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金樱根、茎炮制品抗菌抗炎作用研究



全 文 :A、B 均没有明显的影响,最佳的炮制工艺为:A3 B2
C2D2;即每 100 kg 药材加 20 kg 黄酒,闷润 60 min,
60%微波 3 min。该最佳炮制工艺的验证试验结果
见表 4。
表 4 牛膝生品及各炮制品的含量
测定结果(n =5,%)
样品 总皂苷 齐墩果酸 β-脱皮甾酮
牛膝片 2. 56 0. 8976 0. 0560
传统酒牛膝 2. 82 0. 9637 0. 0616
微波炮制酒牛膝 2. 94 1. 0236 0. 0642
表 4 结果表明,牛膝生品经酒制后,总皂苷、齐
墩果酸和 β-脱皮甾酮含量均有一定的增加,与传统
酒牛膝比较,微波炮制品中 3 种成分含量均较高,表
明本实验确定的微波工艺具有一定的稳定性。
3 讨论
牛膝经酒炙后,补肝肾、强筋骨、祛瘀止痛的作
用增强,临床应用以酒牛膝最为常见。而传统酒炙
牛膝工艺,在操作中火候难以掌握,太过易炒焦,不
及则达不到炮制效果,严重影响其质量稳定性。探
索简单、可控的新型炮制工艺,是保证其临床应用有
效性的关键。本实验采用正交试验,多因素、多指标
的考察酒制牛膝微波炮制工艺,为其工艺创新提供
一种新的尝试。
酒炙牛膝在闷润的过程,表面有少量溶解物,在
炒至过程容易出现粘锅的现象,造成有效成分损失,
影响炮制品的质量。而微波炮制过程没有炒制的过
程,可避免该现象,减少成分的损失。从化学成分上
看,牛膝微波炮制品与传统酒炙品比较,各色谱峰没
有显著的变化,而总皂苷、齐墩果酸和 β-脱皮甾酮
等成分的含量均较高。外观上,微波炮制品因膨化
作用,其含水量较低,且外观完整,色泽均匀,焦化糊
化现象较少,完全符合牛膝炮制品的要求。整体上,
微波炮制工艺操作简单、可控,具有一定的科学性。
但由于其工艺变化较大,是否能完全替代传统工艺,
还需要进行药理方面的研究。要应用于工业化生
产,也还需要相关的设备支持,投入费用较为昂贵。
参 考 文 献
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收稿日期:2013-12-17
基金项目:中山市健康基地专项基金(2009H020)
作者简介:王艳(1981-),女,硕士,主要从事生物活性物质研究;Tel:0760-88207909,E-mail:sahara81@ 163. com。
* 通讯作者:田素英,Tel:0760-88207910,E-mail:zsxqtsy@ 126. com。
金樱根、茎炮制品抗菌抗炎作用研究
王 艳1,谢 蓉2,蔡丹燕1,田素英1*
(1. 广东药学院医药化工学院,广东 中山 528458;2. 广东省增城市人民医院,广东 增城 511300)
摘要 目的:研究金樱根、茎不同炮制品的抗菌、急性抗炎及慢性抗炎作用,为其药材质量标准及其炮制品的
临床使用提供依据。方法:金樱根、茎生品与炮制所得醋炙品、盐炙品、黑豆汁炙品及蜜炙品共 10 种样品水提取
物,观察其对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等 10 种菌的抗菌作用;用二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验研究急性抗炎
能力;用小鼠棉球肉芽肿试验观察慢性抗炎作用。结果:金樱根炮制品的抑菌作用强于茎炮制品,尤其是金樱根蜜
炙品抑菌作用明显;所有炮制品对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀均无抑制作用;金樱根生品、茎盐炙品、茎蜜炙品和根
蜜炙品对小鼠棉球肉芽肿的生成具有显著抑制作用。结论:金樱根蜜炙品有明显的抑菌作用和对小鼠慢性炎症的
抗炎作用。
关键词 金樱根;金樱茎;炮制品;抗菌;抗炎
中图分类号:R283. 3 /R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)08-1356-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2014. 08. 010
