全 文 ：紫外分光光度法测定醉鱼草果实中总黄酮含量
肖龙泉1，任亚硕2，3，吴德玲2，3，汪天明2，3
(1．安徽省亳州市人民医院，安徽 亳州 236804;2．安徽中医药大学，安徽 合肥 230038;
3．安徽省现代中药重点实验室，安徽 合肥 230038)
摘要:目的 建立醉鱼草果实中总黄酮的含量测定方法。方法 采用紫外分光光度法，以芦丁为对照品，通过亚硝酸钠 －硝
酸铝 －氢氧化钠系统显色法测定醉鱼草果实中总黄酮的含量。结果 芦丁在 8． 56 ～ 51． 36 mg·L －1范围内吸光度与浓度呈
良好的线性关系(A = 0． 012 0 C － 0． 007 1，r = 0． 999 8) ，平均加样回收率为 98． 76%，相对标准偏差为 1． 74%(n = 6) ，所测得
醉鱼草果实中总黄酮含量为 5． 29%。结论 该方法操作快速、简便，结果准确可靠，可用于醉鱼草果实中总黄酮成分的含量
测定。
关键词:醉鱼草果实;总黄酮;紫外分光光度法;含量测定
doi:10． 3969 / j． issn． 1009 － 6469． 2015． 02． 017
Determination of flavonoids in the fruits of
Buddleja lindleyana Fort． by ultraviolet spectrophotometry
XIAO Long-quan1，3，REN Ya-shuo2，3，WU De-ling2，3，et al
(1． The People’s Hospital of Bozhou，Anhui 236804，China;2． School of Pharmacy，Anhui University of
Traditional Chinese Medicine，Anhui，Hefei 230038，China;3． Anhui Key Laboratory of Modernized
Chinese Material，Hefei，Anhui 230038，China)
Abstract:Objective To establish a method for determining total flavonoids in the fruit of Buddleja lindleyana Fort． Methods The
content of total flavonoids was detected by ultraviolet spectrophotometry (US)． It was performed on rutin (as a control)and a sample
with sodium nitrite-aluminum nitrate and sodium hydroxide as color-developing agent． Results The good linearity between concentra-
tions and absorbance of rutin was found within the range of 8． 56 to 51． 36 mg·L －1(A = 0． 012 0 C － 0． 007 1，r = 0． 999 8)． The aver-
age recovery was 98． 76% and relative standard deviation was 1． 74% (n = 6)． The fruit of Buddleja lindleyana Fort． contained 5． 29%
of total flavonoids． Conclusions This method can be used for determining flavonoids in the fruit of Buddleja lindleyana Fort． because of
its rapidness，simplicity，accurateness and reliability．
Key words:fruits of Buddleja lindleyana Fort．;total flavonoids;ultraviolet spectrophotometry;content determination
