁进样量在０．８０１　６～４．００８　０μｇ的范围内
与峰面积具有良好的线性关系。
３．３　重复性试验
取同一批黄皮叶粉末６份精密称定，按照“２．３”下制作供
试品溶液６份，按“２．１”所述的芦丁测定方法测定峰面积，结
果见表１，峰面积ＲＳＤ为０．６９％ ，该方法重复性良好。
表１　重复性试验结果
指标 １　 ２　 ３　 ４　 ５　 ６ ＲＳＤ（％）
峰面积 ２　１４９　５５９．９１　 ２　１２５　４１１．９８　 ２　１４８　９４７．６７　 ２　１１９　０３８．８７　 ２　１１８　６７５．６４　 ２　１４３　９２５．６５　 ０．６９
３．４　稳定性试验
按照“２．３”下制作供试品溶液，分别于０、２、４、８、１２、２４ｈ
测定芦丁峰面积．结果见表２。结果表明，供试品溶液在
２４ｈ内基本稳定，平均峰面积为２　１４６　７０６．０６５。ＲＳＤ为
０．７８％，样品在２４ｈ无明显变化。
表２　稳定性试验结果
指标 ０　 ２　 ４　 ８　 １２　 ２４ ＲＳＤ（％）
峰面积 ２　１５１　９６７．０６　 ２　１７４　４９０．０３　 ２　１４３　９２５．６５　 ２　１３４　８８２．９０　 ２　１４９　５５９．９１　 ２　１２５　４１１．９８　 ０．７８
３．５　样品含量测定
取黄皮叶样品３份，按照供试品溶液制备方法处理，并
按照“２．１”所述色谱条件进行测定，计算芦丁的含量。结果
测得黄皮叶中芦丁的平均含量为０．０４％。
４　讨论
笔者尝试参考卢丽霞等［３］测定荞麦中芦丁的含量所用
的流动相：甲醇－水－冰乙酸，并尝试改变三者的比例，但
所要峰旁边总会有一个杂峰分不开；也尝试过参考田吉
等［４］在测定杜仲叶中的芦丁含量时所用的流动相：乙腈－
０．１％磷酸溶液，但测定时柱压比用甲醇时低很多，而且二
十分钟内不出峰，可能是由于本实验室只能使用等度洗脱
而文献使用的是梯度洗脱的原因；最后尝试参考周美环
等［５］测定桑叶中芦丁的含量所用的流动相：甲醇－乙腈－
醋酸－水，并调试了其中的比例，最后得到比较满意的峰分
离结果。
参考文献：
［１］　赵青，李创军，杨敬芝，等．黄皮叶的化学成分研究［Ｊ］．中国
中药杂志，２０１０，３５（８）：９９７－９９９．
［２］　ＹＡＳＵＫＡＷＡ　Ｋ，ＴＡＫＩＤＯ　Ｍ．Ａ　ｆｌａｖｏｎｏｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｌｙ－
ｓｉｎ　ａｃｈｉａｍａｕｒｉｔｉａｎａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏ－ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８７，２６（４）：１２２４．
［３］　卢丽霞，李娆玲，周宏兵．ＨＰＬＣ法测定不同产地荞麦中芦丁
的含量［Ｊ］．海峡药学，２０１０，２２（６）：６１－６３．
［４］　田吉，何兵，李春红．ＨＰＬＣ法同时测定杜仲叶中绿原酸和芦
丁含量［Ｊ］．泸州医学院学报，２０１０，３３（５）：４９０－４９３．
［５］　周美环，赵书楷，陈淼，等．ＨＰＬＣ法测定桑叶中芦丁的含量
［Ｊ］．辽宁中医药大学学报，２０１０，１２（５）：２２８．
（责任编辑：魏　晓）
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