·6531· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 8 期 2014 年 8 月
Study on Antibacterial and Anti-inflammatory Effects of Different
Processed Products of Rosa laevigata Root and Stem
WANG Yan1,XIE Rong2,CAI Dan-yan1,TIAN Su-ying1
(1. School of Pharmaceutical and Chemical Engineering,Guangdong Pharmaceutical University,Zhongshan 528458,China;
2. Zengcheng Peoples Hospital,Zengcheng 511300,China)
Abstract Objective:To study the anti-inflammatory and antibacterial effects of different processed products of Rosa laevigata root
and stem. Methods:Different processed products were obtained from Rosa laevigata root and stem by frying with vinegar,salt,honey and
black bean juice. Their antibacterial effect was observed on bacteria such as Bacillus subtilis,Staphylococcus aureus and Escherichia coli;
The mice auricle swelling method was used in anti-inflammatory experiment by using xylene. The mice cotton granuloma method was
used to observe the chronic inflammatory effect. Results:The antibacterial effects of processed products of Rosa laevigata root were better
than that of the stem,especially the honey processed root. All processed products had no obvious effect on mouse auricular swelling. The
raw root,salt processed stem,honey processed stem and honey processed root of Rosa laevigata had an inhibitory effect on cotton-pellet
inducing mouse granuloma. Concllusion:The honey processed root of Rosa laevigata have significant antibacteral effect and anti-inflam-
matory effect on chronic infammation.
Key words Rosa laevigata Michx.;Root and stem;Processed products;Antibacterial;Anti-inflammatory
金樱根为双子叶蔷薇科金樱子 Rosa laevigata
Michx. 的干燥根或根皮〔1〕,性平,味酸、涩,归肾、脾
经,主要功效为固精涩肠。金樱根的主要成分为黄
酮类、鞣质类、多糖类、五环三萜皂苷及苷元等〔2,3〕,
具有抑菌、抗炎、抗氧化等作用〔1〕。有研究〔4,5〕表明
炮制方法对金樱根中总鞣质和总黄酮含量的影响较