基金项目:国家自然科学基金(No 81373841) ;安徽省教育厅自然科学研究重点项目(No KJ2013A170)
通信作者:吴德玲，男，教授，研究方向:中药活性成分研究，E-mail:dlwu7375@ sina． com
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醉鱼草果实药材是马钱科植物醉鱼草(Buddle-
ja lindleyana Fort．)的果实，具有祛风除湿、止咳化
痰、散瘀之功效［1］。文献报道醉鱼草属植物中含有
丰富的化合物种类，包括黄酮类，三萜类及苯乙醇
苷类等［2 － 5］，其中黄酮类成分，具有多种药理活
性［6 － 7］。经前期研究发现，醉鱼草果实中同样含有
丰富的黄酮类化合物［8］，主要为芦丁、槲皮素、木犀
草素等，是其主要药理活性成分，其中芦丁是一种
脱氢黄素酮的糖苷，在各类植物中普遍存在，且含
量较高。醉鱼草果实中黄酮类含量的测定方法未
见报道，为了进一步研究醉鱼草果实中的黄酮类成
分，本研究选用芦丁作为对照品，通过经典的亚硝
酸钠 －硝酸铝 －氢氧化钠显色法［9 － 10］，建立了醉鱼
草果实中黄酮类成分的含量测定方法。
1 仪器与试剂
紫外 －可见分光光度计(UV-757CRT 型，上海
精科) ;电子分析天平(AB135-S，瑞士 METTLER
TOLEDO) ;HH-S恒温水浴锅(江苏金坛市国胜实验
仪器厂) ;高速中药粉碎机(FZ-02，浙江省温岭市百
乐粉碎设备厂)。芦丁对照品(批号:100080 －
200306:中国药品生物制品检定所) ;醉鱼草果实
(于 2008 年 12 月采自安徽舒城万佛山，经安徽中
医药大学药学院刘守金教授鉴定为马钱科植物醉
鱼草的果实) ;亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，甲醇等
均为分析纯;水(实验室自制超纯水)。
2 方法及结果
2． 1 对照品及供试品溶液的制备 精密称取在五
氧化二磷减压干燥器中干燥 36 h 芦丁对照品 10． 7
mg，置 50 mL容量瓶中，甲醇溶解后定容至刻度即
得;芦丁对照品溶液浓度为 0． 214 g·mL －1。精密
称取醉鱼草果实粗粉 1 g，置 50 mL 圆底烧瓶中，加
甲醇 20 mL回流提取提取 3 次，每次 1 h，合并滤液，
并定容至 100 mL，即得供试品溶液。
2． 2 检测吸收波长的确定 分别精密吸取上述对
照品溶液 6． 0 mL、供试品溶液 3． 0 mL，置 25 mL 容
量瓶中，加蒸馏水至 6 mL，再加入 5%的 NaNO2 溶
液 1 mL，摇匀后静置 6 min;加 10% Al(NO3)3 溶液
1 mL，摇匀后静置 6 min;加 4% NaOH 溶液 10 mL，
加水定容至刻度，摇匀后静置 15 min。紫外—可见
分光光度仪全波长扫描的结果显示，对照品及供试
品溶液在 510 nm 波长处显示有较强吸收峰，因此
选定 510 nm作为检测波长，见图 1。
图 1 芦丁对照品溶液
注:(a)和供试品溶液(b)紫外扫描图。
2． 3 标准曲线的建立 分别精密吸取芦丁对照品
溶液 0． 0、1． 0、2． 0、3． 0、4． 0、5． 0、6． 0 mL 于 25 mL
容量瓶中，均加入蒸馏水至 6 mL，按“2． 2”项下步骤
操作，以第一份作为空白对照，在 510 nm 处测定各
对照品溶液的吸光度值。吸光度值分别为 0． 099，
0． 195，0． 301，0． 404，0． 505，0． 612。以吸光度值
(A)为纵坐标，芦丁对照品溶液浓度(C)为横坐标，
绘制标准曲线，得线性回归方程为:A = 0． 012 0 C
－ 0． 007 1 (r = 0． 999 8) ，结果表明芦丁在 8． 56 ～
51． 36 mg·L －1浓度范围内呈良好的线性关系。
2． 4 精密度考察 精密吸取同一供试品溶液 1
mL，置 25 mL 容量瓶中，按“2． 2”步骤中的方法显
色，重复测定 6 次，吸光度值分别为:0． 247，0． 246，
0． 246，0． 245，0． 248，0． 247。计算其吸光度值的相
对标准偏差(relative standard deviation，RSD)=
0． 43%。结果表明仪器精密度良好。
2． 5 稳定性考察 分别精密吸取供试品溶液和对
照品溶液各 1 mL于 25 mL容量瓶中，按“2． 2”步骤
操作，测定吸光度，每隔 5 min 测定一次，连续 25
min，考察其显色稳定性。吸光度值分别为:0． 247，
0． 245，0． 245，0． 241，0． 243，0． 242。结果表明，供试
品及对照品溶液在显色系统完全反应后 25 min 内，
具有良好稳定性。
2． 6 重复性考察 分别精密称取醉鱼草果实粗粉 1
g，共 6份，按“2． 2”步骤制备供试品溶液并测定其吸
光度，吸光度值分别为:0． 251，0． 242，0． 249，0． 255，
0． 245，0． 243。计算得药材中总黄酮含量平均值为
5． 29%，RSD =1． 83%。结果表明重复性良好。
2． 7 加样回收率试验 分别精密吸取含量已知的
醉鱼草果实供试品溶液 1 mL，6 份，置于 25 mL 容
量瓶中，各加入芦丁对照品溶液 2． 5 mL，按“2． 2”步
骤，测定吸光度，计算加样回收率及 RSD，结果见表
1，表明本方法结果准确可靠。
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表 1 加样回收率试验
序号 原含量 /mg 加样量 /mg 吸光度 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
1 0． 5315 0． 5350 0． 501 1． 058 98． 41
2 0． 5263 0． 5350 0． 496 1． 047 97． 33
3 0． 5310 0． 5350 0． 499 1． 053 97． 57
4 0． 5319 0． 5350 0． 511 1． 078 102． 07
5 0． 5270 0． 5350 0． 500 1． 056 98． 88
6 0． 5341 0． 5350 0． 502 1． 060 98． 30
98． 76 1． 74
2． 8 样品含量测定 精密称取醉鱼草果实粗粉 1
g，甲醇回流提取 3 次，每次 1 h，滤液合并后，用甲醇
定容至 100 mL容量瓶，平行测定 3 组，按“2． 2”步
骤显色并测定吸光度，计算得供试品中总黄酮含量
分别为 5． 28%、5． 32%、5． 41%，平均含量为
5． 34%。
3 讨论
3． 1 供试品的提取 醉鱼草果实含多种黄酮类化
合物，黄酮类化合物的提取实验前期分别采用纯
水、不同浓度的乙醇及甲醇作为提取溶媒，考察醉
鱼草果实中总黄酮含量，结果发现甲醇回流提取
时，所测得药材中总黄酮含量最高［11］，进而选定甲
醇为醉鱼草果实药材的提取溶剂。
3． 2 测定方法的确定 黄酮成分的分析测定方法
主要包括薄层扫描法、HPLC 法、紫外分光光度法
等。波层扫描法测定醉鱼草果实中总黄酮的影响
因素太多，测定结果不理想。总黄酮中成分种类较
多，通过 HPLC法测定每个黄酮成分的含量，来测定
总黄酮的含量也并不现实。醉鱼草果实中黄酮类
化合物的紫外区间的吸光度值虽不一致，但其黄酮
母核能与亚硝酸钠—硝酸铝—氢氧化钠系统反应，
通过被亚硝酸钠还原，再加硝酸铝络合，在碱性条
件下显红色，在 510 nm 处有较强吸收，吸收峰稳定
无干扰，根据显色后吸光度的不同，可实现对其黄
酮类成分的测定，既能有效避开其他成分对黄酮测
定的影响，又能保证结果的准确性［12］。在实验中还
发现，显色反应会随着显色温度和显色时间的变化
而变化，25 min 内变化较缓，25 min 后其吸光度值
会下降，因此实验过程中应严格控制条件，尽量排
除干扰。
本文以芦丁为对照品，采用亚硝酸钠—硝酸
铝—氢氧化钠法，测定醉鱼草果实中黄酮类成分的
总含量，结果显示该法操作快速、简便，结果准确可
靠，可作为醉鱼草果实总黄酮的含量测定方法。
3． 3 应用前景 醉鱼草作为中医的传统药材，但
其果实的研究较少，这不利用醉鱼草资源的综合开
发，本研究通过紫外分光光度法测定醉鱼草果实中
总黄酮含量，建立了醉鱼草果实总黄酮的含量测定
方法，为醉鱼草这一传统药用资源的综合利用提供
了参考依据。
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