大,总鞣质含量为:生品 (7. 53%) > 盐炙品
(5. 17%) > 醋 炙 品 (4. 93%) > 黑 豆 汁 炙 品
(4. 51%);总黄酮含量为:醋炙品(7. 83%)>盐炙
品(6. 63%) > 黑 豆 汁 炙 品 (6. 01%) > 生 品
(5. 88%)。金樱根依据不同疾病使用炮制品尚无
标准,金樱根炮制品的制备、各成分的提取分离技
术、药理活性和临床作用的机制均需更深入的研究。
本实验通过制备金樱根的不同炮制品进行抗菌、急
性抗炎、慢性抗炎药理作用的研究,并与金樱茎比
较,为金樱根、茎炮制品的临床应用、药材质量标准
制订提供依据。
1 材料
1. 1 药材 金樱根和金樱茎购于中山市同心药业
有限公司中药饮片分公司,经笔者田素英高级实验
师鉴定为金樱子 Rosa laevigata Michx. 的根和茎,批
号:1101096)。
1. 2 供试菌种 革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌 Ba-
cillus subtilis、金黄色葡萄球菌 Staphyloccocus aureus、
白色葡萄球菌 Staphylococcus albus、微球菌 Micrococ-
cus cohn、柠檬色葡萄球菌 Staphylococcus citreus 和革
兰氏阴性菌肺炎克雷伯菌 Klebsialla pneumoniae、伤
寒杆菌 Salmonella typhi、志贺氏痢疾杆菌 Shigella
dysenteriae、变形杆菌 Proteusbacillus vulgaris、大肠杆
菌 Escherichia coli,经分离培养,无感染。均由广东
药学院基础学院微生物学与免疫学实验室提供。
1. 3 药品 琼脂粉,蛋白胨,牛肉浸膏,酵母浸膏
(广东环凯生物科技有限公司);注射用青霉素钠
(华北制药股份有限公司,批号:A080506813);注射
用硫酸链霉素(深圳华药南方制药有限公司,批号:
N100504);硫酸庆大霉素注射液(天津药业集团新
关股份有限公司,批号:0911091);阿司匹林肠溶片
(拜耳医药保健有限公司,批号:BJ05083);二甲苯、
戊巴比妥钠等均为市售分析纯。炼蜜、食盐、醋、黑
豆均为市售。
1. 4 动物 昆明小鼠 240 只,SPF 级别,体质量 18
~ 23 g,雌雄各半。由广州中医药大学实验动物中
心提供,生产许可证号:SCXK(粤)2008-0020。饲养
条件:温度(20 ± 2)℃,相对湿度(60 ± 2)%,喂颗粒
标准饲料,自由饮水和摄食,每 2 d 更换 1 次垫料,
每 3 d更换 1 次水。正常饲养 3 d后供试,实验前小
鼠饮水、进食正常,状态良好。
2 方法与结果
2. 1 金樱根、茎炮制品的制备
2. 1. 1 金樱根、茎生品:取金樱根、茎原药材各 150
g粉碎备用。
2. 1. 2 金樱根、茎醋炙品:取金樱根、茎各 150 g,
用醋-水(2 ∶ 5)30 mL,闷润,待醋被吸尽后,置炒制
容器中,用中火炒至微黄,取出晾凉,即得。
2. 1. 3 金樱根、茎盐炙品:分别称取 3 g 食盐加清
水配成 45 mL盐水待用;将盐水与金樱根、茎各 150
g搅拌均匀,放置闷润,等待盐水被吸尽后,置炒制
容器中,用中火炒至微黄,取出晾凉,即得。
2. 1. 4 金樱根、茎黑豆汁炙品:取黑豆 20 g,煮约 4
h,取熬出汁液浓缩至约 30 g,黑豆渣再加水煮 3 h,
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取熬出汁液浓缩至约 20 g,合并得黑豆汁约 50 g。
金樱根、茎加入 4 倍质量的黑豆汁,搅拌均匀,放置
闷润,使黑豆汁深入药材内部,再置预热过的炒制容
器中,用中火炒至微黄,取出晾凉,即得。
2. 1. 5 金樱根、茎蜜炙品:取金樱根、茎各 150 g,
用炼蜜 30 g(炼蜜使用前加 2 ~ 3 倍量的开水稀
释),搅拌均匀,放置闷润,置炒制容器内,用文火加
热,炒至颜色加深不粘手时,取出晾凉,即得。
2. 2 抑菌试验 采用打洞法。在每个平板固体培
养基上用打孔器打 4 个孔,并做标记,在培养基上滴
加细菌液,用涂布棒涂抹均匀。同时设药物组、阴性
对照无菌水组、阳性对照组(抗生素:革兰氏阳性菌
用青霉素、革兰氏阴性菌用庆大霉素)。将平板放
入恒温培养箱,37 ℃下培养 16 ~ 18 h,观察培养基
有无抑菌圈及抑菌圈的直径大小,重复 3 次,用游标
卡尺测量抑菌圈直径,进行统计。比较各组试验结
果,见图 1、2。
图 1 金樱根、茎炮制品对革兰氏阴性菌的抑制作用
1. 金樱根生品 2. 金樱茎生品 3. 金樱根醋炙品 4. 金
樱茎醋炙品 5. 金樱根盐炙品 6. 金樱茎盐炙品 7. 金
樱根黑豆汁炙品 8. 金樱茎黑豆汁炙品 9. 金樱根蜜炙品
10. 金樱茎蜜炙品 11. 庆大霉素
图 2 金樱根、茎炮制品对革兰氏阳性菌的抑制作用
1. 金樱根生品 2. 金樱茎生品 3. 金樱根醋炙品 4. 金
樱茎醋炙品 5. 金樱根盐炙品 6. 金樱茎盐炙品 7. 金
樱根黑豆汁炙品 8. 金樱茎黑豆汁炙品 9. 金樱根蜜炙品
10. 金樱茎蜜炙品 11. 青霉素
2. 3 急性抗炎试验 采用二甲苯致小鼠耳肿胀
法。取健康小鼠 120 只,按表 1 随机分组,每组 10
只,各组分别灌胃给药,给药量为 0. 2 mL /10 g,1
次 /d,连续 6 d,末次给药 1 h后,于左耳廓两侧均匀
涂布二甲苯 50 μL,右耳廓作对照,致炎后 60 min剪
下耳廓,用 6 mm打孔器在左右耳对应部位取耳片,
用电子天平称重,以左右耳片质量差为肿胀度。比
较组间差异。使用 SPSS 17. 0 软件进行配对 t检验。
结果见表 1。
表 1 金樱根、茎生品及各炮制品急性
抗炎试验结果(珔x ± s,n = 10)
组别 剂量 /(g /kg) 肿胀度 /mg
空白对照(生理盐水)组 - 0. 90 ± 0. 47
阳性对照(阿司匹林)组 0. 3 0. 51 ± 0. 18*
金樱根生品组 20 1. 28 ± 1. 65
金樱茎生品组 20 1. 42 ± 2. 00
金樱根醋炙品组 20 0. 89 ± 0. 69
金樱茎醋炙品组 20 2. 64 ± 1. 71
金樱根盐炙品组 20 2. 00 ± 1. 23
金樱茎盐炙品组 20 1. 06 ± 0. 88
金樱根黑豆汁炙品组 20 1. 93 ± 0. 83
金樱茎黑豆汁炙品组 20 1. 57 ± 0. 94
金樱根蜜炙品组 20 1. 59 ± 1. 68
金樱茎蜜炙品组 20 2. 64 ± 1. 12
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05
2. 4 慢性抗炎试验 采用小鼠棉球肉芽肿法。取
健康小鼠 120 只,雌雄各半,按表 2 随机分组,每组
10 只,小鼠腹腔注射 0. 8%戊巴比妥钠溶液 0. 08
mL /10 g,待其进入麻醉状态后,将小鼠左前肢腋下
的毛剪掉,涂抹碘酒消毒,再用 70%乙醇脱碘,用手
术剪剪开约 0. 7 cm长的小口,用眼科镊将灭菌脱脂
棉球(重 20. 0 mg,每个棉球滴加终浓度为 100 U /
mL的青链霉素混合液)埋入皮下,缝合;术后 2 h,
按分组给小鼠灌胃给药,0. 2 mL /10 g,1 次 /d,连续
给药 7 d,期间每次给药都要检查缝合口是否被小鼠
抓开,及时重新缝合已被抓开的伤口,并且每天给小
鼠缝合口涂抹碘酒消毒,第 8 天将小鼠颈椎脱臼处
死,取出棉球,去除脂肪组织,60 ℃烘箱烘干,称重,
减去原棉球质量,得出肉芽肿净重。使用 SPSS 17. 0
软件进行配对 t检验。结果见表 2。
3 讨论
抑菌试验结果表明,金樱根炮制品的抗菌作用
强于对应的金樱茎炮制品;多数炮制品对枯草芽孢
杆菌和大肠杆菌的作用不明显甚至无抑菌作用;金
樱根蜜炙品对除了大肠杆菌以外的供试菌均有抑制
作用,对志贺氏痢疾杆菌的抑制作用尤其显著。急
性抗炎试验结果表明,所有炮制品对二甲苯引起的
肿胀没有明显的抑制作用。慢性抗炎试验结果表
明,金樱根生品、茎盐炙品、茎蜜炙品和根蜜炙品有
极显著抑制慢性炎症的作用(P < 0. 01);根盐炙品、
根黑豆汁炙品也具有显著的抑制作用(P < 0. 05),
抗炎效果与阳性药物相当,但均未显著优于阳性对
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表 2 金樱根、茎生品及各炮制品慢性
抗炎试验结果(珔x ± s,n = 10)
组别 剂量 /(g /kg)肉芽肿质量 /mg
空白对照(生理盐水)组 - 41. 17 ± 4. 22
阳性对照(阿司匹林)组 0. 2 34. 50 ± 4. 89*
金樱根生品组 20 33. 12 ± 2. 84**
金樱茎生品组 20 41. 39 ± 2. 63
金樱根醋炙品组 20 40. 10 ± 5. 31
金樱茎醋炙品组 20 40. 49 ± 7. 19
金樱根盐炙品组 20 35. 63 ± 4. 97*
金樱茎盐炙品组 20 33. 85 ± 8. 31**
金樱根黑豆汁炙品组 20 34. 74 ± 5. 32*
金樱茎黑豆汁炙品组 20 36. 09 ± 6. 21
金樱根蜜炙品组 20 34. 48 ± 2. 74**
金樱茎蜜炙品组 20 32. 15 ± 8. 14**
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
照药组。
临床上用于治疗由柠檬色葡萄球菌、金黄色葡
萄球菌、微球菌引起的疾病宜选用根盐炙品或根蜜
炙品效果较佳,而治疗肺炎克雷伯菌引起的疾病宜
选用根生品、根盐炙品或根蜜炙品。选用金樱根生
品、茎盐炙品、茎蜜炙品和根蜜炙品治疗慢性炎症效
果更佳。综合而言,金樱根蜜炙品具有较好的抗菌
和抗慢性炎症的作用。金樱根炮制品的制备标准、
各成分的提取分离技术、药理作用和临床作用的机
制尚有待进一步研究。
参 考 文 献
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收稿日期:2013-12-30
基金项目:湖南省科技厅重点项目(2012TF1005)
作者简介:张水寒(1966-),女,研究员,主要从事中药制剂及分析研究;Tel:13637400650,E-mail:zhangshuihan0220@ 126. com。
* 通讯作者:黄惠勇,E-mail:hntcmakj@ 163. com。
Box-Behnken效应面法优选枳壳切制工艺
张水寒,黄惠勇* ,肖 娟,蔡 萍,万 丹,杨 欣
(湖南省中医药研究院,湖南 长沙 410006)
摘要 目的:优选枳壳的最佳切制工艺。方法:以柚皮苷、新橙皮苷和挥发油含量为评价指标,采用 Box-Be-
hnken效应面法考察浸泡时间、闷润时间、饮片厚度和干燥温度对枳壳饮片质量的影响,优选出枳壳切制工艺参数。
结果:优选得到枳壳切制的最佳工艺参数为浸泡 2 h,闷润 2 h,用切片机切成 2 mm的薄片,55 ℃下干燥后筛去碎落
的瓤核即可。结论:应用 Box-Behnken效应面法优选得到的枳壳切制工艺经检验稳定可行,为提高枳壳饮片质量提
供了科学依据。
关键词 枳壳;Box-Behnken效应面法;切制;柚皮苷;综合评分法
中图分类号:R283. 3 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)08-1359-06
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2014. 08. 011
枳壳为芸香科植物酸橙 Citrus anrantium L. 及
其栽培变种的干燥未成熟果实。味苦、辛、酸,性微
寒,归脾、胃经,具有理气宽中、行滞消胀的功效,用
于胸胁气滞、胀满疼痛、食积不化、痰饮内停、脏器下
垂等〔1〕。枳壳临床应用需要炮制成饮片方可,枳壳
饮片切制过程中常常存在浸泡太久有效成分易流
失、闷润太久易发霉变质等问题,为了规范枳壳的切
制工艺,优选出枳壳具体的切制工艺参数,本实验采
用 Box-Behnken效应面法,以柚皮苷、新橙皮苷与挥
发油含量为指标,分别考察不同浸泡时间、闷润时
间、饮片厚度和干燥温度对枳壳饮片质量的影响,优
选得到枳壳饮片切制工艺参数,为枳壳饮片切制工
艺的规范提供科学依据,从而保证其临床应用的安
全、有效。
1 仪器与试药
Agillent 1200 Series 高效液相色谱仪:四元泵、
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